1.4.5酶活力计算 将反应完的溶液在室温下静置10 min达澄清后在分光光度计415 nm波长处测定样品空白的吸光值和样品溶液的吸光值。 其原理是利用植酸酶水解植酸盐释放无机磷,通过加入酸性钼-钒试剂,使水解反应停止,同时与水解释放出来的无机磷产生颜色反应,形成黄色的钒钼磷络合物,在波长415 nm下进行比色测定磷的含量。以标准磷溶液(或标准植酸酶)为参照,计算酶活力。 酶活力计算公式:U=F×C/30m式中:U——试样中植酸酶的活性(U/g);C——根据实际样液的吸光值由直线回归方程计算出的磷浓度;F——试样溶液反应前的总稀释倍数;m——试样质量(g);30——反应时间(min)。 以相应不加热的酶活力作对照(100%),测定植酸酶活力保留率。 酶活力保留率(%)=(加热后酶活/不加热的原酶活性)×100%=(85 ℃后反应得到的OD415/不加热原酶样反应后得到的OD415)×100%以不加海藻糖的酶活力保留率为对比,比较海藻糖对植酸酶热稳定性的影响。根据公式计算酶活力。 2 数据计算与结果分析 2.1 数据计算(见表4)C1=(0.170-0.035)/0.035=3.857,U1=6 000×3.857/30=771.4;C2=(0.058-0.035)/0.035=0.657,U2=6 000×0.657/30=131.4;C3=(0.103-0.035)/0.035=1.943,U3=6 000×1.943/30=388.6;C4=(0.112-0.035)/0.035=2.2,U4=6 000×2.2/30=440;C5=(0.126-0.035)/0.035=2.6,U5=6 000×2.6/30=520。 酶活保留率U'2=(U2/U1)×100%=(131.4/771.4)×100=17.1%;酶活保留率U'3=(U3/U1)×100%=(388.6/771.4)×100=53.4%;酶活保留率U'4=(U4/U1)×100%=(440/771.4)×100=57.1%;酶活保留率U'5=(U5/U1)×100%=(520/771.4)×100=67.4%。 |