| 海藻糖（Trehalose）又名茧蜜糖、蘑菇糖、漏芦糖或簟糖，是在动物、植物、微生物中广泛分布的一种低聚糖，当生物处于逆境时，其含量增加，是一种典型的应激代谢产物。海藻糖由两分子的吡喃葡萄糖单体以α－1，1－糖苷键连接而成，其化学名为α－D－吡喃葡萄糖基-α-D－吡喃葡萄糖苷，分子式为C12H12O11，相对分子量为378.33（含两分子结晶水），熔点为97 ℃，加热会失去结晶水。由于其分子结构对称，无半缩醛基，所以既无还原性，也无变旋光性。海藻糖除了具有低聚糖的一般特性（低热值、抗龋齿性、非消化性、有膳食纤维的作用、有利于双歧杆菌的增殖）外，还有其独特的物理化学特性，甜度为蔗糖的45％；耐热耐酸，是二糖中最稳定的。既使与氨基酸、蛋白质等混合加热也不会发生美拉德反应，一般的酶不能将其水解。海藻糖具有很好的防腐性，对逆境具有高抗性，许多含海藻糖的动植物完全干燥后仍维持其活性，一旦遇水后，立即复活。海藻糖的生物保护机制一般认为是其生物保护机构能强力地束缚水分子，与脂膜质共同拥有结合水或海藻糖本身起到代替膜结合水的作用，从而防止蛋白膜的变性。由于其具有抗逆、抗寒、抗旱、耐高温、吸水、低甜度、保湿、生物保护等特点，使得他在食品、保健品、医药、化妆品、农业等方面有很大的应用前景，已成为近年来研究的热点。 植酸酶是一种能水解植酸的酶类,具有很多生理功能,饲料中添加植酸酶,可以提高磷的利用率,保护环境,植酸酶在畜禽养殖上的应用已基本得到肯定。目前植酸酶虽然广泛应用,但在制粒过程中酶活的丧失或下降始终是制约它应用的一个问题,在制粒高温(75~95 ℃)过程中,植酸酶的活性将会大幅降低。目前已对生物提取的植酸酶进行了包被,加入了一些化学物质,提高了其高温条件下的稳定性,其中海藻糖已经被作为一种包被成分在商品植酸酶中使用,本试验选用海藻糖和商品植酸酶为材料来研究海藻糖对商品植酸酶的耐高温的影响。 1 材料与方法1.1 主要设备仪器恒温水浴锅：（37±0.1） ℃；分光光度计(有10 mm比色皿，可在415 nm下测定吸光度)；EMS－9A型磁力搅拌器；PHS－3C型酸度计（可精确至小数点后两位）；电炉子、电子秤、移液管、移液枪(1、5 ml)、试管（5、10、20 ml）、烧杯（5、10 ml） 、量筒、温度计（1~100 ℃）等。 1.2 主要试剂及配制方法商品用植酸酶(黄褐色小颗粒,活性为5 000 U/g);植酸钠、海藻糖均购自北京拜尔迪生物技术有限公司。 乙酸缓冲液：称取30 g三水合乙酸钠和0.126 g无水氯化钙，溶解在约500 ml蒸馏水中，用冰醋酸调节pH值至5.5，定容至1 000 ml，保存期1周。 植酸钠溶液(7.5 mmol/l)：称取0.693 g肌醇六磷酸钠(Sigma公司生产)于100 ml容量瓶中,用乙酸缓冲液溶解并定容至刻度，现用现配。 硝酸溶液：量取100 ml浓度为65%的浓硝酸与200 ml蒸馏水混合。 钼酸铵试剂：称取100 g钼酸铵(天津市化学试剂四厂生产),溶解在800 ml蒸馏水，再加入10 ml 25%的氨水，定容至1 000 ml，储存于暗处。 钒酸铵试剂：称取0.235 g钒酸铵，溶解在70 ml水中，预热至55 ℃，加入2 ml稀硝酸，定容至100 ml储存于暗处。避光条件下保存1周有效。 颜色终止液：移取2份硝酸溶液、1份钼酸铵溶液，1份钒酸铵溶液混合后使用，现用现配。 基准物（磷酸二氢钾，购自天津市北方天医化学试剂厂），各种常用玻璃器皿（需不含磷）。 |
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