微生态制剂对水产动物的生物活性研究

华牧伟业

　　微生态制剂对水产动物的生物活性研究
　　（哈尔滨中科生物工程有限公司  赵前）
　　摘要：为测定微生态制剂“高免肽”对水产动物抗病、促生长功效以及生产应用价值。首选药敏试验结果表明，微生态制剂“高免肽”对大肠杆菌K99、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌最小抑菌菌浓度分别为0.78、3.12 和6.25 μg/mL。选择大黄鱼、真鲷、白鲢、草鱼、花鲢鱼和青虾为实验动物，在基础日粮中按比例0.1%添加高免肽。监测实验鱼虾成活率、日增重、饵料投入比等生产性能比较指标。结果显示，高免肽对实验鱼虾成活率平均提高10%以上，青虾养殖效果显着。
　　关键词：微生态、高免肽、水产动物、生物活性、生产性能
　　高免肽是由酵母细胞壁、生物多糖、生物抗菌肽、生物碱、苷类、蒽醌类及其还原衍生物和多种活性肽组成，具有提高免疫力、提高消化率、杀灭细菌真菌和原虫、抵制病毒侵扰等作用，是生物提高非特异性免疫的不可缺少的重要组成成分。与抗生素相比，具有高效、无耐药性、无污染、无毒副作用等优点，符合绿色环保饲料的要求，是理想的抗生素替代品。高免肽具有活性高、分子量小、热稳定性好、水溶性好和生物利用度高等特点。实验通过在饲料中添加高免肽，比较对大黄鱼、真鲷、白鲢、草鱼、花鲢鱼和青虾的日平均增重、发病率、死亡率、饵料系数等生产性能影响，为高免肽在水产养殖中的应用提供理论依据。
　　1 材料、方法、时间与地点
　　1.1 实验材料
　　试验用高免肽由哈尔滨中科生物工程有限公司提供，批号黑饲添字（2009）251015，阴凉、干燥处贮藏。
　　实验用菌株：大肠杆菌K99、金黄色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢杆菌均由国家兽用生物制品工程技术研究中心惠赠。
　　1.2 时间和地点
　　试验地点：江苏省盐城市射阳县黄沙港某养殖场。
　　试验时间：2011年3月25日-2011年4月24日。
　　1.3 高免肽最小抑菌浓度的测定
　　采用微量稀释法进行测定。把处于对数生长期OD600≈0.5（细菌计数约10^6）的指示菌用LB 培养液稀释到OD600≈0.05，分别接种到96 孔细胞培养板上，每孔90 μL。将高免肽用pH 值6.0 的0.1 mol/LPBS 倍比稀释。各取10 μL 分别加入培养孔中，混匀，每组重复3 个孔。设加LB 培养液为阴性对照，接种细菌的为阳性对照。置37 ℃培养箱孵育12 h后取出，用自动酶标仪测量培养液的OD600值，将完全抑制菌体生长的最低蛋白浓度确定为最小抑菌菌浓度（MIC）。
　　1.4 实验动物的选择与养殖
　　大黄鱼、真鲷采用海水网箱养殖，全冰鲜饲料喂养。实验组按每吨饲料添加高免肽1kg，饲养30 d，每天抽样检查。对照组饲喂不添加任何添加物的冰鲜饲料。
　　白鲢、草鱼、花鲢鱼采用池塘养殖方式，水深0.8～1.0 m，每667 m2 投入鱼苗10 万尾，基础饵料为黄豆浆，实验组按每吨饲料添加高免肽1kg，饲养25 d，每天抽样检查。对照组饲喂不添加任何药物。
　　青虾苗由长江直接捕捞的抱仔青虾所繁育的虾苗（长江虾苗），每池平均放养规格7 000 尾/kg，每口池放养数量约6 万尾，重量为8.6 kg。每日2 次喂料，基础饲料为：豆粉、鱼粉、皮糠、次粉、贝壳粉、矿物质、螺旋藻混合物。实验组添加抗菌肽，按每吨饲料添加抗菌肽1kg。对照组饲喂不添加任何添加物的基础饲料。
　　1.5 饲养管理
　　坚持每天2 次巡池，检查实验鱼虾摄食情况，及时调整日投饵量，严格检查排水过滤设施是否破损，及时捞出残饵杂物、多余水草，捕捉蛙、蛇等敌害生物。保证微流水的畅通、有充足的氧气。定期使用生石灰进行全池泼洒消毒，生石灰用量为每口池
　　每次7.5 kg。
　　1.6 生产性能指标测定
　　每天采集数据至实验结束，统计成活率、亩平均产量、平均个体重，计算饵料报酬等，并对发病率进行λ？卡方显着性分析。ndm
　　2 结果
　　2.1 高免肽的最小抑菌浓度
　　通过微量稀释法测得高免肽对大肠杆菌K99、金黄色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢杆菌的MIC 分别为0.78、3.12 和6.25 μg/mL。
　　2.2 大黄鱼和真鲷养殖结果
　　饲养30 d，高免肽实验组鱼苗色泽鲜艳，大小均一。大黄鱼实验组的发病率为15.1%，对照组为26.3%，下降了11.2%。真鲷实验组的发病率为17.6%，对照组为20.4%，下降了2.8%。可见高免肽显着或极显着降低大黄鱼和真鲷的发病率（P<0.05）或（P<0.01）。实验组大黄鱼的日增重比对照组高0.14 g/d，真鲷的日增重比对照组高0.17 g/d，表现出较好的生产性能（表1）。
　　表1 高免肽对大黄鱼、真鲷生产性能的影响

组别		日平均增重（g/d）	发病率 （%）	死亡率 （%）	饵料系数	投入产出比
大黄鱼	实验组	1.42	15.1*	7.6	8.64	1:1.227
	对照组	1.28	26.3	13.2	9.33	1:1.163
真鲷	实验组	1.62	17.6*	3.4	6.52	1:1.281
	对照组	1.45	20.4	5.1	8.41	1:1.205

　　2.3 白鲢、草鱼和花鲢鱼养殖结果见表2.
　　表2 高免肽对白鲢、草鱼和花鲢鱼生产性能的影响

组别		数量 （万尾）	成活率 （%）	平均产量 （kg/亩）	平均体重 （g/尾）
白鲢鱼	实验组	14	48.77*	0.45	1.010
	对照组	14	40.00	0.38	0.801
草鱼	实验组	10	22.75*	20.54	1.021
	对照组	10	16.80	17.12	0.999
花鲢鱼	实验组	10	68.01*	36.65	0.554
	对照组	10	53.50	29.74	0.5445

　　表2可以看出应用高免肽后，白鲢的成活率由40%提高至48.77%，草鱼的成活率由16.8%提高至22.75%，花鲢鱼的成活率由53.5%提高至68.01%。各实验组和对照组比较分别提高了21.93%、35.42%和24.12%。λ？卡方分析表明，高免肽极显着提高白鲢、草鱼和花鲢鱼的成活率（P<0.01）。草鱼和花鲢的饵料系数分别降低18.7%和22.9%，每亩平均产量也明显提高18.42%、19.98%、23.23%。
　　2.4 青虾养殖结果见表3.
　　表2 高免肽对青虾生产性能的影响

组别	体长（cm)	平均产量（kg/亩）
试验组	2.3	101
对照组	1.4	58.5

　


    　由表3可知，至实验期结束，实验组青虾平均增长了2.3cm，对照组为1.4 cm。实验组的平均增长是对照组的1.64 倍，比对照组提高了64.29%。实验组平均产量101 kg/667 m2，对照组平均产量58.5 kg/亩，实验组平均产量是对照组的1.73 倍，比对照组提高72.65%。
　　3 讨论
　　高免肽是机体非特异性免疫不可缺少的重要组成部分，可以使细菌的细胞膜去极化或者形成“孔洞”，造成细胞内容物外流或者肽分子进入细胞内部与DNA、RNA 等形成靶向作用，进而杀死细菌。实验结果显示，体外高免肽对环境中常见的细菌大肠杆菌K99、金黄色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢杆菌敏感，最小抑菌菌浓度分别为0.78、3.12 和6.25 μg/mL。添加进饲料中高免肽仍具有显着的抗菌活性，可以显着提高鱼苗的抗病能力。将高免肽用于鱼苗培育阶段，平均成活率可以提高10%以上。同时也发现，高免肽也能明显提高鱼、虾的生长速度及饲料利用效率，日增重平均增加，饵料报酬亦增加。
　　高免肽除具有抗菌、杀菌作用，对病毒、真菌、寄生虫等其他病原微生物具有较强的抑制作用，还能与宿主体内某些阳离子蛋白、溶菌酶或抗生素协同作用，增强其抗菌效应。另外，高免肽生物学活性稳定，在高离子强度和酸、碱环境中或100 ℃加热10 min 时仍具有杀菌抑菌作用。实验用高免肽可耐高温（150 ℃以上），能耐受饲料制粒时的高温。同时，高免肽是一种无毒、无害、绿色环保的产品，还具有不易出现耐药性突变、分子量小、热稳定性好、水溶性好、作用迅速等特点。