有关大肠杆菌工业发酵

mondl

有谁有大肠杆菌工业发酵的资料的

转基因大肠杆菌，通过基因工程手段，设计一段核苷酸序列移植入大肠杆菌，用于生产所需的目的蛋白 。想了解下有谁做过这方面研究的，能不能分享下。

或者发到我邮箱：mondl@163.com

谢谢了

mondl 于 2009-9-12 09:55 补充以下内容

希望知道的朋友帮下忙，或者开贴出售，不过穷人，不要太贵:haoa:

孤世才子

期待高手回答，，，，，，，，，，

mondl

目的产品用于饲料方面，不是医药、食品，相对要求要松点，望达人不吝赐教

叶赫娜兰.孤城

我们实验室的课题啊。（微生物技术国家重点实验室，国家糖工程技术研究中心）在国内差不多是专长。

你说那一块啊，是菌株构建还是发酵过程优化啊？

mondl

发酵过程优化吧

菌种是别人提供的，没接触过这个，要写相关内容不知道如何入手。。。。

提供者是实验室培养，说实验室发酵跟工业发酵相差比较大，他对工业发酵也不了解

mondl

引用自叶赫娜兰-孤城 发表于 2009-9-18 10:58的内容
我们实验室的课题啊。（微生物技术国家重点实验室，国家糖工程技术研究中心）在国内差不多是专长。

你说那一块啊，是菌株构建还是发酵过程优化啊？

现在的转基因菌种是人为移植一段编写的核苷酸序列段，设计核苷酸序列在菌体中表现为蛋白质（目标小肽不断重复），在体内蛋白酶酶解为目标小肽.
不知道这个发酵过程怎么控制的好

烦李博士帮帮忙了

叶赫娜兰.孤城

1,菌株构建好没有，目前表达量多少？可以进入优化程序了吗？
2，菌株稳定性如何？使用整合到基因组还是质粒？
3，诱导机制？
4，用大肠杆菌？是包涵体吗？如不是，似乎用酵母表达更合理些。
5，这个短肽是什么？

望认真回答一下，我看能帮您些什么。

mondl

引用自叶赫娜兰-孤城 发表于 2009-9-21 08:48的内容
1,菌株构建好没有，目前表达量多少？可以进入优化程序了吗？
2，菌株稳定性如何？使用整合到基因组还是质粒？
3，诱导机制？
4，用大肠杆菌？是包涵体吗？如不是，似乎用酵母表达更合理些。
5，这个短肽是什么？

1. 菌株构建好了的，目前实验室表达量是12g/L。目的蛋白占总蛋白的40%左右。
2. 实验室发酵菌株稳定性达到要求，Gn多聚体核苷酸序列是克隆到pET2a质粒上的。
3. 这个不懂。。。。。原文写下来吧：将pR-12Gn多聚体核苷酸序列克隆到pET32a质粒上，获得原核表达载体pET-12Gn，转化大肠杆菌BL21（DE3），经阳性克隆检测并测序证明序列正确后，在IPTG诱导下进行蛋白表达。
4. 这个我也不是很清楚，是别人实验室提供的数据。。。。他们貌似选过不少菌种，最后选择大肠杆菌做母体。（根据大肠杆菌偏爱合成含特异胰蛋白酶和胃蛋白酶酶切点的Gly-Gln二肽核苷酸序列Gn，并克隆至pRSET A质粒中，采用串联重复策略获得pR-12Gn重组质粒。）
5. 这个短肽是Gly-Gln二肽，不是直接表达，在菌体获取聚合蛋白，经酶切后获取小肽。

叶赫娜兰.孤城

这个水平（12G）可以转入发酵了。想做到什么水平呢？

是发文章的水平还是工业水平。如是前者，要有代谢流分析和比较时髦点的算法----也就是先做试验，自己做出明确目标后，把算法凑上----就行了。
如是后者，则要传统分析结合代谢流分析，选择工艺路线等等一步一步往下走。

不管怎样，要做N批发酵，必须要有比较先进的发酵罐。

mondl

这个按照你的经验，理论上用什么类型的发酵罐跟按照什么样的发酵流程比较合理？

主要作用是在于写文章，但是没接触过工业发酵，对这方面一窍不通。。。实验室发酵跟工业发酵相差也比较大，可比性不高。。。。