测真蛋白时需要主意的因素有哪几个

swordman33

还有一个问题，测真蛋白时需要主意的因素有哪几个？
过滤说是用倾斜法过滤，倾斜法怎么操作？
加入硫酸铜和氢氧化钠搅拌后应该是什么颜色？
配出的硫酸铜三四天后有白色絮状沉淀，正常么？
过滤时有的过滤特别慢，滤纸正常，还有什么原因，七八个小时过滤不完，是粉碎得太细了么？都有什么可能？

littlepigwsw

怎么没人回答呢?期待.....

xphxyk

应是氢氧化铜的色。我现在使用的抽滤的办法否则太慢

理想

我现在用的是普通滤纸漏斗过滤,如果时间太慢,将漏斗稍微提升一点;你的硫酸铜可能有问题,是不是配制是没有加热充分溶解还是蒸馏水有问题?如果不好,建议重新配制~!

理想

样品+CUSO4+NAOH的颜色是灰蓝色,沉淀是CU+蛋白形成的

粗蛋白

真蛋白测定—硫酸铜沉淀法
1、原理：
    蛋白质能变成不溶于水的状态，而与其它含氮化合物分离开来。当加入沉淀剂（如硫酸铜），然后经过过滤，用水洗去沉淀中的盐类及溶解性的含氮物，按照测粗蛋白的方法，即得样品中的真蛋白含量。
2、操作步骤：
１）准确称取样品2克左右分别放于2只300ml烧杯中用50ml蒸馏水数次冲洗，边冲边搅拌，然后将溶液加热至沸。
２）向烧杯内倒入25ml 6%硫酸铜溶液略搅拌，再徐徐加入25ml 1.25% NaOH溶液搅动(不要加得太快)。
３）用表面皿将烧杯盖上静置2小时，然后用两层定量滤纸慢速过滤，用热蒸馏水冲洗烧杯数次，再用热蒸馏水冲洗沉淀物，滤液用氯化钡溶液检查不混浊后,  将漏斗连同滤纸置50—80℃烘至略潮(约1.5小时)。
４）消化:同测粗蛋白，但易溢出，操作者要守在旁边观察，消化液不能加多也不能少。
3、计算：（同粗蛋白）
附试剂配制：    1）6%硫酸铜：称取6g硫酸铜溶于100ml水中。
                2）1%氯化钡：称1g氯化钡溶于100ml水中。

最近接手化验室工作,我就按照上述过程操作,  过滤倒不是很慢,但就是消煮后发现全部结晶了,可能是自己用硫酸太少或催化剂加多了,  第一次做是以失败告终, 检测结果为0,凯氏瓶还烧爆一个:P

zxm

应该是用硫酸太少，至少要用20ML以上

tony2005428

1、原理
      硫酸铜在碱性溶液中，可将蛋白质沉淀，且不溶于热水过滤和洗涤后，可将纯蛋白质和非蛋白质含蛋物分离，再用凯氏定蛋法测定沉淀中的蛋白质含量。
2、仪器设备
      （1）烧杯：200ml。
      （2）定性滤纸。
      （3）其他设备与粗蛋白质测定法的相同。
3、试剂及配制
      （1）100g/L硫酸铜溶液：分析纯硫酸铜（CuSO4·5H2O）10g溶于100mL蒸馏水中。
      （2）25g/L氢氧化钠溶液：将2.5g分析纯氢氧化钠溶于100mL蒸馏水中。
            （3）10g/L氯化钡溶液：1g氯化钡（BaCl·H2O）溶于100mL蒸馏水中。
            （4）2moL/盐酸溶液。
            （5）其他试剂预一般粗蛋白测定法的相同。
4、测定步骤
               准确称取试样1g左右（精确到0.0001g），置于200mL烧杯中，加50mL蒸馏水，加热至沸，加入20mL硫酸铜溶液，20mL氢氧化钠溶液（加入以上两种溶液多要缓慢，且要边加入边搅拌），用玻璃棒充分搅拌，放置1h以上，用倾斜过滤（用定型滤纸），然活后用60~80℃热蒸馏水洗涤沉淀5~6次，用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤液，直至不生成白色沉淀为止。将沉淀和滤纸放在65℃烘箱干燥2h，然后全部转移到凯氏烧瓶中，消化后进行定蛋测定。
5、结果计算
       同粗蛋白测定。

粗蛋白

我们所用的硫酸铜和氢氧化钠的浓度不一样. 浓度高了过滤很慢,所以将浓度都降了一半.

tony2005428

#9
浓度不影响过滤吧

#1
1、倾斜法过滤：是否就是加滤纸的V型漏斗过滤呢？？具体的我也不是很清楚，我们就是这样操作的。
2、加入硫酸铜和氢氧化钠搅拌后应该是什么颜色？
原料不同颜色有所差异，不过颜色好像不影响真蛋白的测定。
3、过滤时有的过滤特别慢？
你是否加入硫酸铜和氢氧化钠后直接过滤呢？？要用玻璃棒充分搅拌，放置1h以上，后再过滤，此时滤液不混浊，有上清液；若直接过滤时溶液混浊，成糊状，非常慢。