检测益生素的几种办法

中ke小饭

益生菌不仅有很多种类（如芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌），其检测方法也是非常之多。对不同的益生素，需要选择适当的方法来检测、计数。

目前常用的检测是显微镜直接计数法和平板计数法两种，显微镜直接计数法的最大优点就是快速，而且此方法可以通用，即不同的益生菌种类都可以用同一方法检测其数量；但其也有诸多缺点，如不能区分死菌和活菌，也不能区分形状类似的不同益生菌，故其只能作为一种粗略、简单的方法。而平板计数法却可以克服显微镜计数法的缺点，但其对操作人员素质及操作能力要求都比较高，需要比较专业人员来操作。
针对目前选择以平板计数来进行测量益生菌的含量为主，本文也就此方法作一简单探讨。
计数培养的稀释度选择
根据产品说明选择适宜的稀释度。
采用玻片直接涂布法，即在洁净的玻片上划1cm2正方形，然后吸取经5～10倍稀释的检样0.01mL涂布在方框内，干燥固定后，先用甲醇处理5min再进行革兰氏染色、镜检，判断大概菌数和菌种，则可预测分离培养应选择的培养基和稀释倍数，如不能判断，即认为每克样品含菌数小于105。
培养基的选择
根据涂布的预测与产品说明，选择相应的培养基。
检测的操作
稀释：
准确称取益生素样品10g，放入装有90mL无菌水的玻璃瓶中，用手或振荡机振荡20min，静置约20min，即成10-1稀释液；再用10mL无菌吸管，吸取10-1菌液10mL移入装有90mL无菌水的玻璃瓶中，充分震荡，即成10-2稀释液；以此类推，每次更换吸管连续稀释，直到制成适当稀释度的菌悬液。
平板接种：
用1mL无菌吸管吸取适当稀释度的菌悬液1mL到一个灭菌平皿中，接种好三个平皿，再在培养皿中分别倒入已融化并冷却至45-50℃左右的培养基，盖好盖子，趁热轻轻转动培养皿，使菌液与培养基混合均匀，冷凝后倒置37℃下培养48～72h后长出菌落后即可计数。
结果计算及说明：
将三个平皿的平均菌落数乘以稀释倍数，即为每g益生素中所含的活菌数（如在10-8有30个菌落，即可计为3.0×109cfu/g或者cfu/mL）。选取菌落数在30-300之间的平皿作为菌落总数测定的标准。
讨论
益生素菌种的质量是微生态调节剂生产的关键和质量保证，因此在生产前必须作如下鉴定：
(1)菌株染色形态与菌落均应具典型特征；
(2)生化反应与糖发酵均应符合伯杰氏细菌分类的特征；
(3)对于乳酸菌类须测定其代谢产物中的有机酸；
(4)血清学检查、凝聚试验，效价不低于原效价的1/2；
(5)毒性试验:浓菌液给小白鼠腹腔注射或灌胃试验，小白鼠应无不良反应出现；
(6)必要时作遗传学特征的鉴定。