90年代以来,人们对植酸酶的特性及其在畜禽中的应用,进行了较深入的研究,大量试验和生产证明,单胃动物饲料中添加植酸酶,可使动物对植酸磷的利用率提高9%~24%个百分点,同时饲料中的微量元素如Zn、Mn、Cu的利用率,也得到不同程度的提高。然而植酸酶在提高蛋白质氨基酸利用率方面的作用,尚未得到完全证实,本文从理论上信纸述植酸酶影响蛋白质氨基酸利用率的可能性,并介绍一些初步试验结果。 1 植酸酶提高蛋白质氨基酸利用率的理论依据 植酸是一种强酸,具有很强的螯合能力,其6个带负电的磷酸根基轩,除与金属阳离子结合外,还可与蛋白质分子进行有效的络合,从而降低动物对蛋白质的消化率(Gifford等,1990;Pallauf等,1995)。当pH低于蛋白质的等电点时,蛋白质带正电荷,由于强烈的静电作用,易与带负电的植酸形成不溶性复合物(Cheryan,1980;Reddy等1982);蛋白质上带正电荷的基团,很可能是赖氨酸的ε-氨基、精氨酸和组氨酸的胍基;当pH高于蛋白质等电点时,蛋白质的游离羧基和组氨酸上未质子化的咪党代会基带负电荷,此时蛋白质则以多价阳离子如Ca2+、Ng2+、Zn2+等为桥,与植酸形成三元复合物。植酸蛋白二元或三元复合物的形成,会改变蛋白质的结构,降低其溶解度,并进而影响其消化率和功能。从理论上讲,植酸酶水解西酸释放出磷的同时,可将与植酸络合的蛋白质释放出来,便于消化道分泌的各种蛋白酶作用,从而使其消化利用率得到提高。另外植酸可与内源性蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等络合,降低酶活性,从而导致蛋白质等消化率降低。 2 体外试验 2.1 植酸与蛋白质络合试验 见表1。如表1所示,蛋白质与植酸是否能形成沉淀,强烈依赖于溶液的pH值,当pH为2时,除米糖蛋白和豆饼蛋白的蛋白质溶解率(溶液中可溶蛋白质占总蛋白质的比率)为22%、91%外,其他来源蛋白质(酪蛋白、玉米、菜籽、葵花籽)的溶解率均达100%。添加植酸后,菜籽蛋白溶解率降至63%,玉米、细米糠、葵花籽蛋白溶解率分别降到28%、16%、26%,酪蛋白和豆粕蛋白的溶解率受植酸影响最大,分别降低到1%和2%。若植酸在加入到蛋白质溶液前,先与过量植酸酶水浴,则可阻止络合物沉淀的产生,细米糠蛋白质溶解率提高到57%,远高于未水浴时的溶解率,其他来源蛋白质的溶解率恢复到83%~100%。pH为3时,蛋白质溶解率的变化规律与此同时pH为2时相似,只是绝对值不同。 表1 添加植酸酶与植酸对蛋白质溶液中蛋白质相对数量的影响 | pH=2 | pH=3 | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | 酪蛋白 | 93 | 1 | 100 | 4 | 0 | 3 | 玉米 | 100 | 28 | 100 | 42 | 33 | 42 | 细米糠 | 57 | 16 | 22 | 47 | 33 | 39 | 菜籽 | 95 | 63 | 91 | 82 | 81 | 89 | 葵花籽 | 90 | 26 | 100 | 28 | 23 | 34 | 豆粕 | 99 | 2 | 100 | 60 | 32 | 60 |
注:Ⅰ蛋白质+植酸+植酸酶;Ⅱ蛋白质+植酸;Ⅲ蛋白质 2.2 消化试验 体外消化试验证明,植酸含量与蛋白质消化率呈负相关,特别是蛋白质含量较高的植物性饲料,其蛋白质消化率随植酸含量降低而增高(Knuckles,1985)。Jongbloed(1998)的试验表明在蛋白质与植酸沉淀形成后,加入胃蛋白酶和植酸酶,沉淀消失速度比单独加入胃蛋白酶快得多。即使胃蛋白酶浓度再提高10倍,添加植酸酶仍有作用。菜籽粕需要植酸酶从沉淀中溶解蛋白质,仅有胃蛋白酶时却无此作用。本试验证明,植酸酶能够裂解植酸蛋白复合物,促进蛋白质的消化利用。 3 体内试验 目前关于单胃动物饲料中添加植酸酶,能改善蛋白质、氨基酸利用率的体内试验报道较少,不同研究所得结果不尽一致。Ketaren等(1993)向幼猪日粮中添加植酸酶,增加了蛋白质的沉积和存留,猪的氮吸收率,因植酸酶的添加而增加(Qian,1994)。Ketaren等(1991)和Mroz等(1991)报道,添加植酸酶,可明显提高蛋白质和氨基酸在猪小肠和大肠中的消化率。Mroz等(1994)研究发现,植酸酶能提高猪回肠氮消化率和氮存留,800U/kg黑曲霉植酸酶可使氮沉积增加,日氮排出量分别减少5.5g,日粮干物质、有机物、粗蛋白质的回肠表观消化率,分别提高1.2%~1.9%、1.1%~1.9%、1.6%~2.5%,赖氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、色氨酸异亮氨酸、苏氨酸等氨基酸的回肠表观消化率,提高幅度分别为0.9%~2.4%、1.1%~3.9%、-0.4%~3.6%、1.2%~4.4%、-0.3%~2.1%和-1.8%~2.9%。Poulson(1994)报道,植酸酶对生长猪磷、钙、蛋白质利用率有显著影响。对氨基酸缺乏日粮,Young等(1993)报道,仔猪日粮中添加500U/kg植酸酶,提高平均日增重15.56%,饲料转化率9.76%,氮利用率7.64%。Nottingham大学研究表明,植酸酶可使回肠氮消化率由55%提高到68%,总氮消化率从81%提高到86%。Lei等(1993)报道,仔猪日粮中添加750U/kg和1200U/kg植酸酶,可使氮利用率提高27.16%和34.78%。 Biehl和Baker(1996)在低蛋白氨基酸缺乏日粮添加植酸酶,使饲料效率提高6.8%,但氨基酸充足时,植酸酶未能改进饲料效率,无论氨基酸缺乏与否,日增重都得到改善。Biehl和Baker(1997)研究发现,植酸酶对氨基酸利用率的影响与蛋白质来源有关,无论氨基酸缺乏与否,1200U/kg植酸酶均不能改善喂以玉米-花生饼型日粮的鸡生长、采食量和饲料报酬;但对氨基酸缺乏的玉米-豆饼型日粮,则能显著提高增重/耗料比,据测定9种必需氨基酸和半胱氨酸的平均真消化率约提高2%,但未达显著水平。Kemme等(1995)报道,添加900U/kg植酸酶,不仅使蛋白质而且使赖氨酸、色氨酸、异亮氨酸和苏氨酸的表观消化率均得到改善。 植酸酶对肉鸡、蛋鸡和火鸡的氮沉积和吸收有显著影响。Han等(1995)报道,1000U/kg植酸酶使肉用仔鸡氮利用率提高12.6%~12.98%。Van der Klis等(1991)报道,植酸酶对蛋鸡的氮吸收有促进作用,250U/kg使氮吸收率由79.2%提高到81.3%,差异显著。Yi(1996)报道,在低磷(非植酸磷0.45%)、低蛋白质(22.5%)的玉米豆饼型火鸡日粮中,添加750U/kg植酸酶,使氮和除蛋氨酸和胱氨酸外的所有氨基酸表观和真消化率提高1%~2%,干物质和氮的沉积率显著增加;在低磷高蛋白质(CP28%)和高磷(非植酸磷0.6%)低蛋白质的日粮中添加植酸酶,使氮及所有氨基酸的消化率和沉积率均得到改善;但高磷高蛋白质日粮中添加植酸酶,对氨基酸的消化率和沉积率无影响。 综上所述,在大多数情况下,植酸酶的应用,能提高动物对蛋白质的利用率,使粪中氮排泄量减少。不同试验结果所以不一致,很有可能与蛋白质植酸复合物的数量与分布有关。当植酸在单子叶植物的糊粉层和双子叶植物的蛋白质体内沉积时,植酸蛋白质复合物便开始形成(O’Dell等,1972;Prattley,1982)。由于不同谷物或油料种籽中植酸的位置不同,如玉米中90%的植酸盐在胚中,而油料种籽(如大豆)的植酸盐与蛋白体结合,并存在于整个种籽(Maga,1982),花生、棉籽中植酸盐,集中在蛋白体膜内的晶状体或球状体的亚结构中(Erdman,1979)。植酸与蛋白质形成复合物的可能性大小有差异,不同来源蛋白质与植酸形成络合物的能力不同,故植酸酶对蛋白质利用率的作用,与蛋白质的来源及日粮中氨基酸是否缺乏有关。
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