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发表于 2008-3-19 19:12:26
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组织灭活苗的研制(以蓝耳病蜂胶苗制作为例)
1 毒液灭活 无菌采集PRRSV 阳性濒死仔猪肺、脾、淋巴结等, 剪碎, 加适量PBS 液于高速捣碎机中匀浆, 加PBS 液稀释成1∶10 混悬液, 冻融3次, 3000 röm in 离心, 取上清液加入0. 2% 甲醛溶液37℃灭活24 h, 期间振荡数次, 无菌检查合格后即为制苗病毒液, 4℃保存备用。在夏天制作时,最好用冰冻过的PBS来匀浆。
2 蜂胶纯化 蜂胶1 份剪碎, 加入4 份95% 乙醇溶解, 25℃作用24 h, 冷却离心取上清液, 以干物质计算配制成30 m göm l 溶液, 4℃保存备用。
3 疫苗制备 蜂胶乙醇溶液与甲醛灭活的病毒液等体积混合, 低速拌匀成为混悬液。无菌检查合格即为猪繁殖障碍与呼吸道综合征蜂胶佐剂组织灭活苗。
4 安全试验 未免疫猪繁殖障碍与呼吸道综合征的母猪所产1 日龄健康仔猪4 头, 接种研制的组织灭活苗5 m lö头, 观察2 周仔猪全部健活; 同时分别接种怀孕80、85、90 d 健康母猪3 头, 无流产现象, 足月分娩无死胎、木乃伊胎及弱仔。
5 保护力试验 PRRSV 阴性20 日龄健康仔猪20 头, 随机分为2 组, 每组10 头。作2 个处理, 第一组接种组织灭活苗4 m lö头, 第2 组接种生理盐水4 m lö头。观察保护效果。 |
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