楼主: jiangwenbo119

蛋白测定问题

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发表于 2009-11-20 16:44:23 | 显示全部楼层
应该是加碱不够,碱加的是过量的!!我是这么认为的!
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发表于 2009-11-21 10:16:18 | 显示全部楼层
样品的消化
   首先,确定硫酸的用量,要根据样品的用量来确定硫酸的用量,如果取2~3g样,则需25mL硫酸;对于含盐量高的样品,如劣质鱼粉、肉骨粉之类,须相应增加硫酸用量,因为NaCl+H2SO4→HCL↑,加热后HCL会挥发。消化液中加入大量硫酸钾或硫酸钠,其目的是用于提高消化温度。
   K2SO4+H2SO4→KHSO4       KHSO4→K2SO4+SO3+H2O
   如消化过程中,随着硫酸的分解和水分的蒸发,硫酸钾的浓度逐渐增大,则消化液沸点升高,加速了有机物的分解速度。但应注意硫酸钾的用量不能过大,如果消化温度太高,生成的硫酸铵也会分解出氨而使测定结果偏低。
   (NH4)2SO4→NH3↑+(NH4)HSO4     (NH4)HSO4→NH3↑+S02↑+H2O
   在消化液冷却后呈固态,则表明硫酸钾用量过大,或硫酸用量不足。事实上,增加试样量和硫酸量,其混合催化剂的量不必增加。   在试样消化过程中,还要加硫酸铜等试剂为催化剂;进一步加速试样的消化分解。硫酸铜的催化反应如下:
   C+2CuSO4→Cu2SO4+SO2↑+CO2↑        Cu2+2H2SO4→2CuSO4+2H2O-t-S02↑
   除硫酸铜外,常用的催化剂还有汞、氧化汞、硒粉、还原铁或上述物质的混合物。对于一般谷物样品,如玉米、小麦、稻谷等的消化,用硫酸铜作催化剂,只要适当增加盐用量,使用强热源,其效果与汞催化剂完全一样;对于难消化物质的样品,硫酸铜催化效果不如汞,测得蛋白质含量偏低。
   用硫酸铜作催化剂的好处,是在蒸馏氨时可作为碱性反应的指示剂。
   添加氧化剂可帮助有机质消化,但氧化性较强的氧化剂会使氨氧化为氮气损失。对于富含脂肪或消化过程中易发泡的样品,可在消化前添加少量氧化剂,如过氧化氢,一般不用高锰酸钾和次氯酸作氧化剂。
   有的饲料检测书上有快速测定蛋白质的方法,如硒粉催化法、硒粉过氧化氢催化法、过氧化氢催化法等,按照这些方法测定的蛋白质含量常常偏低0.3%~1.0%,如无特殊情况,特别是测定的结果作为饲料配方的数据时,不要用快速测定法。
蒸馏
   氨的蒸馏有两种方法:常量蒸馏法和半微量蒸馏法。常量法将样品分解消化后全部用于测定,取样量大,测定结果的准确性和精确度都很高。半微量法测定结果精密度稍差一点。一般情况下建议使用半微量法,因为如果蒸馏失败的话,半微量法还可继续蒸馏,而常量法只好全部重来,费时费力。
   半微量法中规定蒸馏4min,但未规定从何时计时。其实,蒸馏时间的长短要看蒸汽量的大小,蒸汽量小时须增加蒸馏时间。从经验来看,多蒸馏1~2min对结果没有影响,并可随时用试纸检查是否蒸馏完全。所以,从何时计时的争论也就无关紧要了。
蒸馏时要注意两点,一是反应室里的溶液总体积要控制,也就是说,在冲洗加样口时用水要少,否则反应室溶液体积太大,液面升高,容易喷进冷凝管内。二是要控制蒸汽量或火力大小,蒸汽量太大也会将反应液喷进冷凝管中;火力太小,蒸馏速度慢,且易发生倒流;蒸汽产生要均匀,防止暴沸;一定要装上蒸汽发生器的安全管,同时加上几粒玻璃珠.
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发表于 2009-11-21 21:14:10 | 显示全部楼层
结果偏低有多种原因!不可一概而论
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发表于 2009-11-23 21:46:51 | 显示全部楼层
嗯,我也遇到过这种问题,还好做出的结果没什么问题。半微量误差就是大。。
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发表于 2009-11-24 21:22:02 | 显示全部楼层
没消化好,或者没有加足量水溶解好,若有凝结先通蒸汽
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发表于 2009-11-24 21:44:10 | 显示全部楼层
做出的结果怎样啊!我们做的时候也不是所有时候都变色的,有时候是蓝色的,有时候是褐色的。根据不同的原料 ...
372637000 发表于 2009-9-14 10:30

变成澄清的蓝色是因为加碱过快、过多造成的,即短时间内生成过多的氨气与铜离子形成了稳定的络合物(四氨合铜)
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发表于 2009-11-25 10:46:28 | 显示全部楼层
碱的浓度有问题吧,再怎么也不会一点氨都接收不到吧,空白还有氨气呢
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发表于 2009-11-25 10:48:20 | 显示全部楼层
消化管底部是否有沉淀结晶
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发表于 2009-12-21 21:07:52 | 显示全部楼层
我们也经常遇到这样的问题,不过用硫酸铵标很正常。
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发表于 2009-12-22 19:47:06 | 显示全部楼层
期待经验丰富人士点评
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