鱼粉中挥发性盐基氮和组胺的测定方法！

zhoushun

个人认为没多少使用价值，最好发点在用、实用、容易操作的方法。

nissian54

好资料，下载学习学习。

柳粒橙

这两个其实都是反映鱼粉是否腐败的指标,但是我们公司只测VBN,组胺不测,成本高.

yangxiaodong

还有没有更好的。

yangxiaodong

鱼粉会不会涨价

hfdywj

多谢楼主的组胺测定方法。前几天正在找呢

又见新月

本人正在研究 化验方面的东西

yjia810

VBN用的比較多

长江之水

鱼粉的新鲜度是个很重要的指标,不亚于其它指标.

田玉安

1、        组胺的测定
原理： 鱼粉中组胺用三氯乙酸提取，之后调PH=9，将游离的组胺用正戊醇提取出，之后再用HCL反萃取，用偶氮试剂显色。
组胺+三氯乙酸盐（溶于水）-（PH=9---组胺（溶于正戊醇）-----HCL----正戊醇（组胺溶于稀HCL）
1、        组胺的测定
收集水相（下层）于20ml刻度试管内，用水定容至刻度，摇匀，吸取1.00ML（2ML）盐酸提取液于10ML比色管中，加入碳酸氢钠溶液（50g/l）3.0ml摇匀，振荡下加入偶氮试剂3.0ml，用水定容到刻度，室温下显色10min，用1cm比色皿于480nm下测定吸光度。
1、        组胺的测定
偶氮试剂的配制
甲液：称取0.5g对硝基苯胺，加5ml盐酸（1+1）溶解，再加水稀释到200ml，置冰箱中（2~8度）保存。
乙液：亚硝酸钠溶液5g/l，临用现配
甲液5ml、乙液40ml混合后立刻使用。
1、        组胺的测定
步骤（1） 样品处理
  称取1~3克鱼粉于具塞三角瓶内，加入25ml三氯乙酸（100g/l）每隔30分钟摇动一次，称取3小时，过滤，取滤液2ml或1ml于15ml试管内，加氢氧化钠（250g/l）5滴，振荡一下，再加5ml正戊醇振荡2分钟，静止分层（如出现乳化现象可滴加2~3滴无水乙醇），用移液枪小心吸取上清液（正戊醇层）于50ml分液漏斗内，下层沉淀再分别用盐酸（1mol/l）5ml、5ml、3ml反萃取3次。
步骤2：标准曲线法
称取磷酸组胺样品（Sigma公司）2.7671mg，置于100ml容量瓶内，用水溶解并定容到刻度，此液组胺含量为10ug/ml，分别取此标液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00ml于5支10ml比色管内，各加盐酸（1mol/L）1.0ml，振荡，用水定容到刻度，摇匀后放置10min（室温下），用1cm比色皿于480nm下测吸光值。
参比液：试剂空白
计算公式：
                                     C*100              
(m/25.0)*(1.00/15.0)*1000

实例：鱼粉2.3455，取三氯乙酸提取液1.00ml，吸光度A=0.257
标准曲线:A=0.012380*c+0.01310
计算:c=(A-0.0131)/0.012380=19.70ug
组胺=[19.70/(2.3455/25)*(1.0/15)*100=315mg/100g=3150ppm
应用：
    进口白鱼粉：组胺<10mg/100g(1~5mg/100g)
    进口水产级蒸汽鱼粉<100mg/100g(50mg/100g)
    优质国产鱼粉<150mg/100g(50-150mg/100g)
    新鲜度差的鱼粉(国产,进口)组胺200~340mg/100g
用于乳猪料的鱼粉 组胺<100mg/100g

2挥发性盐基氮的测定(VBN)
原理:蛋白质分解时，氨基酸脱氨基生成氨，氨基酸脱羧基生成胺，氨与胺在碱液中被蒸发出来，用硼酸吸收，用标准盐酸反滴定，测出其含量。
步骤：称取5-10g样品于250ml具塞三角瓶内，准确加入100.00ml水，振荡30min，过滤，取虑液10.00ml，按粗蛋白蒸馏操作，但加入的碱为氧化镁溶液（10g/L）5-8ml。
计算：
挥发性盐基氮（VBN）（mg/100g）=[c（V-V0）/m*（10/100）*100
实例：鱼粉样品8.6706g，VHCL=0.0200mol/L  V=3.93ml   V0=0.015ml
       VBN={[0.0200*10/100]}*14*100=122.1mg/100g
应用：
    新鲜度好的鱼粉VBN<100mg/100g（40-80）
    新鲜度差的鱼粉VBN>150mg/100g（180-350）
乳猪料鱼粉VBN<100mg/100g
饲料中免疫球蛋白lgG的测定
      --------高效液相色谱法
1 范围
本标准规定了用高效液相色谱法仪测定饲料中免疫球蛋白IgG含量的方法
本标准适用配合饲料、浓缩饲料、含Ig的饲料原料（包括血浆蛋白粉、鸡蛋粉等）中免疫球蛋白IgG的测定
本方法检出限：当取样1g，稀释至25ml，进样量20ul，检出浓度为0.2mg/ml
2 原理
根据高效亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接，在PH2.5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。
3、试剂
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水为去离子水或相当纯度的水，应符合CB/T6682三级用水的规定
3．1磷酸二氢钾
3．2 磷酸氢二钾
3．3流动相A：PH6.5，0.05mol/l磷酸盐缓冲液
4.4 流动相B：PH2.5，0.05mol/l甘氨酸盐酸缓冲液
4．5IgG储备标准液：
称取IgG标准品（Sigma）0.0100g，用流动相A（4。3）溶解并定容至10ml，摇匀，浓度为1.0mg/ml
4．6IgG工作标准溶液：
取IgG标准储备液，用流动相A（4。3）稀释成含IgG0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/ml
的标准系列。临用时配制。
5 仪器和设备
5．1 实验室常用仪器设备
5．2PH计
5．3超纯水装置
5．4匀浆机
5．5高效液相色谱仪：具紫外检测器和梯度洗脱装置
6试样制备
按GB/T14699饲料采样，选取饲料样品至少500g，四分法缩减至少100g，磨碎，通过0.28 um孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。
7分析步骤
7．1试样处理：
称取一定量试样（精确至0.0001），配合饲料、浓缩饲料时，称取试样2~5g；血浆蛋白粉称取试样0.1g；鸡蛋粉称取试样0.5g，于茄形瓶中，准确加入25ml流动相A（4。3），用匀浆机匀浆5分钟，取溶液10ml 于离心管中，以1000g（3500r/min）离心10min，通过0.45um微孔滤膜后进样
7．2测定：
7．2．1HPLC测定参数的设定：
色谱柱：Pharmacia HI-Trap Protein G柱，1Ml
波长：280nm
进样量：20ul
7．2．2梯度洗脱条件
梯度洗脱见表1
7．2．3测定
7．2．3．1先用5倍柱体积的重蒸馏水或去离子水洗柱，再用10倍柱体积流动相A（4。3）平衡柱，按洗脱程序进行洗脱。
分别取7.1试样处理液和4.4标准工作液进行测定，以色谱峰面积积分值做单点或多点校准定量。
8结果计算
8．1试样中IgG含量按公式（1）计算：
  &#61472;&#61472;&#61472;&#61472;&#61472;&#61472;&#61472;Pi×V×c×Vst×100
Pst×m×Vi×V1×100
式（1）中：&#61559;&#61591;&#61591;试样中IgG含量，g/100g；
           c——标准工作液（A.2.3）中IgG的浓度,mg/ml;
           P1——标准工作液峰面积值；
           Vst——标准工作液进样体积，uL；
           Pst——试样峰面积值；
           Vi——试样进样体积；u        L；
           V——试样体积，mL；
           m——称取试样的质量，g；
8．2 平行测定结果用算术平行值表示，保留小数点后两位有效数字。
9 重复性
      在重复性条件下获得的两次独立测试结果的测定值的绝对差值不得超过算术平均值的15%。