1.6 指标检测 1.6.1 肉鸡成活率检测 在试验第21ｄ和第40ｄ分别统计各组试验鸡的成活率,检测不同剂量的忍冬藤饲料添加剂和抗生素对肉鸡成活率的影响 成活率=(成活鸡数/试验鸡数)×100% 1.6.2 肉鸡增重与饲料转化率 试验第21天,第40天进行称重,分别计算每只试验鸡重量,统计饲料利用量,检测和对比忍冬藤饲料添加剂和抗生素对增重和料肉比的影响。 1.6.3 肉鸡免疫器官指数的检测 选择脾脏、法氏囊和胸腺作为免疫器官,试验结束以后,从每个试验组中随机抽取5只鸡,空腹称重,屠宰后分离脾脏、法氏囊和胸腺,测定其重量,检测忍冬藤饲料添加剂和抗生素对肉鸡免疫器官指数(器官重ｇ/活体重ｋｇ)的影响。 1.6.4 肉鸡血清生化指标检测 试验鸡40ｄ龄时,分别在每个试验组中随机抽取5只,翅静脉采血2ｍＬ,分离血清-20℃保存待测。检测忍冬藤饲料添加剂和抗生素对肉鸡血清生化指标的影响。谷草转氨 、谷丙转氨 、球蛋白、总蛋白、尿素氮、甘油三酯、总胆固醇采用ＸＬ-600全自动生化分析仪测定[2]。 1.6.5 忍冬藤饲料添加剂和抗生素对小白鼠巨噬细胞吞噬功能的影响试验 为了验证忍冬藤饲料添加剂增强免疫系统的功能,按照中草药药理研究方法学中的有关规定,采用小白鼠进行试验。将30只小白鼠分为三组,每组10只。?组用忍冬藤饲料添加剂按每只2ｇ/2ｍＬ/ｄ剂量灌服;?组用西药左旋咪唑按2ｍｇ/ｍＬ/ｄ剂量灌服;?组作为空白对照组灌服等量蒸馏水0.5ｍＬ/ｄ。连续给药一周后,分别给小鼠腹腔注射1%蛋白 1ｍＬ;2ｈ后分别注射5%鸡红细胞悬浮液0.5ｍＬ;10ｈ后将小白鼠脱颈椎处死,仰位固定于鼠板,腹腔注射阿氏液2ｍＬ,充分转动固定板,然后抽取腹腔巨噬细胞洗液,离心,去掉上清液,涂片,→固定→染色→晾干→镜检。在油镜下每片计巨噬细胞数200个,然后按以下公式计算其吞噬指数与吞噬百分率[2]: 吞噬百分率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞 ×100% 吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/200个巨噬细胞 将所观察到的各组小白鼠的试验数据进行整理、分析和对比。 1.7 药物对小白鼠脾淋巴细胞玫瑰花结形成的影响试验[2]。 淋巴细胞表面具有抗体,可与不同种动物的红细胞结合,形成玫瑰花瓣样的细胞团,称为玫瑰花结(ＲＦＣ),而形成率的高低,常可反映机体细胞免疫功能的强弱,故可作为药物影响免疫功能的指标之一。本试验取小白鼠20只,随机分成忍冬藤组和生理盐水组,每组10只。每鼠腹腔注射5%绵羊红细胞(ＳＲＢＣ)0.4ｍＬ(约4亿个ＳＲＢＣ),1次免疫后,接着按组分别以0.4ｍＬ/20ｇ量给予忍冬藤水煎剂及生理盐水灌胃,每日1次,连续4次后,末次给药后1ｈ处死小白鼠,取出脾脏,按组称重后剪碎,加入ＰＨ为7.6的Ｇｅｙ'ｓ液2ｍＬ混匀,磨碎后取上层液,以1000ｒｐｍ离心后去上清液,加入Ｇｅｙｓ液2ｍＬ,进行细胞计数,加11%台盼蓝检查活细胞数。将脾细胞悬液稀释成8×106个细胞/ｍＬ,取0.1ｍＬ加入1%ＳＲＢＣ及经ＳＲＢＣ吸收过的灭活小牛血清0.1ｍＬ混匀,以1000 ｒpm 离心10min 后放入4 的冰箱2h, 然后每管加入 1% 甲苯蓝 20 L染色,再将细胞悬液滴于血球计数盘上,盖上玻片,在高倍镜下计数特异玫瑰花结形成的百分率. 2 结果与分析 2.1 数据处理和统计分析方法 采用ＳＰＳＳ10.0统计软件中ＡＮＯＶＡ模块进行单因素方差分析和Ｄｕｎｃａｎ'ｓ多重比较,以Ｐ<0.05为显着水平。试验结果以“平均值±标准差”表示。 2.2 不同剂量的忍冬藤饲料添加剂和抗生素对肉鸡成活率的影响 根据各组试验鸡的存活数量统计结果计算成活率,从表2可以看出,忍冬藤饲料添加剂组和添加抗生素组对肉鸡成活率(%)的影响差异不显着(Ｐ>0.05)。
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