原位PCR技术

1260364795

原位PCR综合了PCR和原位杂交的优点，是一种在组织切片或细胞涂片上原位对特定的DNA或RNA进行扩增，再用特异性探针原位杂交检测。原位PCR标本一般需先经化学固定，以保持组织细胞的良好形态结构。细胞膜和核膜有一定的通透性，PCR扩增所需的各种成分可进入细胞内或核内，在原位对特定的DNA或RNA进行扩增。扩增产物由于分子量较大或互相交织，不易透过细胞膜向外弥散，固保留在原位。这样就很容易应用ISH将其检出，同时还可对目的DNA序列的组织细胞进行形态学分析。与其他PCR方法不同的是，原位PCR不必从组织细胞中分离模板DNA或RNA。如冷冻的组织或经有机试剂固定的组织细胞，用蛋白酶、DNA酶处理，进行原位逆转录，再加入PCR扩增试剂，即可进行原位PCR反应。