《饲用植酸酶活性的测定——分光光度法》新旧国标变化及解读二

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由于相对法使用的植酸酶标准品不易确定和不易采购，新标准删除了相对法，但由于绝对法对环境、设备条件要求较高，为了降低不同化验室间检测结果的误差，必须使用新标准8.2.2中的建议：“在测定样品时附加一个已知活性的植酸酶参考样，便于检验整个操作过程是否有偏差。”对于在国内使用的植酸酶参考样应在获得国家权威质量监督部门授权的国家级实验室间进行重复测定；如果是在国际范围使用的植酸酶参考样，则要在不同国家的权威实验室间进行重复测定。

4 改变了缓冲溶液的配制方法

4.1 标准中使用无水乙酸钠代替原标准中的三水乙酸钠

4.2 用曲拉通X-100和牛血清白蛋白代替吐温20做为增溶剂

因吐温20只对少数一两类特定的植酸酶浸提效果较好，但由于目前市场销售的植酸酶菌种和生产工艺的不同，各单位检测中使用的玻璃器皿质量的不同等原因，使得大部分植酸酶使用吐温20增溶效果较差，检测中部分植酸酶会附着在容量瓶和试管壁上，因此，用曲拉通X-100和牛血清白蛋白（BSA）代替吐温20作为增溶剂配制缓冲液，检测结果重复性较好。

5 其他区别：细化了测定过程中的操作步骤

5.1 明确了植酸钠的相对分子质量和纯度，细化了溶液的配置

底物溶液的配制中新标准规定：先用冰乙酸调节pH值5.5±0.01后，再定容。以上步骤有效确保了植酸酶酶活定义规定的植酸钠浓度为5.0 mmol/L和pH为5.5的反应条件。

5.2 缓冲液和植酸钠溶液pH调节由原标准中使用“盐酸调节”修订为使用“冰乙酸调节”

5.3 细化了试样的制备

新标准中对固体样品和液体样品分别进行了描述。

5.4 对制做标准曲线的稀释顺序进行了调整

新标准中标准溶液的配制使用了由低向高进行配制的方法，更好的确保标准溶液浓度的准确性。

5.5 细化了试样溶液的制备过程

5.5.1 新标准对酶制剂样品中酶的提取和加酶饲料样品中酶的提取分别进行了描述。

5.5.2 原标准中对于酶制剂样品中酶的提取仅使用“在磁力搅拌器中高速搅拌30min”提取方式，新标准增加了酶提取的新方案：“超声波溶解器上超声溶解15min，再放入回旋式振荡器中振荡30min。”用这两种提取方式均可达到检测要求。