猪伪狂犬的情况极其引物设计

心随乌托邦

      各位行业高手，我想问一下猪伪狂犬病的相关知识，主要是猪伪狂犬病的主要症状、免疫程序、以及这种基因缺失苗的相关情况。
      补充：我在实验室多次用分子生物学-PCR技术检测猪伪狂犬病但是不能检出，但是根据临床症状很有可能是猪伪狂犬病。我设计的引物是针对这种病毒的IgD基因设计，而以基因缺失苗（缺IgE）作为阳性对照，但是每次检测出来的结果都很奇怪，自己也找不出来什么原因。开始怀疑是自己的引物设计有问题，但是后面又设计了一次，还在一些文献里面找了一些别人用过的针对猪伪狂犬病的引物，来进行实验，但是检测结果还是不理想，连作为阳性对照的疫苗毒株都是不能检测出来。
        所以请行业高手帮忙分析分析！在下感激不尽！

海棠

PCR诊断方法：由于猪伪狂犬病毒基因组GC含量比较高，所以扩增比较难。一般用gE基因设计引物，因为猪伪狂犬疫苗一般是gE基因缺失的，可以区分野毒和疫苗毒。
在做PCR时，购买扩增高GC含量基因的PCR酶会取得较好的效果。

海棠

猪伪狂犬症状：
母猪：流产，死胎。
小猪：神经症状，腹泻，发烧。
中大猪：咳嗽，呼吸道症状。
解剖特征：肝、脾有白色坏死点，扁桃体坏死。

海棠

免疫：母猪一年免疫4次，出生仔猪7天内滴鼻，50日龄再免疫1次。

心随乌托邦

海棠 发表于 2014-2-25 22:30
PCR诊断方法：由于猪伪狂犬病毒基因组GC含量比较高，所以扩增比较难。一般用gE基因设计引物，因为猪伪狂犬疫 ...

恩，是的，谢谢！设计引物为什么要根据gE基因呢？还有就是实验室就是由于猪伪狂犬一直检测不顺利，所以没有保存阳性病料，每次都是用基因缺失的gE疫苗作为阳性对照，如果按照设计引物根据gE基因，那么缺失苗作为阳性也不能检测出来啦？所以很纠结。

心随乌托邦

海棠 发表于 2014-2-25 22:24
猪伪狂犬症状：
母猪：流产，死胎。
小猪：神经症状，腹泻，发烧。

谢谢！剖检的具体症状有吗？除了肝和脾。

心随乌托邦

海棠 发表于 2014-2-25 22:26
免疫：母猪一年免疫4次，出生仔猪7天内滴鼻，50日龄再免疫1次。

谢谢您！版主你看这个免疫方案对吗？
猪伪狂犬gE基因缺失疫苗，无论国产苗或进口苗都可以产生良好的免疫效果 ；无论跟胎免疫 、1年2次普免，每隔4个月定时免疫 ，效果均 良好 。种猪免疫抗体合格率达 100，仔猪 49 日龄前抗体合格率达
100 ，75 日龄后抗体逐渐 降低 ，120 日龄后基本消失 。为 了使 猪体免疫力更 强，不给野毒入侵 的机会 ，建议仔猪在首免后 ，适当时间进行二次加强免疫 。
这里仔猪说的适当时间免疫是您这里的7天首免、50天第二次免疫吗？

广东猪兽医

你用的是什么文献？你设计的是什么引物，你要让大家看  才能给你帮助啊

另外，检测PR的金标准是 PCR吗？好像不是吧  

心随乌托邦

广东猪兽医 发表于 2014-2-26 17:32
你用的是什么文献？你设计的是什么引物，你要让大家看  才能给你帮助啊

另外，检测PR的金标准是 PCR吗？ ...

文献就是一般我国的期刊上的呀！检测伪狂犬是有很多种，但是PCR相对来说比较方面和准确。因而目前也应用较多。

心随乌托邦

心随乌托邦 发表于 2014-2-26 09:40
恩，是的，谢谢！设计引物为什么要根据gE基因呢？还有就是实验室就是由于猪伪狂犬一直检测不顺利，所以没 ...

关键是实验条件原因，现在我找不到合适的阳性毒株，所以只有把缺失苗当成阳性对照。