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完成单位：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药品 巴尔吡尔和进口原液两种药液，均为水溶液，由北京娜尔生物技术有限公司提供。
1.1.2 菌种 马腺疫链球菌C55100、金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌C83-1、猪伤寒沙门氏菌C78-2和魏氏梭菌均购自中国兽药监察所。无乳链球菌06413、大肠杆菌3#和停乳链球菌29系从兰州、江苏和大理采集的患临床型乳房炎的病乳中分离、鉴定并冻干保存的菌种。
1.1.3 培养基 普通牛肉汤、7%羊血琼脂斜面、水解酪蛋白琼脂培养基 (MH)。
1.1.4 不锈钢管 外径8mm，内径6mm，高10mm。
1.2 方法
1.2.1 杯碟法抑菌试验 将冻干菌种开启后，分别接种到普通牛肉汤中，37℃温箱中培养20h，经涂片镜鉴纯粹后，分别接种于血琼脂斜面，37℃温箱中培养20h后取出，置4℃冰箱中保存。试验时将血斜面菌种分别接种于普通牛肉汤中，37℃温箱中培养20h，经涂片镜鉴纯粹后，将不同菌株的菌液进行不同倍数的稀释（由与试验确定）。将稀释好的菌液用灭菌吸管吸取0.1ml，加到MH 平板上，并立即用涂抹棒将菌液均匀涂抹于整个琼脂表面。平皿室温放置5-10min，待菌液吸干后，将小钢杯在酒精灯上微微烧灼，等距离立置在琼脂表面上数个，然后将不同稀释浓度的药液分别加入钢杯中，尔后平皿盖换成陶瓦盖，平置于37℃温箱中培养24h，取出后用游标卡尺测量抑菌圈直径。每株菌重复上述试验2-3次，取平均值，即为该药对此菌株的抑菌结果。
1.2.2 试管抑菌试验 将巴尔吡尔药液用肉汤进行稀释，将药液分别稀释成1:5、1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320和1:640共8个稀释度，每个稀释度分别装于8只试管（12mm×100mm）内，每管2mL，再分别加入培养20h各菌株1000倍肉汤稀释液0.05mL。另设一管药物对照（不加菌液）和各菌株的细菌对照（2mL肉汤加0.05mL菌液），置于37℃温箱培养24h后，判定抑菌效果。
1.2.3 杀菌试验 按农业部兽用消毒剂技术规范，采用试管内2倍稀释法进行。试验前将24h肉汤培养物离心，弃去上清液，沉淀用0.03M磷酸盐缓冲液制成一定浓度的细菌混悬液，并与标准比浊管比较，将菌液调整到试验所需的活菌数。将巴尔吡尔药液用灭菌蒸馏水进行对倍稀释,每管2.5ml,然后加等量细菌悬液,混匀并计时,作用10min、20min和30min后，取0.5ml加入1.5ml中和剂（磷酸盐缓冲液）、中和10min后，取0.5ml加到4.5ml营养肉汤中，37℃培养7d。以无菌生长的最大稀释倍数作为本品的最小杀菌浓度（MIC），其作用时间为最短有效作用时间。并设营养肉汤及磷酸盐缓冲液（代替消毒剂）为对照。
2 结果
表1 巴尔吡尔和进口原液杯碟法抑菌试验结果 单位：直径mm
表2 巴尔吡尔杀菌试验结果
注：+为细菌生长，-为细菌不生长
表3 巴尔吡尔和进口原液试管法抑菌试验结果
注：+为细菌生长，-为细菌不生长
3 结论
巴尔吡尔和进口原液不稀释对畜禽常见病原菌均有较好的抑菌效果，但做1：5和1：10稀释后无抑菌效果或抑菌效果很差。试管对倍稀释法抑菌试验结果表明，巴尔吡尔对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌C83-1、猪伤寒沙门氏菌C78-2、大肠杆菌3#、停乳链球菌和魏氏梭菌的有效抑菌浓度为1：10，对马腺疫链球菌和无乳链球菌的有效抑菌浓度为1：20。进口原液对金黄色葡萄球菌和停乳链球菌的有效抑菌浓度为1：40；对大肠杆菌C83-1、猪伤寒沙门氏菌C78-2、大肠杆菌3#、和魏氏梭菌的有效抑菌浓度为1：80；对马腺疫链球菌和无乳链球菌的有效抑菌浓度为1：320。
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发表于 2014-1-13 15:23:27
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