微生态制剂对鹌鹑小肠发育、肠道菌群及血清中胆固醇质量浓度的影响

华牧伟业

　　摘 要： 研究日粮中添加活性乳酸菌微生态中药发酵制剂-保禽肽对鹌鹑小肠发育， 肠道菌群及血清中胆固醇质量浓度的影响。选用1日龄鹌鹑180羽， 随机分成4组， 每组3 个重复， 每重复15羽。对照组饲喂基础日粮， 试验组在基础日粮中分别按比例0.1%、0.2%、0.3%添加活性乳酸菌发酵制剂-保禽肽。结果显示，保禽肽 对鹌鹑小肠发育影响不大（P>0.05） , 随保禽肽添加量的增加， 小肠中大肠杆菌数显着降低（P<0.05） ,乳酸菌数量显着增加（P<0.05） 。日粮中添加0.2%和0.3%保禽肽可显着降低血清中胆固醇质量浓度（P<0.05） 。由此得出， 饲料中添加保禽肽可减少鹌鹑肠道内大肠杆菌数量， 增加乳酸菌数量， 同时可降低血清胆固醇质量浓度。
　　关键词： 微生态、中药、益生素、发酵、保禽肽、乳酸菌、小肠发育、大肠杆菌、血清胆固醇。
　　保禽肽是利用现代生物技术和先进设备利用工业规模生产的活性乳酸菌对精选中药进行发酵，提高中药功效4-28倍，并且改变了其适口性差的缺点。活性乳酸菌发酵制剂-保禽肽具有功效全面、见效快（24小时）、贮藏时间长、使用方便等优点 。活性乳酸菌是国际公认的可以饲用的有益菌种， 也是中国批准使用的有益菌品种， 是一种绿色环保无公害添加剂。目前， 有关研究报道主要集中于猪、肉鸡、反刍动物方面，对于鹌鹑的作用尚未见报道。本试验通过在日粮中添加活性乳酸菌发酵制剂来研究活性乳酸菌对鹌鹑小肠发育、肠道菌群及血清胆固醇质量浓度的影响。
　　1   材料与方法
　　1. 1 试验材料
　　饲用活性乳酸菌发酵制剂-保禽肽（ 活菌数≥10 亿/g ） 由哈尔滨中科生物工程有限公司生产。基础日粮不含任何添加剂、聚糖类、益生素及抗生素， 分为0-2周龄和3-5 周龄2 个阶段， 基础日粮配方及营养成分见表1。
　　1. 2  试验动物的选择与分组
　　将180 羽1 日龄雏鹌鹑随机分成4 组， 每组3 个重复， 每重复15 羽。对照组饲喂基础日粮。试验组分别在基础日粮中添加0.1%、0.2%、0.3% 的保禽肽。
　　表1    基础日粮配方及营养水平

饲料原料/ ( g/ kg)	0-2 周龄	3-5 周龄
玉米	540	510
豆粕	270	260
进口鱼粉	100	90
米糠	50	100
骨粉	15	15
多维	2.5	2.5
微量元素	2.5	2.5
赖氨酸( 99%)	6	6
蛋氨酸( 99%)	1	1
食盐	1	1
石粉	12	12
合计	1000	1000
粗蛋白CP	243.8	229.4
总磷 P	4.0	4.0
总钙Ca	13.3	12.3
粗纤维	34.3	25.3
赖氨酸	11.2	8.7
蛋氨酸	4.7	3.8

　　注： 代谢能分别为12. 05 和11. 98 kJ/g。赖氨酸、蛋氨酸为计算值， 其余为实测值。基础日粮中微量元素添加为Mn 90 mg/kg、Zn 100mg/kg、Cu 7mg/ kg 、I0.3 mg/kg 、Fe 80 mg/kg.

　　1. 3  饲养管理

　　7 d育雏期在育雏箱中饲养， 7 d后采用笼饲养， 试验期35 d。自由采食和饮水， 消毒程序按常规方法进行。自然光和日光灯结合， 试验初期全天24 h 光照， 10 d 后逐渐减少日光灯光照时间，直至完全停止， 保持室内温度在33℃以上， 7 d后逐渐降低温度至室温。

　　1. 4 样品采集与制备

　　1. 4. 1  血清采集 35 d 时从每个重复中随机抽取已停止饲喂12 h以上的空腹鹌鹑4 羽， 称量活体质量， 用于计算肠指数。然后采用断颈放血进行采血， 分别装入离心管中， 3000 r/ min 离心10 min, 分离血清， 置-20℃冰箱中保存。

　　1. 4. 2  肠样采集  将35 d屠宰后的鹌鹑每个重复随机取4 羽， 总计48 羽进行解剖， 取其肠， 测量其空肠、回肠、十二指肠长度（mm） , 并计算肠指数。结扎盲肠口， 装入样品袋， 立即进行微生物培养计数。肠指数= 肠长度/体质量。

　　1. 5   指标测定

　　1. 5. 1   微生物  麦康凯培养基、乳酸杆菌选择性培养基购于北京奥博星生物技术有限责任公司，用常规检测法进行测定。采用麦康凯培养基37℃有氧培养24 h 进行大肠杆菌菌落计数； 采用乳酸杆菌选择性培养基37℃厌氧培养48 h进行乳酸杆菌菌落计数。根据菌落形态、颜色和革兰氏染色镜检结果进行鉴别， 用每克肠道内容物中细菌个数的常用对数来表示。

　　1. 5. 2   血清胆固醇  取洁净干燥试管5支， 编号， 依次加入标准胆固醇应用液0、0.1、0.2、0.3、0.4 mL, 再依次加入醋酸液使各管体积均为0.4mL, 然后， 每管加入邻苯二甲醛试剂0.2 mL, 蒸馏水0.01 mL, 混合酸4 mL, 混匀， 静置10 min,于550 nm 波长处比色测定， 以总胆固醇质量浓度为横坐标， 光密度为纵坐标， 绘制标准曲线。

　　取3 支清洁干燥试管编号， 1 支为对照， 其余2 支为样品， 分别加入稀释的血清样品0、0.4、0.4mL, 各加入邻苯二甲醛0.2 mL, 混合酸4 mL, 另外在对照管中加入0. 4 mL 冰醋酸， 然后与标准曲线同时比色测定。其中量取0.1 mL 稀释的未知血清样品， 再用冰醋酸稀释到4 mL 制成分析样品。混匀， 静置10 min, 在550 nm 处比色， 从标准曲线查出样品的胆固醇质量浓度。

　　1. 6   数据处理

　　采用SPSS15.0 统计分析软件进行数据统计分析， 采用单因素方差分析（One-Way ANO-VA），并进行Duncan?s 多重比较， 取P <0.05 作为差异显着性的临界值， 数据以“平均数± 标准误”表示。

　　2   结果与分析

　　2. 1   鹌鹑肠长度及肠指数

　　从表2 可以看出， 0.3%保禽肽组鹌鹑空肠长度显着高于0.1%保禽肽（ P<0.05） ; 但各水平保禽肽组鹌鹑空肠长度与对照组相比差异不显着（P>0.05） 。活性干酵母对鹌鹑回肠、十二指肠长度没有显着影响（P>0.05） 。小肠长度随添加量的增加总体有增长的趋势， 但未达到统计学显着水平（P>0.05） 。日粮添加保禽肽对空回比没有显着影响（P>0.05） 。0.2%保禽肽组鹌鹑空肠指数显着高于0.1%保禽肽组（P< 0.05） ; 但各水平保禽肽组鹌鹑空肠指数与对照组相比差异不显着（P>0.05） 。保禽肽对鹌鹑回肠、十二指肠、小肠肠指数没有显着影响（ P>0.05） 。

　　表2    保禽肽对鹌鹑空肠、回肠、十二指肠、小肠长度及肠指数的影响

　　

项目	保禽肽添加量(%)
	0(CK)	0.1	0.2	0.3
空肠长度/ cm	26.0±3.60ab	24.92±2.78b	27.98±3.25a	25.65±3.13a
回肠长度/ cm	25.19±3.68	26.13±3.70	25.48±3.42	26.85±5.07
十二指肠长度/ cm	12.42±1.27	12.77±1.63	12.57±1.00	12.67±1.30
空回比	1.05±0.19	0.97±0.19	1.11±0.12	0.98±0.17
小肠长度/ cm	63.64±5.70	63.8±4.922	66.39±6.19	65.07±6.21
空肠指数	1.41±0.18ab	1.25±0.11b	1.45±0.15a	1.31±0.09ab
回肠指数	1.36±0.08	1.32±0.12	1.32±0.17	1.37±0.09
十二指肠指数	0.67±0.13	0.64±0.09	0.65±0.08	0.65±0.10
小肠指数	3.44±1.24	3.21±1.32	3.44±1.10	3.32±1.21

　　注： 同行数据后不同小写字母表示差异显着（ P< 0. 05） 。

　　2. 2   鹌鹑肠道菌群含量

　　从表3 可看出， 保禽肽对鹌鹑肠道内大肠杆菌的菌群有较强抑制作用， 试验组鹌鹑肠道内大肠杆菌显着低于对照组（P<0.05） ,而且随添加量增加，作用增强，0.2%和0.3%保禽肽组鹌鹑肠道内大肠杆菌显着低于0.1%保禽肽组（P<0.05） 。日粮添加保禽肽对鹌鹑肠道内乳酸菌有促进作用， 试验组鹌鹑肠道内乳酸菌显着高于对照组（P<0.05） , 而且随添加量增加， 作用增强，0.2%和0.3%保禽肽组鹌鹑肠道内乳酸菌显着高于0.1%活性酵母组（P<0.05） 。

　　表3   保禽肽对鹌鹑肠道内大肠杆菌、乳酸菌及血清胆固醇质量浓度的影响

保禽肽(%)	每克肠道内容物中细菌数量的常用对数值
	大肠杆菌	乳酸菌	胆固醇质量浓度/(g/L)
0(CK)	8.20±0.31a	6.75±0.09c	0.0416±0.0014a
0.1	4.88±0.20c	17.09±0.19a	0.0405±0.0014a
0.2	2.61±0.23c	27.30±0.24a	0.0381±0.0021b
0.3	2.45±0.20c	37.39±0.18a	0.0371±0.0013b

　　注： 同行数据后不同小写字母表示差异显着（ P< 0. 05） 。

　　2. 3   鹌鹑血清胆固醇质量浓度

　　从表3 可以看出， 随日粮活性保禽肽添加量的增加鹌鹑血清中胆固醇质量浓度减少， 且0.2%和0.3%保禽肽组血清胆固醇质量浓度显着低于对照组和0.1%保禽肽组（P<0.05） 。

　　3   结论与讨论

　　3. 1   保禽肽对鹌鹑小肠发育的影响

　　小肠作为动物体吸收营养物质的主要场所，其长度直接影响营养物质吸收， 各种营养物质在小肠内吸收的部位不尽相同， 如糖类、蛋白质和脂肪的消化产物大部分是在十二指肠和空肠吸收；铁、镁、钙在小肠上段吸收； 而维生素、胆盐则在回肠被吸收。各段肠指数也侧面反映了各段肠道的发育状况。本试验研究表明， 保禽肽对鹌鹑小肠不同段（ 空肠、回肠、十二指肠） 的生长发育虽然有一定的促进作用， 但影响程度不尽一致， 保禽肽对空肠发育影响最大，0.2%保禽肽组鹌鹑空肠长度、空肠指数显着高于0.1%保禽肽组。说明随保禽肽量的增加对空肠发育的刺激作用较其他小肠段强。尽管随日粮保禽肽添加量的增加对各组间鹌鹑空肠长度、空肠指数有显着影响， 但日粮添加保禽肽组与对照组相比， 差异不显着， 而且日粮添加保禽肽对鹌鹑回肠、十二指肠及整个小肠的长度、肠指数未达到显着差异水平。各组间空回比也未达到显着差异水平。由于肠道长度增长可增加食物在肠道内的吸收面积， 利于食物在肠道内的消化吸收， 从而促进动物生长。这说明保禽肽促进禽类生长，提高禽类生长性能的原因是由于保禽肽改善了肠道环境， 因为从本试验来看保禽肽对促进肠道发育影响不大。

　　3. 2   活性干酵母对鹌鹑肠道内菌群的影响

　　小肠不仅是营养物质吸收和消化的主要场所， 也与肠道内菌群的平衡与宿主的生产性能有重要关系。日粮添加保禽肽，鹌鹑肠道内大肠杆菌数量明显减少， 而乳酸杆菌数量显着增加， 保禽肽组与对照组相比，保禽肽组在降低大肠杆菌和提高乳酸菌数量方面效果很明显。这说明保禽肽对肠道微生态具有调节作用。乳酸菌属于厌氧菌， 在无氧条件能繁殖，在消化道内大量繁殖，并大量产酸，从而抑制了大肠杆菌、沙门氏菌等有害菌群的生长繁殖， 促进双歧杆菌、乳酸菌等有益菌的繁殖。适量添加保禽肽可以改善胃肠环境和菌群结构， 促进整个肠道乳酸菌、芽孢杆菌、双歧杆菌等有益菌的繁殖， 提高其数量及活力， 从而促进动物对营养物质的消化、吸收和利用 。

　　3. 3   保禽肽对鹌鹑血清胆固醇质量浓度的影响

　　本试验采用保禽肽饲喂鹌鹑可降低血清中胆固醇的质量浓度。这可能是由于添加保禽肽提高了肠道内乳酸菌的数量。胆固醇可经肝脏催化形成胆酸， 再同甘氨酸或牛磺酸结合形成可溶于水的脱氧甘胆酸盐或牛磺胆酸盐等胆汁盐， 通过粪便排出体外。肠内一些乳酸菌等微生物产生的胆汁盐水解酶催化胆汁盐产生脱甘氨酸或脱牛磺酸的不溶于水的去结合型胆汁盐， 这种胆汁盐可同血清中胆固醇发生共沉淀作用排出体外。除此之外， 饲喂保禽肽降低鹌鹑血清中胆固醇质量浓度的另一个原因可能是保禽肽含有β-葡聚糖， β-葡聚糖妨碍膳食胆固醇的吸收， 抑制胆酸盐的再吸收， 增加胆固醇的排出量从而降低了血浆胆固醇的质量浓度。

cignoma

如果你觉得好，我这里有几件本草倍利康，900块一件，还送一个罐哟！原厂原货！:如果你觉得好，我这里有几件本草倍利康，900块一件，还送一个罐哟！原厂原货！:lol:

CHENHAIBO1986

cignoma 发表于 2013-6-7 10:44
如果你觉得好，我这里有几件本草倍利康，900块一件，还送一个罐哟！原厂原货！:如果你觉得好，我这里有 ...

哥们怎么啦，是使用效果不好还是服务不好惹的你做广告。。。，介绍一下也好大家有一些认识。。

cignoma

CHENHAIBO1986 发表于 2013-6-7 11:49
哥们怎么啦，是使用效果不好还是服务不好惹的你做广告。。。，介绍一下也好大家有一些认识。。

我只能说是骗子。。。其他不解释！