哪里可以找到组胺测定方法

HCSW388

哪里可以找到组胺测定方法

田玉安

组胺的测定
原理： 鱼粉中组胺用三氯乙酸提取，之后调PH=9，将游离的组胺用正戊醇提取出，之后再用HCL反萃取，用偶氮试剂显色。
组胺+三氯乙酸盐（溶于水）-（PH=9---组胺（溶于正戊醇）-----HCL----正戊醇（组胺溶于稀HCL）
组胺的测定
收集水相（下层）于20ml刻度试管内，用水定容至刻度，摇匀，吸取1.00ML（2ML）盐酸提取液于10ML比色管中，加入碳酸氢钠溶液（50g/l）3.0ml摇匀，振荡下加入偶氮试剂3.0ml，用水定容到刻度，室温下显色10min，用1cm比色皿于480nm下测定吸光度。
组胺的测定
偶氮试剂的配制
甲液：称取0.5g对硝基苯胺，加5ml盐酸（1+1）溶解，再加水稀释到200ml，置冰箱中（2~8度）保存。
乙液：亚硝酸钠溶液5g/l，临用现配
甲液5ml、乙液40ml混合后立刻使用。
组胺的测定
步骤（1） 样品处理
  称取1~3克鱼粉于具塞三角瓶内，加入25ml三氯乙酸（100g/l）每隔30分钟摇动一次，称取3小时，过滤，取滤液2ml或1ml于15ml试管内，加氢氧化钠（250g/l）5滴，振荡一下，再加5ml正戊醇振荡2分钟，静止分层（如出现乳化现象可滴加2~3滴无水乙醇），用移液枪小心吸取上清液（正戊醇层）于50ml分液漏斗内，下层沉淀再分别用盐酸（1mol/l）5ml、5ml、3ml反萃取3次。
步骤2：标准曲线法
        称取磷酸组胺样品（Sigma公司）2.7671mg，置于100ml容量瓶内，用水溶解并定容到刻度，此液组胺含量为10ug/ml，分别取此标液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00ml于5支10ml比色管内，各加盐酸（1mol/L）1.0ml，振荡，用水定容到刻度，摇匀后放置10min（室温下），用1cm比色皿于480nm下测吸光值。
        参比液：试剂空白
        计算公式：
                                     C*100              
        (m/25.0)*(1.00/15.0)*1000

        实例：鱼粉2.3455，取三氯乙酸提取液1.00ml，吸光度A=0.257
        标准曲线:A=0.012380*c+0.01310
        计算:c=(A-0.0131)/0.012380=19.70ug
        组胺=[19.70/(2.3455/25)*(1.0/15)*100=315mg/100g=3150ppm
        应用：
            进口白鱼粉：组胺<10mg/100g(1~5mg/100g)
            进口水产级蒸汽鱼粉<100mg/100g(50mg/100g)
            优质国产鱼粉<150mg/100g(50-150mg/100g)
            新鲜度差的鱼粉(国产,进口)组胺200~340mg/100g
        用于乳猪料的鱼粉 组胺<100mg/100g