GTC实验室工作程序

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1．
打开电源：

打开水浴锅、光密度仪、采精杯预热橱、电子称、和显微镜的电源开关。

2．
摇匀贮精：

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将贮存在精液贮存箱中的精液瓶轻柔摇动，使之悬浮均匀（早晚各一次）。

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清点并记录贮存精液的种类和数目。

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同时检查并注意保持贮存箱的温度在16~18℃。（低于15℃会损害精子）

3．
检查贮精质量：

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用毛细管吸取待检精液置于温度为37℃水浴锅中20分钟。

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在400倍显微镜下评估贮存精子的质量，活力不得低于60%、形态异常率不得高于15%，判定使用与否并作记录。

4．
配制稀释液：

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根据当时的精液稀释配制计划，称取一定量的蒸馏水，放入37℃的水浴锅中预热（每头次输精剂量为85~95ML，至少为70ML）。

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将稀释剂按1∶1与蒸馏水充分混匀，放入37℃水浴锅中加热。

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稀释液配制好后30分钟至24小时内使用。

5．
采精前的准备：

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先备采精杯放入预热橱。

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预热盖玻片、载玻片到37℃，预热稀释液到37℃。将光密度仪调至待读状态。

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查看公猪使用记录表，结合配种计划要求，确定可使用公猪及需稀释的头份。

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公猪每周采精一次，不得多于二次，纯繁时需查看公、母猪系谱，防止近交。

6．
采精：

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准备温水和干毛巾。

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根据公猪体高将假台畜调至适当高度。

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将采精公猪赶入采精栏。

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用温水洗净公猪下身，并用毛巾擦干。

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将手洗净擦干，戴上采精专用手套。

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诱使公猪爬上假台畜。

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待其将尿液和包皮积液排净后，用手握成空拳导入阴茎，让其抽动数次后，用手锁住阴茎头，顺势拉出。

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待其射精后，弃掉开始部分的胶体和清亮的副性腺液，收集富含精子的部分。

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公猪射精时间一般为5~15分钟，在没有结束射精时，不要放开采精的手。

7．
原精的处理：

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采精后去掉采精杯上的滤纸和黏液，注意避免杂物掉入精液，插入干净的温度计，测量精液的温度并作记录。

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100倍显微镜下给精子活力评分，不得低于2，否则弃之不用。

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用移液枪吸取定量原精，完全注入已用定量参比液调零的比色杯中混匀，

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测定“OD”值，通过专用的“OD”值与密度值转换表，查到精子密度，作记录。

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电子称上量精液的净重，得到所采精液的体积，作记录。

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鲜精镜检应在精液采用后10~15分钟进行，注意避免阳光直射。

8．
精液的稀释：

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计算可稀释头份=[体积（ML）×浓度（10 /ML）×精子活率÷40。

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根据计划稀释头份计算稀释液用量和精液需要量，并在电子称上称取所需体积的稀释液（每份分装体积为85~95ML）。

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调整稀释液的温度使其与原精温度相差不超过±1℃。

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将所需体积的精液与稀释液混合均匀。

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镜检稀释后精子的活力不得低于60%，精子形态异常率不得低于15%，否则不可用。

9．
包装与贮存：

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用吸耳球将稀释的精液吸入虹吸导管并弃掉开始部分液体。

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分装需缓慢进行并注意注入精液瓶的精液量和瓶盖的质量。

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在瓶身写上公猪耳号和采精日期。

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分装好的精液待其逐步冷却至室温后放入17℃精液专用保温箱贮存。

10．
工作记录：

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填写公猪使用记录表和公猪使用记录卡。

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填写采精记录表内容包括采精日期、采精者姓名、公猪耳号、收集类型（部分或全部）、采精量、采精质量和备注（公猪健康状况和性欲等）。

11．
设备仪器的清洗及保养：

     及时清洗精液配制过程中使用的析具和仪器，并用蒸馏水过滤，将废物、废液及时处理，注意避免清洗剂与精液配制用具接触，注意保持实验室干燥与卫生。