一.试验材料:
注射器、抗凝剂、离心机、吸管、微量滴管、平皿、血液、抗原、有机玻璃血凝板25孔、生理盐水、废弃瓶。
二.试验步骤:
㈠红细胞悬浮液的制备:
①采血,用有抗凝剂的注射器采血5-10毫升。
②离心,将血液吸入离心管中,经3000转离心5-10分钟,吸取上清夜和红细胞上层的白细胞薄膜,将沉淀的红细胞加稀释液洗涤,再加3000转离心5-10分钟,反复三次,将最后一次离心后的细胞泥按5%稀释。
㈡抗原的效价
①用微量滴管吸取2.5毫升生理盐水滴入玻璃血凝板。
②放入抗原 2滴,每孔反复十余次。
③放入红细胞离心过的7%的比例反复十余次。
④沉淀。
⑤恒温37度,20-25分钟。
㈢红细胞凝集效价:能使鸡红细胞完全凝集的病毒液的最高稀释倍数。
①
滴管向玻璃血凝板每孔加生理盐水一滴(0.025)
②
用病毒抗原液0.025毫升加入第一孔内,旋转稀释,反复操作十余次以上,然后移入第二排,第三排。(稀释倍数依次为1:2—1:2048,最后孔为红细胞对照),最后一次丢弃。
③
再以微量滴管加0。5%红细胞悬浮液一滴(同上面抗原反过来操作)。
④
振荡,再置37 恒温箱20-30分钟。
㈣最后的洗涤工作(微量反应板的特点)
①反应板先用自来水反复冲净污物后。
②干燥后,放2-3%浓度的盐酸中浸泡24小时。
③捞出后用自来水冲洗多次,干燥。
④放1%氢氧化钠过夜。
⑤取出,洁净水冲洗37干燥。
五.结果判定:
凡能使4个凝集单位病毒凝集红细胞的作用完全受到抑制的血清最高稀释度(倍数)称为血凝抑制价。
血凝抑制价在1:80以上为阳性,1;40为可疑,1:20为阴性。
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