维生素K3的检验方法！！

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原理
在氨存在的条件下维生素K3与氰乙酸乙酯形成蓝紫色物质，在575nm下的吸光度值与维生素K3的浓度成正比，用分光光度计测定有色物质的吸光度值，定量分析样品中维生素K3的含量。本法检出限为0.05mg。
2.适用范围
本方法适用于强化食物及饲料中水溶性维生素K3的测定。
3.仪器
分光光度计
4.试剂
本实验所用试剂均为分析级，实验用水为蒸馏水。
（1） 0.1mol/L碘溶液：称取25g KI 溶解于20ml水中，加入9.8g碘，混匀溶解，加水至750ml。贮存于棕色瓶中，避光保存24h。
（2） 0.1mol/L硫代硫酸钠：将水煮沸后冷却。称取25g Na2S2O3·5H2O溶解于500ml含0.1g Na2CO3 的冷却水中，并用冷却的水稀释至1000ml 。
（3） 淀粉指示剂：称取2g可溶性淀粉，加于10ml水中，摇匀。然后缓慢加至200ml沸水中，煮2 min。
（4） 氨水+异丙醇（1+1）溶液：取异丙醇与等体积的浓氨水混合。
（5） 氰乙酸乙酯（30g/L）：取3g氰乙酸乙酯溶解于100 ml异丙醇中。
（6） VK3标准溶液（0.1 mg/ml）：准确称取50mgVK3标准品，转至500ml棕色容量瓶中，用异丙醇溶解并定容至刻度。
5.测定步骤
所有操作均需避光进行
5.1 提取：准确称取约15g已混匀的样品，准确加入100ml水，搅拌10min，保证VK3充分溶解与混匀。过滤，如滤液浑浊，则反复过滤至澄清。
5.2 氧化：吸取40ml滤液至100 ml容量瓶中，加1～2滴淀粉指示剂，用0.1mol/L碘溶液滴定，至出现持续的蓝色。向溶液中滴入1滴0.1mol/L Na2S2O3消除蓝色。用水定容至刻度。
（注：碘溶液的作用是作为氧化剂氧化样品中的还原性物质，多余的碘溶液可使淀粉变成蓝色，Na2S2O3则是去除多余的氧化剂，消除兰色，以避免有色物质影响测定。）
5.3 标准管和样品管的制备：分别取2套20ml比色管，分别按表1顺序加入VK3标准溶液、样品提取液及试剂，制备标准管和样品管。

用水定容至20ml，摇匀，放置20min。
（注：样品管和标准管中水定容的体积与显色强度、显色的稳定时间密切相关，如果定容体积过少，则色度较弱，且稳定时间短。如按本方法的操作进行，显色反应至少可以稳定2小时。
5.4比色测定：用分光光度计于575cm波长下，以标准0管做空白管，调节仪器零点，测定各管吸光度值。
6.计算
以标准VK3含量作横坐标，吸光度值作纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。用样品测定管与空白管吸光度值的差值在标准曲线上查出样品管的VK3含量，然后计算出样品中VK3的含量。


7.注意事项
（1） 同一实验室平行测定或重复测定结果的相对偏差绝对值＜10%。
（2） 天然食物中不含有维生素K3，只有部分强化食物可能用VK3作为强化剂。有文献报道人工合成维生素K3可能有一定的毒副作用，尽管目前还没有有力的证据支持这一论点，但是现在市场上应用维生素K3作为强化剂的产品较少见。饲料常用维生素K3作为维生素K 的来源，所以维生素K3的测定对饲料检测和质量控制更有意义。

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