使用“甲醛法”在饲料生产中用于测定粗蛋白的论述

apple12151007 · 发表于 2010-12-13 17:15:36

　　目前对饲料中的蛋白质测定方法很多，各公司在过程控制中对检验设备的投入也逐渐加大。虽然检验方法大都采用凯氏定氮法，原来是凯氏定氮玻璃仪器和两个铁架台连接的定氮装置，现在有了先进的设备如FOSS的全自动凯氏定氮仪样品消化后打开仪器即可自动执行样品稀释、接受液添加、加碱、蒸馏、滴定直到计算结果、出报告，仪器设备非常先进但价格也是很多小企业无法承受的，买到家也需要3.6万美元，折合人民币也十几万，非常昂贵的。本人从事多年的饲料生产控制和检验，为了快速的知道生产情况和产品质量情况，比较了大量的蛋白质测定法，国标法我就省略不述，大家可以在网上查找GB/T6432-1994 。现把甲醛法介绍给大家，供大家分享。
　　检验方法：甲醛法
　　1、样品的制备
　　在生产线随机采集样品(我公司生产的是玉米蛋白粉，不需粉碎;如果是豆粕颗粒较大的饲料，需粉碎后全部通过40目筛)，分别采用四分法将检样缩至500g，装于密闭容器中，防止试样成分变化或变质。
　　2、原理
　　将试样置于三角瓶中，加双氧水、浓硫酸，加热，在有机物分解时，蛋白质及有机氮化合物中的氮形成铵盐，甲醛与铵盐可发生络合反应生成六次甲基四胺【(CH2)6N4】,在反应中同时生成等量的硫酸，用碱液直接滴定，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
　　3、仪器和试剂
　　3.1 三角烧瓶150ml;
　　3.2 可调电炉1000W-2000W
　　3.3 氢氧化钠标准溶液：c(NaOH)=0.05mol/L
　　3.4 氢氧化钠溶液：c(NaOH)=0.1mol/L
　　3.5 4 mol/L硫酸溶液
　　3.6 40%的氢氧化钠溶液
　　3.7 1：1甲醛-乙醇溶液：
　　3.8 0.2%甲基红指示液
　　3.9 1%酚酞指示液
　　4、试验步骤
　　称取试样0.5～1g准确至0.0001g，放入三角烧瓶中，加入2mL浓硫酸、10ml双氧水，先用低温加热消化至泡沫消失，再加大功率，直至瓶中白烟基本赶尽，取下三角瓶冷却至室温，加蒸馏水50ml摇匀，再加0.2%甲基红指示液2-3滴，用40%氢氧化钠溶液调至溶液显黄色，立即用4 mol/L硫酸溶液滴加至红色，然后放在电炉上煮沸1-2min，取下加盖，冷却至室温，用0.1mol/L氢氧化钠溶液中和至溶液红色消失，加10ml1：1甲醛-乙醇溶液(预先用酚酞为指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠溶液中和至溶液显粉红色PH=8.3)，酚酞指示剂2-3滴，摇匀后静止1min，使之反应完全，然后用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至溶液显粉红色，即为终点。记下消耗的氢氧化钠标准溶液的毫升数。
　　5、计算：
　　式中：V---消耗氢氧化钠标准溶液的毫升数;
　　c---- 氢氧化钠标准溶液浓度;
　　M----样品质量，g;
　　X0---样品的水分，%。
　　与国标法比较结论：
　　此方法在检验数据上与国标相比，相对偏差低于0.5%，但在检测时间上甲醛法做完一个样仅需0.5-1h，但国标法仅消化就得2h以上，再加上蒸馏半小时，滴定等操作，需要3-4h。在生产过程中使用甲醛法进行产品判定，节省了时间，一旦产品质量出现异常就可立即做出纠正处理，节约返工造成的浪费。另外，在节能和废液处理上，因为甲醛法消化时间较短，节约了2-3度电;因为不需要蒸馏，用的浓硫酸和氢氧化钠也比国标法少，产生的废液也少，减少环境污染。
　　参考资料：GB/T6432-1994 饲料中粗蛋白的测定方法

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