九鼎集团养猪服务中心诊断实验室简介

湖南九鼎 · 发表于 2010-12-8 10:13:34

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九鼎集团养猪服务中心诊断实验室于2010年5月正式成立，这是九鼎企业向服务型公司转变的又一重大举措。为便于更好地为养猪客户服务，让客户对猪病诊断实验室工作的内容与作用有所了解，现特作如下介绍：

猪病诊断实验室总投资200多万元，拥有当前较先进的仪器与设备，采用国家认可的美国IDXX公司进口的标准试剂盒。实验室现有员工四名，其中硕士研究生一名，大学本科三名，且都具有多年的猪场实践工作经验，不仅能为客户猪场准确检测各项数据，还能根据检测结果分析指导，为客户猪场提供切实可行的猪场问题解决方案。猪病诊断实验室工作不仅有集团服务专家团队作后盾，还有遍布各营销省区的二十多位市场服务经理作先锋，可深入所需客户猪场现场指导，为客户真正解决生产实际中遇到的各种难题。

实验室开展的主要项目有：

1、三大主要病毒性疾病的抗体水平检测；

2、常见致病性细菌的分离培养及药物敏感试验；

3、饲料、原料的霉菌毒素检测及常规生化指标检测。

一、抗体水平的检测原理及结果判断方法

猪病诊断实验室主要针对猪瘟、蓝耳、伪狂犬三大重要的病毒性疾病的抗体水平检测。

1、猪瘟（CSFV）抗体水平检测

①、原理：阻断ELISA，用CSFV抗原包被微量反应板，如果被检样品中存在CSFV Ab,就会阻断HRPO-抗CSFV单克隆抗体与抗原包被板的反应。抗CSFV单克隆抗体与抗原的结合可以通过HRPO酶与底物的显色程度来判定。酶标仪记录在450nm处各样本OD值。

②、结果判定：

阴性对照平均值＞0.50，阳性对照阻断率＞50%，该检测结果才有效。阻断率blocking%=(阴性对照平均值-样本OD值)/阴性对照平均值×100%。

样本阻断率≥40%判定为阳性；

样本阻断率≤30%判定为阴性；

样本阻断率在30%-40%之间判定为可疑，就应该在数日后采血重测。

阻断率≥50%代表免疫合格，良种场要求CSFV Ab 阳性率100%，合格率90%。样本离散度种用猪CV要求＜20，肉猪＜25。

③、猪瘟疫苗种猪正常免3次后抗体水平范围（参考）：

疫苗种类
阻断率范围

普通细胞苗

45-75

高效细胞苗/组织苗

55-95

脾淋苗

65-100

结合实际免疫所用疫苗种类，样本平均值要求在参考范围内，高于参考值提示已经感染猪瘟，低于参考值提示该种疫苗免疫效果不好。

2、猪蓝耳病毒（PRRSV）抗体水平检测

①、原理：将重组的PRRSV抗原包被在微量反应板上，被检测样品在包被孔中孵育时，针对PRRSV的特异性抗体与之形成抗原抗体复合物，洗去未结合成分后，加入HRPO标二抗，与之前的抗原抗体复合物结合，洗去没有结合的酶标抗体，再加入酶底物和显色剂，颜色的深浅有存在的抗PRRSV特异性抗体的量决定。

②、结果判定：阳性对照平均值-阴性对照平均值≥0.150，阴性对照平均值≤0.150，试验才成立。S/P值=（样本OD值-阴性对照平均值）/（阳性对照平均值-阴性对照平均值）

S/P≥0.4该样本判定为阳性

S/P＜0.4该样本判定为阴性

③
、猪场PRRSV抗水平要求：

对免疫过PRRSV疫苗的感染群，通常有以下几种抗体模式：稳定种猪群S/P2.0左右，很少大于2.5；良好免疫群S/P0.7-1.8，有些可能大于2.0。

S/P大于2.5提示病毒血症；

S/P大于3.5提示急性感染。

良好场要求抗体阳性率100%，S/P值在0.7-2.5的占90%。样本离散度CV越小越好，样本平均值要求1.2±0.4范围内。

3、猪伪狂犬（PRV-gB）抗体水平检测

①、原理：通过40倍稀释的样品在抗原包被的微孔板上进行。初次孵育时，存在于检测样品中的PRV抗体会与酶标板上的抗原结合。然后开始洗涤步骤，向微孔板中加入酶标记的抗PRV gB的单克隆抗体，进行第二次孵育，在此过程中其与抗原竞争结合。如果检测样品中不存在PRV gB抗体，酶标单抗就可以与抗原自由结合，相反，如果检测样品中存在PRV gB抗体，酶标单抗与抗原的结合就会被阻断。而在此次孵育过后，未结合的酶标单抗就会被冲洗掉，加入底物/显色剂溶液后，在酶的存在下，底物转变为一种能与显色剂反应产生蓝色的物质。使用分光光度计测量650nm的吸收值A(650)。

②、结果判定：S/N=样本OD值/阴性对照平均值

S/N＞0.70该样本被判定为阴性；

S/N≤0.60该样本被判定为阳性；

S/N介于0.60-0.70该样本判定为可疑，过一段时间后重新采血测。

③、良好场要求：

在猪场应用伪狂犬基因工程缺失苗的前提下，测PRV-gB抗体水平可以评估疫苗的免疫效果，良好场要求抗体阳性率90%。

二、常见致病性细菌的分离培养及药物敏感试验

（一）、常用的几种细菌染色方法：

1、革兰氏染色法；2、瑞士染色法；3、吉姆萨染色法。

（二）、猪场常见的八种细菌：

1、猪丹毒；2、链球菌；3、巴氏杆菌；4、副猪嗜血杆菌；5、胸膜肺炎放线菌；

6、大肠杆菌；7、沙门氏菌；8、葡萄球菌。