无公害食品 牛肉

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　　本标准上中华人民共和国农业部提出。
　　本标准起草单位：南京农业大学、中国畜产品加工研究会。
　　本标准主要起草人：周光宏、徐幸莲、孙京新、汤晓艳、黄明、邹晓葵。
　　1 范围
　　本标准规定了无公害牛肉的定义、技术要求、检验方法、标志、包装、贮存和运输。
　　本标准适用于来自非疫区的无公害肉牛，屠宰后经兽医检疫合格的牛肉。
　　2 规范性引用文件
　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
　　GB 191 　包装储运图示标志
　　GB 2708　　牛肉、羊肉、兔肉卫生标准
　　GB 4789.2　　食品卫生微生物学检验　菌落总数测定
　　GB 4789.3　　食品卫生微生物学检验　大肠菌群测定
　　GB 4789.4　　食品卫生微生物学检验　沙门氏菌测定
　　GB/T 5009.11　　食品中总砷的测定方法
　　GB/T 5009.12　　食品中铅的测定方法
　　GB/T 5009.15　　食品中镉的测定方法
　　GB/T 5009.17　　食品中总汞的测定方法
　　GB/T 5009.19　　食品中六六六、滴滴涕残留量的测定方法
　　GB/T 5009.44 肉与肉制品卫生标准的分析方法
　　GB/T 6388　　运输包装收发货标志
　　GB 7718 　　食品标签通用标准
　　GB/T 9960　　鲜、冻四分体带骨牛肉
　　GB 12694　　肉类加工厂卫生规范
　　GB/T 14962　　食品中铬的测定方法
　　NY 467　　畜禽屠宰卫生检疫规范
　　NY 5029-2001　　无公害食品　猪肉
　　3 技术要求
　　3.1 原料
　　活牛原料必须来自非疫区，经当地动物防疫监督机构检验合格。
　　3.2 屠宰加工
　　屠宰加工规范及卫生检验要求按NY 467和GB/T 9960规定执行。
　　3.3 官指标
　　感官指标应符合GB 2708规定。
　　3.4 理化指示
　　理化指标应符合表1的要求。

　　表 1 无公害牛肉理化指标

项 目	指 标
解冻失水率，％ ≤	8
挥发性盐基氮， mg ／ 100 g ≤	15
汞 ( 以 Hg 计 ) ， mg/g  ≤	按 GB ／ T9960
铅 ( 以 Pb 计 ) ， mg ／ kg ≤	0.50
砷 ( 以 As 计 ) ， mg ／ kg ≤	0.50
镉 ( 以 Cd 计 ) ， mg/g ≤	0.10
铬 ( 以 Cr 计 ) ， mg/g ≤	1.0
六六六， mg/g ≤	0.10
滴滴涕， mg ／ kg ≤	0.10
金霉素， mg ／ kg ≤	0.10
土霉素， mg ／ kg ≤	0.10
磺胺类 ( 以磺胺类总量计 ) ， mg ／ kg ≤	0.10
伊维菌素 ( 脂肪中 ) ， mg ／ kg ≤	0.04

　　3.5 微生物指标
　　微生物指标应符合表2的规定。
　　表 2 无公害牛肉微生物指标

项 目	指 标
菌落总数， cfu ／ g ≤	18*106
大肠菌群， MPN ／ 100 g ≤	1*104
沙门氏菌	不得检测

　　4 检验方法
　　4.1 检验方法
　　按GB/T5009.44规定方法执行。
　　4.2 理化检验
　　4.2.1 解冻失水率
　　按NY 5029-2001中附录A执行。
　　4.2.2 挥发性盐基氮
　　按GB/T5009.44规定方法测定。
　　4.2.3 铅
　　按GB/T5009.12规定方法测定。
　　4.2.4 砷
　　按GB/T5009.11规定方法测定。
　　4.2.5 镉
　　按GB/T5009.15规定方法测定。
　　4.2.6 汞
　　按GB/T5009.17规定方法测定。
　　4.2.7 铬
　　按GB/T14962规定方法测定。
　　4.2.8 六六六、滴滴涕
　　按GB/T5009.19规定方法测定。
　　4.2.9 金霉素
　　按NY5029-2001中附录B规定方法测定。
　　4.2.10 土霉素
　　按NY5029-2001中附录C规定方法测定。
　　4.2.11 磺胺类
　　按NY5029-2001中附录E规定方法测定。
　　4.2.12 伊维菌素
　　按NY5029-2001中附录F规定方法测定。
　　4.3 微生物检验
　　4.3.1 菌落总数
　　按GB4789.2检验。
　　4.3.2 大肠菌群
　　按GB4789.3检验。
　　4.3.3 沙门氏菌
　　按GB4789.4检验。
　　5 标志、包装、贮存、运输
　　5.1 标志
　　内包装(销售包装)标志应符合GB7718的规定执行，外包装的标志应按GB191和GB/T6388的规定执行。
　　5.2 包装
　　包装材料符合相应的国家食品卫生标准。
　　5.3 贮存
　　产品应贮存在通风良好的场所，不得在有毒、有害、有异味、易挥发、易腐蚀的物品同处贮存。
　　5.4 运输
　　应使用符合食品卫生要求的专用冷藏车(船)，不得有对产品发生不良影响的物品混装。
　　附 录A
　　(规范性附录)
　　解冻失水率的测定
　　A.1 仪器和工具
　　电子秤：感量1g;
　　温度计：-10℃-50℃，分度值1.5℃。
　　A.2 抽样
　　从每批产品中随机抽取3-7件。样品在运输过程中应使用保温设备，以免解冻流失水份。
　　A.3 测定步骤
　　将铁丝网置于搪瓷盘内，并使铁丝网与搪瓷盘底部的距离大于2cm。从抽取的样品中切取的1000g-1200g，用电子秤称量后置于铁丝网上。在样品上覆盖塑料膜，使样品在15℃-25℃自然解冻。待样品中心温度达到2℃-3℃时，用电子秤称量。再将样品置于铁丝网上放置30min，称量，重复放置30min再称量，直至连续两次称量差不超过20g。
　　A.4 测定结果的表述
　　样品解冻失水率按式(A.1)计算：
　　X(%)=m-m1/m×100……………………(A.1)
　　式中：
　　X-样品解冻失水率，单位为百分率(%);
　　m-样品解冻前的质量，单位为克(g);
　　m1-样品解冻后的质量，单位为克(g)。
　　计算结果保留至整数。 A.5 允许差
　　同一样的两次测定值之差，不得超过平均值的5%。
　　附 录 B
　　(规范性附录)
　　金霉素残留的高效液相色谱测定法
　　B.1 适用范围
　　本方法用于测定鸡和猪的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中金霉素的残留量。
　　B.2 原理
　　组织中金霉素经MCI-Vaine-Na2EDTA缓冲液(PH4.0)提取，过滤后，通过C18微柱水洗，用草酸甲醇将药物洗脱，洗脱液用高效液相色谱仪进行测定。
　　B.3 可靠的检测限
　　本方法在肌肉、肝脏、脂肪和肾脏组织中的检测限为0.05μg/g。
　　B.4 仪器
　　B.4.1 高效液相色谱仪，配紫外检测器。
　　B.4.2 匀浆机。
　　B.4.3 离心机。
　　B.4.4 旋涡混合器。
　　B.4.5 自动电位滴定计。
　　B.4.6 磁力加热搅拌器。
　　B.4.7 C18微柱。
　　B.4.8 布氏漏斗。
　　B.4.9 球形漏斗。
　　B.4.10 滤膜：0.45μm。
　　B.4.11 抽滤瓶。
　　B.5 药品和试剂
　　B.5.1 盐酸金霉素标准品：纯度≥84%。
　　B.5.2 乙腈：色谱纯。
　　B.5.3 甲醇：分析纯。
　　B.5.4 乙酸铵：分析纯。
　　B.5.5 柠檬酸：分析纯。
　　B.5.6 依地酸二钠：分析纯。
　　B.5.7 磷酸氢二钠：分析纯。
　　B.5.8 草酸：分析纯。
　　B.5.9 三氟乙酸：分析纯。
　　B.5.10 N，N-二甲基甲酰胺：分析纯。 B.5.11 草酸铵：分析纯。
　　B.5.12 磷酸氢二铵：分析纯。
　　B.6 溶液
　　B.6.1 金霉素标准液：准确称取适量盐酸金霉素，用甲醇溶解，使成浓度为100μg/mL的标准储备液，置冰箱保存。临用前，取此储备液，用甲醇依次衡释成浓度为5.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.1、0.05μg/mL的标准工作液。
　　B.6.2 MCI-Vaine缓冲液：准确称取Na2HPO428.41g，用水溶解，定容于1000mL容量瓶中，简称溶液A。准确称取柠檬酸21.00g，用水溶解，定容于1000mL容量瓶中，简称溶称液B。取625mL溶液A和1000mL溶解B混匀，调节pH至4.0±0.05。
　　B.6.3 MCI-Vaine-Na2EDTA液：准确称取Na2EDTA60.49g溶解于1625mL的MCI-Vaine液中，使成0.01mol/L Na2EDTA的MCI-Vaine液。
　　B.6.4 0.01mol/L草酸甲醇溶液：准确称取草酸1.26g,用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。
　　B.6.5 0.01mol/L草酸溶液：准确称取草酸1.26g，用水溶解并定容于1000mL容量瓶中。
　　B.7 分析
　　B.7.1 提取和纯化
　　B.7.1.1 称取5.00g组织匀浆放入50mL聚丙烯离心管中，添加TCS药物，使成相应的浓度。
　　B.7.1.2 加入20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液，盖上帽，漩涡半分钟，手摇5min。
　　B.7.1.3 4500r/min的速度离心10min，上清液倒入另一离心管，再加入20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩涡分半分钟，手摇5min。
　　B.7.1.4 4500r/min的速度离心5min，上清液倒入上个试管中，再加入10mL MCI-Vaine-Na2EDTA 液于沉淀中，漩涡半分钟，手摇5min。
　　B.7.1.5 4500r/min 的速度离心5min，混合全部上清液(共50mL)，4500r/min的速度离心10min。
　　B.7.1.6 用MCI-Vaine-Na2EDTA液湿润抽滤瓶、布氏漏斗及滤纸，用较小真空(水泵)过滤上清液，2×2mL MCI-Vaine-Na2EDTA液洗抽滤瓶在放入注射器中。
　　B.7.1.7 C18微柱先依次用20mL甲醇，20mL水冲洗，之后将过滤的液体倒入50mL注射器中，用2×2mL MCI-Vaine-Na2EDTA 液洗抽滤瓶并放入注射器中。
　　B.7.1.8 过C18微柱，使TCS药物吸附在C18微柱上。
　　B.7.1.9 用20mL 水冲洗抽滤瓶倒入注射器中，并过滤，水洗C18微柱。
　　B.7.1.10 用水冲洗完全后，顶空5min。
　　B.7.1.11 用6.0mL 0.01mol/L草酸甲醇液把TCS药物从C18微柱中洗脱于10mL容量瓶中，用水定容至刻度。
　　B.7.1.12 上述液用滤膜过滤后，上高效液相色谱仪进行检测。
　　B.7.2 测定条件
　　B.7.2.1 色谱柱：C18柱。
　　B.7.2.2 流动相：甲醇-乙腈-0.01mol/L草酸(1.5+1.5+2.0,pH=2.0)。
　　B.7.2.3 流速：1.5mL/min。
　　B.7.2.4 检测波长：350nm.
　　B.7.2.5 进样量：10μL。
　　B.7.3 样品测定
　　分析样品按上述仪器操作条件供高效液相色谱仪分析。
　　B.7.4 计算
　　用色谱数据处理机或按式(B.1)计算试样中金霉素残留量：
　　W=H·CS/HS·C………………………………(B.1)
　　式中：
　　W-试样中金霉素残留量，单位为微克每克(μg/g);
　　H-试样液中金霉素的峰高，单位为毫米(mm);
　　Hs-标准工作液中金霉素的峰高，单位为毫米(mm);
　　CS-标准工作液中金霉素的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);
　　C-最终试样液所代表的试样的浓度，单位为克每毫升(g/mL)。
　　注：计算结果需扣除空白值。
　　附 录 C
　　(规范性附录)
　　土霉素残留的高效液相色谱测定法
　　C.1 适用范围
　　本方法用于测定动物可食性组织中土霉素的残留素。
　　C.2 原理
　　组织经MCI-Vaine-Na2EDTA缓冲液(pH4.0)提取，过滤后，通过C18微柱水洗后，用草酸甲醇将药物洗 脱，洗脱液用高效液相色谱仪进行检测。
　　C.3 可靠的检测限
　　本方法在动物可食性组织中的检测限为0.05μg/g。
　　C.4 仪器。
　　C.4.1 高效液相色谱仪，配紫外检测器。
　　C.4.2 匀浆机。
　　C.4.3 离心机。
　　C.4.4 漩涡混合器。
　　C.4.5 自动电位滴定计。
　　C.4.6 磁力加热搅拌器。
　　C.4.7 C18微柱。
　　C.4.8 布氏漏斗。
　　C.4.9 球形漏斗。
　　C.4.10 滤膜：0.45μm。
　　C.4.11 抽滤瓶。
　　C.5 药品和试剂
　　C.5.1 盐酸土霉素标准品：纯度≥90%。
　　C.5.2 乙腈：色谱纯。
　　C.5.3 甲醇：分析纯。
　　C.5.4 乙酸铵：分析纯。
　　C.5.5 柠檬酸：分析纯。
　　C.5.6 依地酸二钠：分析纯。
　　C.5.7 磷酸氢二钠：分析纯。
　　C.5.8 草酸：分析纯。
　　C.5.9 三氟乙酸：分析纯。
　　C.5.10 N，N-二甲基甲酰胺：分析纯。
　　C.5.11 草酸铵：分析纯。
　　C.5.12 磷酸氢二铵：分析纯。
　　C.6 溶液
　　C.6.1 土霉素标准液：准确称取适量盐酸土霉素标准品，用甲醇配成浓度为100μg/mL的标准储备液，置冰箱中保存。临用前，取此储备液，用甲醇依次稀释成浓度为5.0、0.2、1.0、0.5、0、25、0.1、0.05μg/mL的标准工作液。
　　C.6.2 MCI-Vaine缓冲液：准确称取Na2HPO428.41g,用水溶解，定容于1000mL,容量瓶中，简称溶液A。准确称取柠檬酸21.00g，用水溶解，定容于1000mL容量瓶中，简称溶液B。取625mL溶液A和1000mL溶液B混匀，调节pH至4.0±0.05。
　　C.6.3 MCI-Vaine-Na2EDTA液：准确称取Na2EDTA60.49g溶解于1625mL的MCI-Vaine液中，使成含0.01mol/L Va2EDTA的MCI-Vaine液。
　　C.6.4 0.01mol/L草酸甲醇：准确称取草酸1.26g，甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。
　　C.6.5 0.01mol/L草酸溶液:准确称取草酸1.26g，水溶解并定容于1000mL容量瓶中。
　　C.7 分析
　　C.7.1 提取和纯化
　　C.7.1.1 称取5.00g组织匀浆(精确到0.1g)放入50mL聚丙烯离心管中，添加TCS药物，使成相应的浓度。
　　C.7.1.2 加20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液,盖上帽，漩涡半分钟，手摇5min。
　　C.7.1.3 以4500r/min的速度离心10min，上清液倒入另一离心管，再加20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩涡半分钟，手摇5min。
　　C.7.1.4 以4500r/min的速度离心5min，上清液倒入另一离心管，再加10mL MCI-Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩涡半分钟，手摇5min。
　　C.7.1.5 以4500r/min的速度离心5min,混合全部上清液(共50mL)，以4500r/min的速度离心10min。
　　C.7.1.6 用MCI-Vaine-Na2EDTA液湿润抽滤瓶、布氏漏斗及滤纸，用较小真空(水泵)过滤上清液，2×2ml MCI-Vaine-Na2EDTA液洗抽滤瓶并过滤。
　　C.7.1.7 C18微柱先依次用20mL甲醇，20mL水冲洗，之后将过滤的液体倒入50mL注射器中，用2×2ml MCI-Vaine-Va2EDTA液洗抽滤瓶并放入注射器中。
　　C.7.1.8 C18微柱，使TCS药物吸附在C18微柱上。
　　C.7.1.9 用20mL 水冲洗抽滤瓶倒入注射器中，并过滤，水洗C18微柱。
　　C.7.1.10 用水冲洗完全后，顶空5min。
　　C.7.1.11 用6.0mL 0.01mol/L草酸甲醇液把TCS药物从C18微柱中洗脱于10mL容量瓶中，用水定容至刻度。
　　C.7.1.12 上述液用滤膜过滤后，供高效液相色谱仪进行检测。
　　C.7.2 测定条件
　　C.7.2.1 色谱柱：C18柱。
　　C.7.2.2 流动相：甲醇-乙腈-0.01mol/L草酸(1.5+1.5+2.5)。
　　C.7.2.3 流速：1.5mL/min。
　　C.7.2.4 检测波长：350nm。
　　C.7.2.5 进样量：10μL。
　　C.7.3 样品测定
　　分析样品按上述仪器作条件供高效液相色谱仪分析。
　　C.7.4 计算
　　用色谱数据处理机或按式(C.1)计算试样中土霉素残留量：
　　W=H·CS/HS·C………………………………(C.1)
　　式中：
　　W-试样中土霉素残留量，单位为微克每克(μg/g);
　　H-试样液中土霉素的峰高，单位为毫米(mm);
　　Hs-标准工作液中土霉素的峰高，单位为毫米(mm);
　　CS-标准工作液中土霉素的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);
　　C-最终试样液所代表的试样的浓度，单位为克每毫升(g/mL)。
　　注：计算结果需扣除空白值。
　　附 录 E
　　(规范性附录)
　　磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法
　　E.1 适用范围
　　本方法用于测定动物可食性组织中磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺甲恶唑(SMZ)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺喹恶琳(SQ)单个或混合物的残留量。
　　E.2 原理
　　组织经乙腈提取后，其上清液再加入正已烷，向离心后的下层溶液加入正丙醇，减压干燥后的残留物用乙腈溶解，过Sep-Pak氧化铝B柱，洗脱液再用正丙醇处理，减压干燥后的残留物经流动相溶解后，所制样液用高效液相色谱仪进行检测。
　　E.3 可靠的检测限
　　本方法在动物可食性组织中的检测限为0.05μg/g。
　　E.4 仪器
　　E.4.1 高效液相色谱仪，配紫外检测器。
　　E.4.2 匀浆机。
　　E.4.3 旋转蒸发仪。
　　E.4.4 磁力搅拌器。
　　E.4.5 电子天平：感量0.00001g。
　　E.4.6 离心机。
　　E.4.7 振荡器。
　　E.4.8 抽滤器。
　　E.4.9 离心管。
　　E.5 药品和试剂
　　E.5.1 SMM,SM2,SMZ,SDM,SQ标准：纯度≥99%。
　　E.5.2 乙腈：色谱纯。
　　E.5.3 甲醇：分析纯，经重蒸馏。
　　E.5.4 乙酸：分析纯。
　　E.5.5 正已烷：分析纯，经重蒸馏。
　　E.5.6 正丙醇：分析纯，经重蒸馏。
　　E.5.7 无水硫酸钠：分析纯。
　　E.6 溶液
　　磺胺类药物标准液：准确称取适量各个磺胺药，用甲醇溶解，配制成适当浓度的标准储备液。临用前，取此储备液，用流动相稀释成浓度为0.1μg/mL-20μg/mL的标准工作液。
　　E.7 分析
　　E.7.1 Sep-Pak氧化铝B柱的制备
　　称取高温下加热3h的氧化铝粉，加水搅拌均匀，振荡3h后填充入玻璃柱中，用95%乙腈5mL前处理后备用。
　　E.7.2 提取和纯化
　　称取组织样品5g(精确到0.1g)，加入乙腈25mL，无水硫酸钠少许(血清除外)，匀浆后以3000r/min的速度离心5min。分离后的残渣再用25mL乙腈处理，振荡10min后，以3000r/min的速度离心5min。合并两次的上清液，加入正已烷30mL，振荡10min后，以3000r/min的速度离心5min，取下层液体，加入正丙醇10mL，50℃下减压干燥，残留物用95%乙腈3mL溶解，过Sep-Pak氧化铝B柱。用95%乙腈5 mL过柱，不收集，再用70%乙腈10mL洗脱后，洗脱液中加入5mL正丙醇，50℃下减压干燥后，残留物用2.0mL流动相溶解，所制样液用高效液相色谱仪进行检测。 E.7.3 检测条件
　　E.7.3.1 色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm i.d.。
　　E.7.3.2 流动相：乙腈-甲醇-水-乙酸(2+2+9+0.2)。
　　E.7.3.3 流动相流速：1.0ml/min。
　　E.7.3.4 检测波长：270nm。
　　E.7.3.5 进样量：20μL。
　　E.7.4 样品测定
　　分别将等体积标准液和试样溶液注入液相色谱仪，标准工作液及试样中磺胺类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。试样液测定过程中要参插注入标准工作液，以便准确定量。
　　E.7.5 计算
　　用色谱数据处理机或按式(E.1)计算试样中磺胺类药物残留量：
　　W=H·CS/HS·C………………………………(E.1)
　　式中：
　　W-试样中磺胺类药物残留量，单位为微克每克(μg/g);
　　H-试样液中磺胺类药物峰高，单位为毫米(mm);
　　Hs-标准工作液中磺胺类药物峰高，单位为毫米(mm);
　　CS-标准工作液中磺胺类药物浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);
　　C-最终试样液所代表的试样的浓度，单位为克每毫升(g/mL)。
　　注：计算结果需扣除空白值。
　　附 录 F
　　(规范性附录)
　　伊维菌素残留的高效液相色谱测定法
　　F.1 适用范围
　　本方法用于测定牛、羊、猪肝脏、肌肉和脂肪组织中伊维菌素的残留量。
　　F.2 原理
　　组织中伊维菌素经已腈提取后用C18固相萃取柱净化，在三氟乙酸酐和N-甲基咪唑存在下，脱水生成荧光化合物，用高效液相色谱仪进行测定。
　　F.3 可靠的检测限
　　本方法在动物可食性组织中的检测限为2ng/g。
　　F.4 仪器
　　F.4.1 高效液相色谱仪，配荧光检测器。
　　F.4.2 匀浆机。
　　F.4.3 离心机。
　　F.4.4 旋转蒸发仪或氮气吹蒸装置。
　　F.4.5 旋涡混合器。
　　F.4.6 SPE柱(C18柱，6mL)。
　　F.5 药品和试剂
　　F.5.1 伊维菌素标准品：纯度≥90%。
　　F.5.2 乙腈：色谱纯。
　　F.5.3 甲醇：色谱纯。
　　F.5.4 N-甲基咪唑：纯度≥99%。
　　F.5.5 三氟乙酸酐：纯度≥99%。
　　F.6 溶液
　　F.6.1 伊维菌素标准液：准确称取适量伊维菌素标准品，用甲醇溶解，使成浓度为100μg/mL的标准储备液，置-20℃冰箱中保存，可保存一年。临用前，取此储备液，用甲醇稀释成适当浓度的标准工作液。
　　F.6.2 水-乙腈溶液(9+1)。
　　F.6.3 三氟乙酸酐-乙腈溶液(1+2)。
　　F.6.4 N-甲基咪唑-乙腈溶液(1+1)。
　　F.7 分析
　　F.7.1 提取和纯化
　　称取4.0g组织(精确到0.1g)，加入40mL乙腈，高速匀浆2min，将样品转至离心管中，以20000 r/min的速度离心10min，沉淀物用乙腈(20mL×2)重复提取2次，离心后会并提取液，用旋转蒸发仪(60℃)将提取液浓缩蒸去乙腈，向残留物中添加10mL水，摇匀。
　　C18预柱依次用4mL乙腈和4mL水-乙腈溶液平衡，使样品液通过C18柱(1mL/min)，吹去柱内残留的液体，用5mL乙腈洗脱柱内吸附的伊维菌素，用旋转蒸发仪蒸去溶剂。向残留物中依次加入150μL三氟乙酸酐-乙腈溶液和100μL N-甲基咪唑-乙腈溶液，经经摇匀后密闭、避光存放，30s后即可供高效液相色谱仪测定。
　　F.7.2 测定条件
　　F.7.2.1 色谱柱：C18柱，150mm×4.6mm i.d.，粒度5μm。
　　F.7.2.2 流动相：甲醇-水(95+5)。
　　F.7.2.3 流动相流速：1.5mL/min。
　　F.7.2.4 荧光检测：激发波长364nm，发射波长470nm。
　　F.7.2.5 进样量：10μL。
　　F.7.3 样品测定
　　将分析样品按上述操作条件供高效液相色谱仪分析。
　　F.7.4 计算
　　用色谱数据处理机或按式(F.1)计算试样中伊维菌素物残留量：
　　W=H·CS/HS·C………………………………(F.1)
　　式中：
　　W-试样中伊维菌素残留量，单位为微克每克(μg/g);
　　H-试样液中伊维菌素峰高，单位为毫米(mm);
　　Hs-标准工作液中伊维菌素峰高，单位为毫米(mm);
　　CS-标准工作液中伊维菌素浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);
　　C-最终试样液所代表的试样的浓度，单位为克每毫升(g/mL)。
　　注：计算结果需扣除空白值。

刘广

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