果寡糖对固始鸡体液免疫和血清溶菌酶活性的影响

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　　果寡糖对固始鸡体液免疫和血清溶菌酶活性的影响

　　白东英，马彦博，邓 雯，董淑丽，桑凤敏

　　摘 要：本试验旨在研究果寡糖对固始鸡体液免疫和血清溶菌酶活性的影响，并确定果寡糖的最佳添加剂量。选用1日龄固始鸡公雏150只，分成5个处理组，一个为对照组，其余的四个为试验组，对照组不加果寡糖，其他四个组的果寡糖添加水平分别为3mg/kg、5mg/kg、7mg/kg和9mg/kg。测定胸腺、脾脏、法氏囊重量和指数、血清新城疫(NDV)抗体效价、血清溶菌酶含量等指标。试验结果表明，⑴ 与对照组相比，21日龄时，果寡糖(FOS)组的胸腺和法氏囊重量以及指数显著高于对照组(P<0.05); 42日龄时，果寡糖(FOS)组的法氏囊重量和指数显著高于对照组(P<0.05)。⑵ 在二免7天和14天时，与对照组相比，果寡糖(FOS)组的血清新城疫抗体效价显著高于对照组(P<0.05)。⑶ 21和42日龄时，与对照组相比，果寡糖(FOS)组的血清溶菌酶含量比对照组略高，但无显著性差异(P>0.05)。⑷ 日粮中添加7mg/kg果寡糖(FOS)对提高固始鸡法氏囊重量和指数、血清新城疫抗体效价、血清溶菌酶含量具有最佳效果。试验结果说明，日粮中添加果寡糖能够提高固始鸡体液免疫免疫功能和血清溶菌酶的活性。
　　关键词：果寡糖，体液免疫，溶菌酶活性，固始鸡
　　The Effect of Fructooligosaccharide on Humoral Immunity and Serum Lysozyme Activity of Gushi Chickens
　　BAI Dong-ying1,3，MA Yan-bo1,2，DENG Wen1，DONG Shu-li1，SANG Feng-min1，LI Xiao-li1
　　(1. College of Animal Science and Technology, Henan University Of Science and Technology, LuoYang , 471003, China; 2. College Of Animal Science and Technology, China Agricultural University, Beijing 100094,China; 3. College of Veterinary Mecicine, Northwest Science and Technology University of Agriculture and Forestry, Yangling 712100, China)
　　Abstract: The present study was conducted to investigate the effect of fructooligosaccharide(FOS) on the humoral immunity and serum lysozyme activity of Gushi chickens. 150 one-day-old male Gushi chickens were randomly divided into five groups. One group was control group, the others were experimental groups, control group fed with basal diet, the diet for treatment of experimental groups added 3mg/kg, 5mg/kg , 7mg/kg and 9mg/kg FOS in their basal diet respectively. The weights and relative body weight indices of thymus, spleen and bursa, the antibody titers to NDV(Newcastle Disease Virus), the concentration of blood serum lysozyme were examined. The results showed that, ⑴At 21 days, the weights and relative body weight indices of thymus and bursa of FOS groups were significantly higher than control group(P<0.05), at 42 days, the weights and relative body weight indices of bursa of FOS groups were significantly higher than control group(P<0.05). ⑵ The antibody titers to NDV of FOS groups were significantly higher than control group(P<0.05)at 7 and 14 days of secondary vaccination. ⑶ At 21 and 42 days, the concentration of blood serum lysozyme of FOS groups were higher than control group, but no difference were found between FOS groups and control group. ⑷ At 7 mg/kg level, FOS gave the best effect on enhancing the weights and relative body weight indices of immune organe, the antibody titers to NDV, the blood serum lysozyme concentration of Gushi chickens. These results suggested that the FOS could increase humoral immunity and serum lysozyme activity of Gushi chickens.
　　Key words: fructooligosaccharide; humoral immunity; serum lysozyme activity; Gushi chickens
　　作者简介：白东英(1979—)，女，内蒙包头人，讲师，硕士，主要从事动物药物制剂功能的教学与研究工作。
　　当前由于家禽养殖中过分依赖于抗生素等药物，出现了诸多问题。因此，利用新型无污染、无残留的饲料添加剂来提高动物产品质量，具有重要的现实意义。果寡糖由于具有促进机体肠道内有益微生物相的生成，抑制病原菌，调节机体免疫的功能而受到人们的重视(吴天星等，1999;胡兰等，2004)。然而，目前有关果寡糖在地方品种鸡上的应用报道还较少，因此，本试验研究了果寡糖对河南优良地方品种固始鸡体液免疫和血清溶菌酶活性的作用效果，以期为果寡糖的合理利用提供科学的数据参考和理论依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 试验设计和饲养管理
　　试验选用1日龄健康固始鸡公雏(购自信阳三高集团)150只，随机分成5个处理组，每个处理组6个重复，其中一个为对照组，其余的四个为试验组，基础日粮的果寡糖(购自江门量子高科生物工程有限公司，纯度为50%)添加水平分别为3mg/kg、5mg/ kg、7mg/ kg和9mg/ kg。试验动物自由采食、饮水，
　　试验期49天。
　　1.2 试验日粮和免疫程序
　　采用玉米-豆粕型基础日量，参照NRC(1994)肉鸡营养需要配制基础日粮，日粮组成及营养水平详见表1。免疫程序按如下进行：7日龄滴鼻、点眼各一滴接种新城疫+传染性支气管炎二联疫苗，14日龄滴鼻、点眼各一滴接种法氏囊疫苗;21日龄饮水二次免疫新城疫+传染性支气管炎二联疫苗，28日龄饮水二次免疫法氏囊疫苗。
　　表1 基础日粮组成及营养水平

原 料	0～3周	3～6周	营养水平	0～3周	3～6周
玉 米	60.41	67.77	代谢能 (MJ/kg)	12.09	12.39
豆 粕	28.98	23.24	粗蛋白 %	21.86	19.97
鱼 粉	1.13	1.00	钙 %	0.90	0.80
玉米蛋白粉	5.80	4.51	有效磷 %	0.40	0.37
石 粉	1.03	0.92	赖氨酸 %	0.98	0.96
磷酸氢钙	1.91	1.84	蛋氨酸 %	0.45	0.43
赖氨酸	0.015	0.010	蛋＋胱 %	0.81	0.76
蛋氨酸	0.156	0.141
食 盐	0.35	0.35
维生素预混料	0.02	0.02
微量元素预混料	0.20	0.20

　　1.3 检测指标与方法
　　1.3.1 免疫器官重量和指数的测定 分别于21日龄、42日龄从各处理组随机选取6只鸡(每个重复1只)，空腹称重。颈部放血屠宰后脱毛，然后完整的取下法氏囊、脾脏和左侧胸腺，剔除脂肪准确称重，记录绝对重量(湿重)，并计算相对重量，以免疫器官指数表示，计算公式为：(免疫器官重量×100)/体重。
　　1.3.2 血清新城疫(NDV)抗体效价的测定 分别于21日龄、42日龄从各处理组随机选取6只鸡(每个重复1只)，翅静脉采集非抗凝血5mL，4℃倾斜45°放置2小时，然后在3000r/min状态下离心10min分离血清，-20℃保存备用。用微量法红细胞凝集抑制(HI)试验测定血清中新城疫抗体效价。
　　1.3.3 血清溶菌酶含量的测定 分别于21日龄、42日龄从各处理组随机选取6只鸡(每个重复1只)，翅静脉采集非抗凝血5mL，4℃倾斜45°放置2小时，然后在3000r/min状态下离心10min分离血清，血清与应用菌液(溶菌酶试剂盒购自南京建成科技有限公司)反应后，测定透光度，计算溶菌酶含量，公式为：溶菌酶含量(μg/mg)=(测定管透光度-空白管透光度)/(标准管透光度-空白管透光度)。
　　1.4 数据处理和统计分析
　　数据以平均数±标准误(Mean±SEM)表示，百分数经ARCSIN转换。采用SPSS 11.5软件的ONE-WAY ANOVA先进行方差齐次性检验，再进行F检验和LSD多重比较。
　　2 试验结果
　　2.1 果寡糖对固始鸡免疫器官重量的影响
　　结果见表2。与对照组相比，21日龄时，果寡糖(FOS)试验组可提高固始鸡的胸腺、脾脏和法氏囊重量，并且果寡糖(FOS)试验组的胸腺和法氏囊重量显著高于对照组(P<0.05);42日龄时，果寡糖(FOS)试验组胸腺、脾脏和法氏囊重量均比对照组高，并且果寡糖(FOS)试验组的脾脏和法氏囊重量显著高于对照组(P<0.05)。21日龄和42日龄时，7mg/kg果寡糖(FOS)组的胸腺、脾脏和法氏囊重量均比其他FOS添加组的高。
　　表2 果寡糖对固始鸡免疫器官重量的影响 g

项 目	21日龄			42日龄
	胸腺重量	脾脏重量	法氏囊重量	胸腺重量	脾脏重量	法氏囊重量
对照组	1.24±0.06b	0.49±0.03	1.21±0.08c	3.33±0.16	1.25±0.07b	2.78±0.09c
3mg/kg FOS组	1.31±0.06b	0.53±0.04	1.50±0.08ab	3.44±0.13	1.52±0.07ab	3.74±0.20ab
5mg/kg FOS组	1.58±0.05a	0.61±0.07	1.53±0.08ab	3.72±0.40	1.64±0.11a	4.20±0.25a
7mg/kg FOS组	1.59±0.06a	0.63±0.04	1.56±0.11a	3.76±0.16	1.66±0.12a	4.21±0.17a
9mg/kg FOS组	1.37±0.23b	0.51±0.04	1.28±0.09bc	3.41±0.24	1.52±0.05ab	3.39±0.11bc

　　注：同列肩标没有相同字母者表示差异显著(P<0.05)。下表同。
　　2.2 果寡糖对固始鸡免疫器官指数的影响
　　结果见表3。与对照组相比，21日龄时，果寡糖(FOS)试验组可提高固始鸡的胸腺、脾脏和法氏囊指数，并且果寡糖(FOS)试验组的胸腺和法氏囊指数显著高于对照组(P<0.05);42日龄时，果寡糖(FOS)试验组胸腺、脾脏和法氏囊指数均比对照组高，并且果寡糖(FOS)试验组的法氏囊指数显著高于对照组(P<0.05)。21日龄和42日龄时，7mg/kg果寡糖(FOS)组的胸腺、脾脏和法氏囊指数均比其他FOS添加组的高。
　　表3 果寡糖对固始鸡免疫器官指数的影响

项 目	21日龄			42日龄
	胸腺指数	脾脏指数	法氏囊指数	胸腺指数	脾脏指数	法氏囊指数
对照组	0.42±0.02c	0.17±0.01	0.41±0.03b	0.35±0.02	0.13±0.01	0.29±0.01c
3mg/kg FOS组	0.43±0.02b	0.17±0.01	0.49±0.03ab	0.36±0.01	0.16±0.01	0.39±0.02ab
5mg/kg FOS组	0.51±0.01ab	0.20±0.02	0.50±0.02ab	0.38±0.04	0.17±0.02	0.43±0.03ab
7mg/kg FOS组	0.53±0.02a	0.21±0.01	0.51±0.04a	0.39±0.02	0.18±0.01	0.44±0.02a
9mg/kg FOS组	0.46±0.01b	0.17±0.01	0.43±0.03ab	0.36±0.03	0.16±0.01	0.36±0.03bc

　　2.3 果寡糖对固始鸡血清新城疫抗体效价的影响
　　结果见表4。与对照组相比，果寡糖(FOS)试验组可提高固始鸡血清新城疫抗体效价，并且在二免7天和14天时，果寡糖(FOS)试验组的血清新
　　城疫抗体效价显著高于对照组(P<0.05)。在整个免疫期间，7mg/kg果寡糖(FOS)组的血清新城疫抗体效价均比其他FOS添加组的高。
　　表4 果寡糖对固始鸡血清新城疫抗体效价的影响 log2

项 目	一 免		二 免
	7天	14天	7天	14天	21天
对照组	4.33±0.17	5.00±0.26	6.34±0.36b	6.25±0.38	5.58±0.27b
3mg/kg FOS组	4.50±0.18	5.08±0.33	6.91±0.27ab	6.67±0.25	6.08±0.20a
5mg/kg FOS组	4.92±0.24	5.83±0.28	7.41±0.24a	6.83±0.28	6.25±0.34a
7mg/kg FOS组	5.00±0.29	5.91±0.24	7.67±0.21a	6.91±0.30	6.08±0.24a
9mg/kg FOS组	4.41±0.20	5.17±0.38	6.34±0.44b	6.09±0.38	5.08±0.20b

　　2.4 果寡糖对固始鸡血清溶菌酶含量的影响
　　结果见表5。与对照组相比，21日龄时，果寡糖(FOS)试验组可提高固始鸡的血清溶菌酶含量，但差异不显著(P>0.05);42日龄时，果寡糖(FOS)试验组的血清溶菌酶含量均比对照组高，也无显著性差异(P>0.05)。21日龄和42日龄时，7mg/kg果寡糖(FOS)组的血清溶菌酶含量均比其他FOS添加组的高。
　　表5 果寡糖对固始鸡血清溶菌酶含量的影响 μg/mg

项 目	21日龄	42日龄
对照组	31.33±1.05	37.59±2.27
3mg/kg FOS组	34.50±1.61	38.60±1.68
5mg/kg FOS组	37.83±1.36	40.25±1.36
7mg/kg FOS组	38.50±2.17	41.62±1.87
9mg/kg FOS组	33.38±1.79	37.95±1.67

　　3 分析与讨论
　　3.1目前已有一些在肉鸡和蛋雏鸡的饲粮中添加适量FOS可提高家禽的免疫器官重量和免疫器官指数的报道。高英(2002)在肉鸡日粮中添加0.3%果寡糖(FOS)研究发现，果寡糖(FOS)组肉鸡的胸腺和脾脏指数比对照组的高(P>0.05)。冯自科(2003)的研究报道，在江村黄树鸡的日粮中添加0.3%和0.5%的果寡糖(FOS)，与对照组相比，可以提高免疫器官重量和免疫器官指数(P>0.05)。高峰等(2001)在伊莎蛋公雏饲粮中添加0.05%的FOS，与对照组相比，FOS组可以显著提高21日龄时法氏囊指数(P<0.05)。汪莉等(2001)研究发现，0.15%的低聚糖对蛋雏鸡的中枢免疫器官的发育有促进作用，充当免疫刺激的辅助因子。本试验研究表明，在日粮中添加不同剂量果寡糖可以促进固始鸡免疫器官的发育和成熟，尤以添加7mg/kg果寡糖(FOS)时的作用最为明显，可以较大地提高固始鸡的免疫器官重量和免疫器官指数，提高固始鸡的免疫功能，这也提示果寡糖的增强免疫功能可能与其添加剂量有关。
　　3.2 动物机体的体液免疫功能主要是指由B细胞产生的抗体参与的特异性免疫应答反应，抗体的生理功能主要是中和和清除抗原，通常抗体效价与发病率呈负相关，即抗体效价越高发病率越低(杨汉春，2003)。目前关于果寡糖增强家禽体液免疫的报道还比较少。冯自科(2003)在江村黄树鸡的日粮中添加0.3%和0.5%的果寡糖(FOS)研究发现，0.5%果寡糖(FOS)组江村黄鸡的血清新城疫血凝抑制效价极显著地高于对照组和0.3%果寡糖(FOS)组，说明果寡糖可以提高机体的体液免疫功能。本试验研究表明，在日粮中添加不同剂量果寡糖可以显著提高二免后7天血清的新城疫抗体效价(P<0.05)，尤以添加7mg/kg果寡糖(FOS)时的作用最为明显，可以较大地提高固始鸡的血清新城疫抗体效价，提高固始鸡的特异性免疫功能。果寡糖增强机体体液免疫的可能机理是：果寡糖能与一定毒素、病毒、真核细菌的表面结合而作为这些外源抗原的佐剂，减缓抗原吸收的时间，增加抗原的效价(臧建军等，2002)，从而增强机体的体液免疫(Nakamura et al，2004)。
　　3.3 巨噬细胞是机体天然抵抗力的一个重要组成部分，也是非特异性免疫不可缺少的成分，巨噬细胞对机体的细胞免疫、体液免疫均起着重要作用，目前常通过测定血清中的溶菌酶含量来评价机体的非特异性免疫功能(欧阳素贞等，2006)。溶菌酶是单核细胞、中性粒细胞和巨噬细胞的产物，血清中溶菌酶主要由单核-吞噬细胞释放，溶菌酶作为一种存在于动物正常体液及组织中的非特异性免疫物质，它具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种药理作用。溶菌酶对革兰氏阳性菌十分敏感，其溶菌机理是催化水解细胞壁多糖成分中β-1,4-N-乙酰氨基葡萄糖苷键，细菌溶解是键裂开的间接指标(张海军等，2005)。高水平的溶菌酶含量表明吞噬细胞处于较高活化状态以及抗原递呈作用的增强，从而增强机体的抗菌防御机能。本试验研究表明，在日粮中添加不同剂量果寡糖可以提高固始鸡血清中的溶菌酶含量，但未表现出显著差异(P>0.05)，尤以添加7mg/kg果寡糖(FOS)时的作用最为明显，可以较大地提高固始鸡的血清溶菌酶含量，增强非特异性免疫功能。目前，国内外有关果寡糖以及其他多糖对肉鸡血清溶菌酶含量的报道较少。关于果寡糖提高固始鸡血清溶菌酶活性，增强非特异性免疫功能的机理还有待于进一步研究。
　　4 结 论
　　在日粮中添加不同剂量(3mg/kg~9 mg/kg)的果寡糖(FOS)可以提高固始鸡的免疫器官重量和指数，同时还能够增强机体体液免疫功能和血清溶菌酶的活性。其中以添加7mg/kg果寡糖(FOS)组的效果最好。
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