酵母铬对种母鸡免疫功能的影响

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　　酵母铬对种母鸡免疫功能的影响

　　杨民红，张宏馨，李兰会

　　摘要：为研究酵母铬对种母鸡免疫功能的影响，选用576只50周龄海兰灰蛋用种母鸡随机分为6个处理组，每个处理组日粮中分别添加0 mg/kg 、0.2 mg/kg 、0.4 mg/kg 、0.8 mg/kg 、1.0 mg/kg 、2.0 mg/kg 铬(酵母铬)，测定血清中BSA抗体效价、T淋巴细胞转化率和嗜中性白细胞/淋巴细胞比(H/L)。结果发现0.4mg/kg铬可以显著提高种蛋鸡全血BSA抗体效价(P<0.05);0.4mg/kg，0.8mg/kg，1.0mg/kg水平铬均对全血T淋巴细胞转化率产生显著影响，1.0 mg/kg铬组全血T淋巴细胞转化率显著高于其它各组(P<0.01)，0.4mg/kg，0.8mg/kg铬组显著高于对照组(P<0.05)，日粮中添加不同水平的铬对于种母鸡的全血嗜中性白细胞/淋巴细胞比(H/L)没有显著影响(P>0.05)。
　　关键词：铬;免疫;种母鸡
　　Effects of Yeast Chromium on the Immune Functions of Layers
　　Yang min-hong1 Zhang hong-xin2 Li lan-hui3
　　(1 Livestock Bureau of Xinle County Hebei Province 2 Department of Medicine , University of Hebei 3 College of Animal Science and Technology, Agricultural University of Hebei)
　　Abstract: An experiment using a total of 576 50-week old of layers was conducted to investigate the effects of dietary yeast Cr source on the immune responses of laying hens. The layers were randomly allotted to five groups, each group was fed on the basic diet supplemented with 0, 0.2 0.4, 0.6, 0.8, 1.0,2.0 mg/ml yeast Chromium for 48 days. The titer of BSA antibody, the ratio of blood neutrophil leucocytes and lymphocytes, the rate of T Lymphocyte transformation were detected, results showed that 0.4 mg/kg Cr increased highly the titer of blood BSA antibody of layers (P<0.05), and rate of T Lymphocyte transformation in group of 1.0 mg/kg was significantly higher than the other groups (P<0.05), but different content of Cr has little effect on the ratio of blood neutrophil leucocytes and lymphocytes in layers (P>0.05).
　　Keywords: Chromium; immune functions; layer
　　铬是动物必需的微量元素之一，研究证明，铬可以作为耐糖因子的组成成分参与机体的蛋白质、脂肪和糖代谢，并对核酸结构的稳定性起着重要作用。近年来研究证实铬能有效地提高动物机体免疫的水平。Heugten等(1994)研究证明断奶仔猪在应激状况下日粮中添加0.2mg/kg有机铬可以提高其体液免疫功能;长途运输应激的犊牛精料中补加0.2～1.0mg/kg有机铬，不仅提高生长速率，而且还可以提高其血清免疫球蛋白浓度，降低应激发病率[1]。罗绪刚等(1999)，郭艳丽等(1999)分别报道，2.0mg/kg和0.4mg/kg铬可以提高常规饲养和应激状态下肉仔鸡的体液免疫功能[2，3]。等(2002)报道，热应激产蛋鸡获得最佳细胞免疫功能的日粮铬添加水平至少为10.0mg/kg。但至今尚未见到日粮铬对种母鸡免疫功能影响的报道。本项研究旨在探讨常规条件下日粮添加有机铬对种母鸡免疫功能的影响，为种鸡生产实践中铬的适宜添加量提供一定的理论依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 试验材料：
　　酵母铬：购自奥特奇(Alltech)亚太生物技术中心北京奥特奇生物制品有限公司，铬浓度标示值为1000 mg/kg。
　　1.2 试验动物及日粮：
　　原邯郸农专种试验牧场随机抽取50周龄海兰灰蛋用种母鸡576只，基础日粮配方见表1。
　　表1 干物质基础日粮组成与营养水平
　　Table 1 Composition and nutrient level of basal diet

原料Ingredients	配比Percent/ ﹪	原料Ingredients	配比Percent/ ﹪
玉米Corn	58.000	沸石粉Zeolite	2.000
鱼粉Fish meal	1.000	食盐NaCl	0.350
酵母Yeast	3.000	微量元素Microelement	0.120
豆粕Soybean meal	22.000	多维Vitamin	0.035
土渣Soil	2.000	蛋氨酸DL-Met	0.100
骨粉Bone meal	3.000	甜菜碱Betaine	0.045
石粉Limestone	7.350	芝麻饼Sesame meal	1.000
合计Total	100.00
营养水平Nutrient levels
代谢能ME / MJ/kg	11.500	粗蛋白质CP	17.030
钙Ca	3.070	有效磷A P	0.330
赖氨酸Lys 铬chromium/ mg/kg	0.690 0.580	蛋氨酸Met	0.400

　　每kg日粮中含有： VA 12000 IU;VD3 1500 IU;VK 1.2mg;VB1 5.5mg;VB2 5.0mg;VB6 8mg;VB12 0.08mg;叶酸8mg;烟酸(尼克酸) 16mg; 生物素 0.3mg;泛酸 16mg;胆碱 400mg;Fe 70mg;Cu 5mg;Zn 50mg;Mn 60mg;I 0.35mg;Se 0.12mg.
　　注：蛋白质与铬为实测值，其他各种营养物质均为理论计算值。
　　1.3 试验设计与饲养管理
　　选用576只体况相似，产蛋率、采食量无显著差异的50周龄种母鸡进行试验。种母鸡采用三层全阶梯笼养，每笼4只。随机分为6组，每组3个重复，每个重复32只鸡。基础日粮为玉米-豆粕型，自由采食，随意饮水，光照保持每天16小时，采用人工光照和自然光照相结合。
　　各组分别饲喂添加铬含量为0，0.2，0.4，0.8，1.0，2.0 mg/kg酵母铬的基础日粮。其中0 mg/kg组为对照组，饲喂基础日粮，其铬含量为0.279mg/kg。整个试验期为6周。
　　1.3 样品采集与处理
　　1.3.1 计算种母鸡死淘率
　　试验正式开始后，每天观察鸡群，记录各重复死淘鸡数，计算死淘率(死淘率=死淘鸡数/总鸡数)。
　　1.3.2 免疫指标的测定
　　1.3.2.1样品的制备
　　试验开始前从每个重复随机选取14只鸡肌肉多点注射牛血清白蛋白(BSA)抗原(0.4%)1ml。10天后进行第二次BSA抗原注射(0.8%，每只鸡1ml)，分别于试验开始后第10、20和30天禁食过夜后翅静脉采血。部分血液离心制得血清，﹣20℃保存，以备分析血清中BSA抗体效价;另一部分血液肝素钠抗凝制备全血，立即进行T淋巴细胞转化率的测定;当场鲜血涂片，用作测定嗜中性白细胞/淋巴细胞比(H/L)。
　　1.3.2.2 测定方法
　　血清中BSA抗体效价(OD值)用酶联免疫吸附(ELISA)法测定，全血T淋巴细胞转化率用MTT法测定。
　　1.4 数据分析
　　应用SAS(1997)软件包中平衡设计的方差分析(ANOVA)过程进行数据分析，F检验显著时，用DUNCAN，S进行各组间多重比较。
　　2 试验结果
　　2.1 铬对种母鸡死淘率的影响
　　添加酵母铬可使海兰灰种母鸡的死淘率下降(表1)。0.4 mg/㎏、0.8 mg/㎏、1.0 mg/㎏处理组与对照组相比差异极显著(P<0.01)，各处理组间差异不显著，而0.2 mg/㎏ 和2.0 mg/㎏铬组与对照组相比其死淘率也有下降趋势，但没有达到显著水平(P>0.05)。
　　表1 日粮铬对死淘率的影响
　　Table1 Effect of dietary chromium on mortality rate

铬水平/ mg/kg Cr level	0	0.2	0.4	0.8	1.0	2.0
死淘率/ % mortality rate	14.59±4.77a	11.09±1.81a	2.08±3.61b	3.13±0.00b	3.13±3.13b	10.17±1.80a

　　注：肩标不同小写字母者差异显著(P<0.05)，肩标相同小写字母或没有字母标记差异不显著(P>0.05)，下表相同
　　2.2 铬对种母鸡免疫指标的影响
　　日粮中添加不同水平的铬对种母鸡的全血嗜中性白细胞/淋巴细胞比(H/L)没有显著影响(P>0.05)，但在试验30天时，H/L的值有增加的趋势(表2)。
　　不同铬水平对血清BSA抗体效价(OD值)有显著影响(表3)。试验进行20天时0.4mg/kg铬组的OD值高于对照组和其它试验组，但是没有达到显著水平(P>0.05)，到30天时，0.4mg/kg组的OD值显著高于其它各组(P<0.05)。1.0 mg/kg铬组的OD值显著低于对照组和其它试验组(P<0.05)。
　　试验第30天时，0.4 mg/kg，0.8 mg/kg，1.0 mg/kg铬组均对全血T淋巴细胞转化率产生显著影响(表4)。1.0 mg/kg铬组全血T淋巴细胞转化率显著高于其它各组(P<0.01)，0.4mg/kg，0.8mg/kg铬组显著高于对照组(P<0.05)，但是两组间差异不显著(P>0.05)。
　　表2 铬对种母鸡不同时间全血嗜中性白细胞/淋巴细胞比的影响
　　Table 2 Effect of chromium on blood H/T ratio of egg-laying specific hens at different time

铬水平/ mg/kg Added Cr level	时间Day
	10	20	30
0.0	0.64±0.05	0.60±0.12	0.65±0.17
0.2	0.65±0.10	0.58±0.05	0.61±0.20
0.4	0.70±0.08	0.67±0.15	0.71±0.23
0.8	0.68±0.23	0.75±0.24	0.69±0.30
1.0	0.66±0.04	0.67±0.03	0.78±0.04
2.0	0.63±0.11	0.66±0.09	0.72±0.08

　　表3 铬对种母鸡不同时间全血BSA抗体滴度的影响
　　Table 3 Effect of chromium on blood Antibody titer to BSA of egg-laying specific hens at different time

铬水平/ mg/kg Added Cr level	时间Day
	10	20	30
0.0	1.27±0.08	1.25±0.05	1.26±0.12b
0.2	1.25±0.02	1.22±0.07	1.27±0.02b
0.4	1.26±0.03	1.37±0.15	2.00±0.01c
0.8	1.23±0.01	1.27±0.05	1.25±0.11b
1.0	1.23±0.04	1.29±0.09	1.01±0.06a
2.0	1.19±0.10	1.24±0.06	1.27±0.17b

　　表4 铬对种母鸡不同时间全血T淋巴细胞转化率的影响
　　Table 4 Effect of chromium on T Lymphocytes blastogenic of egg-laying specific hens at different time

铬水平/ mg/kg Added Cr level	时间Day
	10	20	30
0.0	0.446±0.019	0.432±0.017	0.451±0.024a
0.2	0.487±0.042	0.475±0.033	0.483±0.042a
0.4	0.432±0.028	0.454±0.026	0.545±0.051b
0.8	0.462±0.035	0.433±0.034	0.551±0.022b
1.0	0.455±0.023	0.458±0.036	0.582±0.017c
2.0	0.448±0.026	0.460±0.019	0.500±0.018a

　　3 分析讨论
　　3.1 铬对种母鸡体液免疫的影响
　　试验前20天，日粮铬对种母鸡全血BSA抗体滴度(OD值)没有影响，到试验进行至30天时，0.4mg/kg铬组的OD值明显上升，与对照组和其它各试验组差异显著，这一结果与前人的很多研究结果相一致。Heugten等(1994)研究证明断奶仔猪在应激状况下日粮中添加0.2mg/kg有机铬可以提高其体液免疫功能;Burton 等(1995)指出，运输犊牛日粮中添加0.2～1.0mg/kg有机铬能提高血清免疫球蛋白浓度和对人红细胞的抗体滴度[1]。
　　3. 2 铬对种母鸡细胞免疫的影响
　　补铬10天和20天，日粮铬对全血T淋巴细胞转化率没有影响;到30天，日粮中添加0.4～1.0 mg/kg的铬显著提高了全血T淋巴细胞转化率，而2.0 mg/kg铬组并没有提高全血T淋巴细胞转化率，这似乎说明有机铬在动物体内发挥功能有一个累积过程，而且跟添加量也有一定的关系。Chang等(1994)通过对应激肉牛日粮中补铬和培养试验，发现铬对外周淋巴细胞的增值有强化作用，可以提高细胞免疫效果[4]。这与本试验结果一致。
　　0.4 mg/kg铬组可以使机体体液免疫水平显著升高，但是细胞免疫反应未达到最高，而1.0mg/kg铬添加水平大大改善了细胞免疫功能，却又降低了体液免疫功能。这说明铬可以促进免疫功能的增强，且保证机体免疫状态维持一定的平衡，不致使免疫细胞过于活化而导致自身免疫系统疾病造成对机体的损伤。罗绪刚等(2002)对热应激产蛋鸡日粮分别添加三氯化铬和吡啶羧酸铬，结果添加10.0 mg/kg三氯化铬的铬组明显提高热应激产蛋鸡全血T淋巴细胞转化率[5]。这一结果和本试验一样说明玉米-豆粕型饲用日粮中固有的含铬量不能满足产蛋鸡达到最大细胞免疫对铬的需要，日粮补充铬能提高蛋鸡的细胞免疫功能。但是10.0 mg/kg铬的添加量远远大于本试验的1.0mg/kg，这可能和铬源及鸡的生理状态有关。研究证明无机三价铬的吸收率极低，只有1%～3%(Anderson等,1988)[2]，而有机铬的吸收率可达10%～25%(Seerley等,1993)[6]。
　　Mowart(1993)指出，补铬的最大潜力在于减轻应激。大量研究表明，应激和疾病增加了铬的排泄(张敏红，1998;Anderson，1998)[6]。对于处于临界铬缺乏的畜禽，应激会增加其铬缺乏的压力。因此大量在畜禽应激状态下的补铬试验，铬的添加量比本试验较高。本试验的蛋种鸡处于常规饲养条件下，处于临界铬缺乏状态，其发挥作用的剂量相对小一些。
　　3. 3 铬对种母鸡H/L的影响
　　罗绪刚等(2002)对热应激肉仔鸡日粮中分别添加无机铬和有机铬，发现两种铬源随着铬添加的增加，H/L比值线性下降。同年，罗绪刚等对热应激产蛋鸡做同样的添加试验，结果铬源、铬水平及铬源与铬水平的互作对H/L均未产生显著影响(P>0.42)[5]。这一结果与本试验发现有机铬水平对于蛋种鸡H/L的影响结果相一致，其具体机制还需要进一步研究。
　　3.4 铬对种母鸡的死淘率的影响
　　本试验研究发现，日粮中添加不同水平的酵母铬可使海兰灰种母鸡的死淘率降低，这与前人报道结果一致(Glisman，1996;Kim等，1996;Kim等，1997)。铬降低死淘率的主要机制是它可以改善动物的免疫机能，从而提高其抗病能力，降低死淘率。
　　罗绪刚等(2006)对肉仔鸡补铬，结果表明种母鸡日粮中添加0.4、0.8、1.0 mg/㎏的酵母铬均提高了肉仔鸡T淋巴细胞转化率(P<0.10)[7]。常娟2006年报道0.4 mg/kg铬水平的酵母铬和吡啶羧酸铬对蛋鸡生产的经济效益较高[8]。
　　机体缺铬使血清皮质醇含量升高，糖皮质激素的含量也随之升高，糖皮质激素具有抑制免疫系统功能的作用，补铬可以降低血清中的皮质醇，减弱糖皮质激素对免疫系统的抑制作用，进而提高免疫效果。
　　4 结论
　　种母鸡日粮中添加酵母铬可以提高其体液和细胞免疫功能，改善体液免疫的最佳添加剂量是0.4mg/kg铬，而提高细胞免疫的的最佳剂量是1.0 mg/kg铬。0.4～1.0mg/kg铬组均可以降低种母鸡的死淘率，其中以0.4 mg/㎏组效果最好。
　　参考文献
　　1、王刚，罗绪刚，刘彬等，饲粮铬对热应激肉仔鸡生长性能、血清生化特性和胴体品质的影响，畜牧兽医学报，2003，34(2):120-122
　　2、罗绪刚，郭艳丽，刘彬等，饲粮铬对0~3周龄肉鸡生长、血清生化特性和免疫功能的影响[J]，畜牧兽医学报，1999，30(6):481-489
　　3、郭艳丽，铬对肉仔鸡生长性能、血清生化特性、免疫功能和胴体品质的影响[J]，中国农业科学，1999，32(5): 79-86
　　4、史清河，张颖，有机铬对应激牛的营养作用效果[J]，饲料工业，1998，19(7)：38～41
　　5、罗绪刚，王刚，刘彬，饲粮铬对热应激肉仔鸡免疫功能的影响[J]，营养学报，2002，24(3)：286-291
　　6、王丹莉，张敏红，杜荣，日粮铬水平对肉鸡生长性能、免疫机能及胴体脂肪含量的影响[J]，动物营养学报，1999，11(2)：19-23
　　7、张庆东，罗绪刚，王永军，铬对肉仔鸡生长性能、免疫功能和胴体品质的影响[J]，中国畜牧杂志，2006，9
　　8、常娟，林东康，有机铬对热应激蛋鸡生产性能和血液生化指标的影响[J]，饲料工业，2006，10，43-47

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