小檗碱对实验性大肠杆菌病的疗效观察

apple12151007 · 发表于 2010-9-26 17:05:14

　　小檗碱对实验性大肠杆菌病的疗效观察

　　于凤芝，乔立东，张永东，杨新建张洁(北京农业职业学院畜牧，102442)

　　[摘要] 大肠杆菌病是畜禽常见传染病之一，已成为现代养殖业的一大障碍。本实验通过给小鼠腹腔注射大肠杆菌菌液造成实验性大肠杆菌病，通过临床观察、病理组织学观察,研究小檗碱对大肠杆菌病的防治效果。结果发现小檗碱对大肠杆菌病有明显的防治效果。
　　[关键词]小檗碱实验性大肠杆菌病疗效
　　小檗碱为毛莨科黄连属植物黄连、黄柏的根茎提取的主要成分。长期用于解热、解毒、抗肠道细菌感染，具有抗菌、抗炎、镇痛、抗癌等方面的药理作用[1]。本实验通过给小鼠腹腔注射大肠杆菌菌液造成实验性大肠杆菌病，通过临床观察、病理组织学观察,研究小檗碱对大肠杆菌病的防治效果，为筛选适合临床治疗猪大肠杆菌病的中药制剂提供理论依据。
　　1 材料
　　1.1 试验动物
　　健康昆明小鼠(20g左右)35只购自北京实验动物中心
　　1.2 主要试剂
　　小檗碱：天津市中医药研究所提纯标准品(纯度>97%)
　　大肠杆菌K88菌种：由微生物实验室提供
　　2.试验方法
　　2.1 大肠杆菌菌液及小檗碱溶液的制备
　　大肠杆菌菌液制备: 试验前先将大肠杆菌接种麦康凯培养基，置37℃培养24h，挑选典型单个菌落1-2个接种于50ml 普通肉汤培养基中，370C静止培养24h后取出，取20ml肉汤培养物离心，弃去上清液，用生理盐水稀释至20ml。备用。
　　小檗碱溶液： 0.5mg/ml.配制小檗碱溶液，取6mg小檗碱溶于12ml生理盐水。滤菌后备用。
　　2.2 大肠杆菌K88致小鼠腹泻模型的建立
　　昆明小鼠饲养1周，观察情况无异常，用直肠试纸棉培养检测ETEC为阴性。感染前,停止喂食12h，腹腔注射0.2ml菌液，2h后正常喂食。对照组处理的不同之处是把菌液改为生理盐水。感染后对动物的观察:每隔3h观察1次，记录动物的发病情况。动物发病的定义:拉稀便;肛周粘附有稀便或粘液或血液;毛松，活动少;进食少或不进食，出现以上症状的任一项为发病。
　　2.3 试验分组
　　小鼠30只(雄雌各半)，分为三组，每组10只：
　　(A)对照组：生理盐水0.2ml腹腔注射
　　(B)自然恢复组：同时生理盐水0.2ml，大肠杆菌0.2ml腹腔注射
　　(C)中药治疗组：小檗碱0.2ml，大肠杆菌0.2ml腹腔注射。3小时后肌注0.2ml小檗碱
　　每3小时观察记录临床变化及死亡情况，24小时后处死，常规病理剖解，取小肠固定于10%福尔马林液中，常规石蜡切片观察组织学变化。
　　3 结果
　　3.1死亡率攻毒4小时后B组发现小鼠开始死亡。12小时后统计结果如下：
　　A组(生理盐水对照组)：无死亡，0%
　　B组(自然恢复组)：死亡5只，50%
　　C组(中药治疗组)：死亡1只，10%
　　3.2 临床变化
　　攻毒后发现自然恢复组的小鼠毛发凌乱且无光泽，精神沉郁，反应迟缓，嗜睡，拒绝进食，拉稀，呼吸急促，部分小鼠抽搐死亡。12小时中共死亡5只小鼠，具体死亡时间依次为：攻毒后4小时、4.5小时、7.5小时、8小时、8.5小时。而中药治疗组的小鼠精神较好。反应较自然恢复组敏捷。攻毒6小时后有小鼠开始进食。恢复比较迅速。12小时内死亡1只小鼠，具体死亡时间为攻毒后8小时。
　　3.3 剖检结果
　　[1] 自然恢复组小鼠的剖检情况：打开腹腔有腥臭味，肝脏上有出血点及坏死点，肝脏、脾舯大，肠黏膜充血，出血严重。
　　[2] 中药治疗组小鼠的剖检情况：腹腔比较干净，肠出血较少，肝脏无出血坏死。
　　[3] 生理盐水对照组的小鼠剖检情况(即正常小鼠情况)。
　　4 讨论
　　目前，猪的大肠杆菌病一直是危害养猪业的一大疾病。据有关报道，在美国新生仔猪的腹泻疾病中，由大肠杆菌引起的占到45%以上;台湾有15%～25%的仔猪因此病无法育成，每年直接损失达36—39亿元;在国内仔猪黄、白痢的发病率高达20%—60%，个别猪场出现混合性感染或继发性感染，病死率高达60%以上[2]。近年来，由于多种抗生素的长期滥用，造成耐药菌株的种类越来越多，并且其致病力变得越来越强，对猪的危害性越来越大。因此有必要开发既可有效防治大肠杆菌病、药理作用机制明确，且又能替代抗生素的新型中药制剂。
　　在防治大肠杆菌病方面，很多中药方剂有较好的疗效[3-5]。小檗碱已被证明对多种急慢性炎症模型有明显的抑制作用。本实验结果发现小檗碱对大肠杆菌病疗效显著并且快速。本实验结果为临床筛选治疗大肠杆菌病的中药提供理论依据，但对于大肠杆菌的致病机理以及小檗碱的作用机制还需进一步深入研究。
　　参考文献
　　[1] 朱坤杰，李涛.小檗碱的药理研究及临床应用进展.药物研究，2000，9(1)：22-23
　　[2] 吴文福，巫月生.猪大肠杆菌病的流行特点.广东畜牧兽医科技，2001，26(1)：13~15
　　[3] 曹国文，姜永康.中草药抗猪大肠杆菌制剂的研制与效果观察，黑龙江畜牧兽医，2002，(10)：33-34
　　[4] 赵恒章，王三虎，赵坤.中草药注射液对仔猪大肠杆菌病治疗效，河南职业技术师范学院学报，2003，3：53-55
　　[5] 中王会香，戴扬川，袁天旭.“三黄汤”合剂治疗仔猪白痢病的效果观察，四川畜牧兽医，2000，6(27)：27
　