桔梗乙醇提取物的急性及蓄积性毒性试验

apple12151007

　　桔梗乙醇提取物的急性及蓄积性毒性试验

　　金锡九 张敏 张亚丽

　　(延边大学农学院动物科学系，吉林省龙井市 133400)

　　摘要：本试验用昆明种小白鼠对桔梗提取物进行了急性及蓄积性毒性试验。经过试验结果如下：急性试验LD50>30360mg/Kg,蓄积性试验所测指标实验组与对照组无明显差异。说明桔梗提取物对小白鼠无急性和蓄积性作用。
　　关键词 桔梗提取物;小白鼠;急性试验;蓄积性试验
　　Platycodon grandiflorum alcohol extracts the thing impatient disposition and accumulates the toxicity experiment
　　Jin xijiu zhangmin zhang yali
　　(Zoology Department of Yanbian University , Longjing , Jilin Province 133400))
　　Abstract:This experiment withdrew the thing with the Kunming mice to the platicodon grandiflorum to carry on has been more systematic acute and the accumulation toxicity text. after the test result to be as follows：The acute tries LD50>30360mg/Kg，the accumulation toxicity text measured indicators experimental group and the control group there was no difference. Note Campanulaceae extract on mice without acute and accumulation role.
　　Keywords ：The platicodon grandiflorum withdraws the thing; mice; acute toxicity test, the accumulation toxicity text.
　　桔梗是吉林省有名的中草药材之一，长白山区分布着非常丰富的桔梗种质资源，该地区具有发展桔梗的得天独厚的地理优势和资源优势[1]。
　　桔梗含桔梗皂苷、桔梗酸、桔梗糖、菊糖等[2]。中医临床上桔梗主要用于寒热虚实引起的咳嗽、痰喘[3]，近年来，作为药食同源的传统中药，也用于免疫调节、抗炎、抗溃疡、抗肿瘤、降血压、降血脂、扩张血管、镇痛、镇静、解热、降血压、降血糖、抗过敏等。药理实验表明桔梗有较多的生理活性，具有较大的研发价值[4。5]。为了研究桔梗提取物作为饲料添加剂并长期应用于畜禽产业中是否会引起毒害反应，因此特就桔梗提取物进行本项毒理试验。希望通过本项试验可以了解桔梗提取物的安全性，以及对家畜的限量标准，为合理的利用该添加剂提供理论依据。
　　1材料与方法
　　1.1 试验材料
　　试验动物 昆明种小白鼠由延边大学医学院实验动物科提供。
　　受试物 桔梗提取物由延边大学农学院动物营养实验室提供。桔梗由延边大学农学院农学系提供，系3年生，清洗干净后，切片、低温烘干。
　　1. 2 试验动物的饲养标准
　　饲料为全价营养饲料，试验组的饲料成份是在标准日粮的基础上添加不同比例的桔梗提取物。饲养温度22-25℃，湿度40%-60%，自然采光。基础饲料成分见表1。
　　表1 小白鼠全价营养饲料配方

成 分	玉 米	豆 粕	芝麻粕	白 面	大 米	高 梁	麦 麸	草 粉	鱼 粉	花 生	奶 粉	鸡 蛋	骨 粉	食 盐	矿物质	维 生 素
含量（%）	25	23	5	15	5	4	4	3	5	5	5	1.5	2	0.5	0.5	0.5

　　1.3实验方法：
　　1.3.1桔梗提取物乙醇提取方法
　　取桔梗5kg洗净烘干，将烘干的桔梗加入95%乙醇溶剂浸泡24小时，乙醇应将桔梗没过30-40cm为宜，将乙醇用四层纱布放在漏斗中过滤，将过滤出的含有桔梗成分的浸提物倒入索氏提取器中进行回流，水浴锅温度为乙醇沸点80摄氏度，回流3次，将乙醇进行回收，将剩余的含有桔梗成分的液体进行水浴加热，制成膏状物取出放入冰箱内储存待用。
　　1.3.2急性毒性试验
　　取20～22g小白鼠，共设6组，每组10只，雌雄各半，按10000mg/Kg、13200mg/Kg、17420mg/Kg、23000mg/Kg、30360mg/Kg体重服毒，另设对照组。实验组添加剂在7天内灌胃给药，对照组灌服蒸馏水。小鼠禁食8小时(不禁水)后进行投毒给药后3-4小时复食，给药停止后连续观察7天，并观察小鼠精神、食欲、饮水、活动并记录小白鼠的中毒情况、死亡时间和死亡数目。
　　1.3.3蓄积毒性试验
　　取20～22g小白鼠，共设5组，每组10只，雌雄各半，按200mg/Kg、400mg/Kg、800mg/Kg、1600mg/Kg体重服毒，另设对照组。实验组添加剂混入饲料中饲喂，对照组喂正常的无添加剂的饲料连续饲喂20天， 在给药期间观察小白鼠的精神、食欲、饮水及死亡情况和有无异常反应，给药停止后观察7天内小白鼠的死亡情况及体重和有无异常反应的一般变化。同时测量指标如下：
　　(1)一般性指标 记录小鼠采食量，每周称量小鼠体重。计算平均体增重、平均饲料采食总量、平均日饲料采食量、饲料料重比(F/G)。
　　平 均 体 增 重 = 实 验 末 重 - 始重
　　平均饲料采食总量=试验初的饲料量-试验末的剩料量
　　平均日饲料采食量=总的饲料消耗量/试验天数
　　饲料料重比(F/G)=平均日饲料采食量/平均日增重。
　　(2)脏器系数 取心、肝、脾、肺、肾称重，计算脏器体重比值。
　　1.4数据统计
　　用SPSS11.5进行单因素方差分析，采用多个试验组和一个对照组间的两两比较方法统计。试验结果表示为平均值±标准差。
　　2 结果
　　2.1 急性毒性试验
　　按10000mg/Kg、13200mg/Kg、17420mg/Kg、23000mg/Kg、30360mg/Kg剂量混饲后，7天后观察，各剂量组小白鼠的精神、食欲、饮水等情况和对照组比较均无异常，未出现死亡及其它异常行为，按照毒理学评价标准，当LD50>15000mg /Kg时属于实际无毒性物质，可不必测定半数致死量(LD50)。本试验结果LD50>30360mg/Kg表明桔梗提取物作为中草药添加剂属于实际无毒类物质[6、7]。
　　2.2 蓄积性毒性试验
　　按200mg/Kg、400mg/Kg、800mg/Kg、1600mg/Kg剂量混饲，连续饲喂20天，在给药期间及7天观察期内，各试验组小白鼠未出现死亡，精神、饮食和饮水无异常同时也未出现其它异常行为，结果表明桔梗提取物无蓄积毒性作用。
　　2.2.1一般性指标测定
　　平均体增重、平均饲料采食总量、平均日饲料采食量见表2.
　　表2不同剂量的药物对小白鼠生长的影响

项目	对照组	试验组
剂量mg/kg	0	200	400	800	1600
观察头数（只）	10	10	10	10	10
供试天数（天）	20	20	20	20	20
平均始重（g）	18.46±1.92	18.62±1.32	18.75±1.78	18.44±1.71	18.62±1.53
平均末重（g）	38.64±2.29	37.56±3.20	37.98±2.57	38.82±1.13	38.38±5.10
耗料（g）	128.40± 8.1	130.07±2.49	130.40±6.19	130.17±5.70	134.63±6.94
净增重（g）	20.18±0.26	18.94±1.96	19.23±2.86	20.38±0.20	19.76±1.68

　　注：与对照组比较，*P<0.05 ** P<0.01
　　由表2可知，经20天给药后，各剂量组小白鼠的平均增加体重及每只耗料与对照组相比较差异不显著(P>0.05)。
　　2.2.2 脏器系数的测定
　　在饲料中以200mg/Kg、400mg/Kg、800mg/Kg、1600mg/Kg剂量加入桔梗提取物饲喂小鼠20天，扑杀受试鼠，取主要脏器称重，测定脏器系数。结果见表3。
　　表3 桔梗提取物对小鼠脏体比的影响

组别	心/体	肝/体	脾/体	肺/体	肾/体
对照组	0.439±0.055	4.307±0.148	0.345±0.047	0.570±0.071	1.034±0.066
200mg/Kg	0.443±0.054	4.398±0.313	0.351±0.075	0.609±0.075	1.139±0.110
400mg/Kg	0.451±0.041	4.627±0.409	0.341±0.113	0.618±0.081	1.142±0.054
800mg/Kg	0.408±0.044	4.540±0.349	0.350±0.088	0.693±0.22	1.033±0.126
1600mg/Kg	0.440±0.043	4.475±0.409	0.335±0.109	0.632±0.103	1.140±0.104

　　注：在不同组间不同字母表示差异显著,大写字母为P<0.01,小写字母为P<0.05
　　由表3可知，给予受试物20天后，各试验组与对照组之间脏器系数差异不显著(P>0.05)，各试验组间差异也不显著(P>0.05)。
　　3 结论
　　3.1急性毒性试验
　　当LD50>30360mg/Kg时小白鼠仍未出现死亡及其它异常行为，表明桔梗提取物属于实际无毒类物质。
　　3.2蓄积试验
　　20天给药后，各试验组和对照组的小白鼠均无异常表现和死亡，同时试验组净增重、耗料量及脏器系数的测定与对照组均无明显差异。表明桔梗提取物无蓄积作用。
　　综上所述，桔梗提取物属于无毒性物质，如将其作为饲料添加剂应用于畜牧业生产中，便可以取代抗生素，在畜牧业生产中有着广泛的应用前景。
　　参考文献
　　[1] 巩丽丽，石俊英. 桔梗近年来的研究进展[D]. 时珍国医国药，2006 17(3)：封3～封4
　　[2] 付文卫，窦德强，裴月湖.桔梗的化学成分和生物活性研究进展[J].沈阳药科大学学报 2006 23(3)：184-191.
　　[3] 余椿生.桔梗[J].《食品与药品A》2006(5)：75.
　　[4] 庞立杰，王彦，许永华等.桔梗的药用价值及其栽培[J].《人参研究》2003(4)：38.
　　[5] 宋杨，齐云.桔梗的药理研究进展[J].中国药房 2006，17(2)：140.
　　[6] 农业部 《新兽药一般毒性试验技术要求》[S]
　　[7] 袁伯佼,治乔 .药临床前安全性评价与实践[M].医学科学出版社,1997:11

海绵

今天学术性的不少