板蓝根多糖对鸡新城疫抗体滴度和免疫器官的影响

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板蓝根多糖对鸡新城疫抗体滴度和免疫器官的影响
郭新华[1] 邱妍2 严桂芹 2 周联高2

　　摘要：目的：研究板蓝根多糖于与ND疫苗配合使用，对鸡新城疫苗免疫雏鸡血清抗体效价和免疫器官指数的影响。方法：150只14日龄蛋公鸡随机分为3组，板蓝根多糖高、低剂量组，对照组，各组50羽，同时设5个重复，每个重复10羽，14日龄用新城疫Ⅳ系弱毒苗点眼滴鼻免疫;同时板蓝根多糖高剂量组(12.3mg·mL- 1)、低剂量组(6.17mg·mL- 1)分别肌肉注射板蓝根多糖0.3mL/羽，对照组注射等量生理盐水，每天1次，连续三天;免疫后7、14、21、28、35、42d随机取8只翼下静脉采血后分离血清，检测鸡新城疫HI抗体效价;并于免疫后14、21、28、35、42d随机取4只放血致死后称重，摘取脾脏、胸腺、法氏囊称重，计算免疫器官指数。结论：大多数试验组鸡的抗体效价与免疫器官指数都显著高于对照组，而且，低剂量组高于高剂量组。

　　关键词：板蓝根多糖;抗体;免疫器官
　　Abstract: Objection: To study the effection istais root polysaccharide (IRPS) and ND vaccine on NDV HI antibody titer and immune organ.Methods:150 chickens were randomly divided into 3 group , istais root polysaccharide(IRPS) at high and lose group, in control group, each group were 50 chickens, at the same time, each group there are five repetitions, each repetition includes 10 chickens, vaccinated with NDV-IV vaccine at 14 day; At the same time, the chickens in experimental group were intramuscularly injected respectively istais root polysaccharide(IRPS) 0.3ml, in control group,physiological saline,once a day for three successive days; on days 7 , 14, 21,28, 35, 42 after vaccination ,8 chickens’ blood were sample randomly from each group for determination of serum HI antibody titer by micro-method; on days 14, 21, 28, 35, 42 after vaccination, 4 chickens’ weight of whole body, spleen 、thymus and bursa were weighted randomly from each group for calculation of immune organ index.Conclusion:The result showed that most of experimental group chickens’ HI antibody titer and immune organ index both significantly higher control group, also lose group higher high group.
　　Key word:istais root polysaccharide(IRPS); antibody titer; immune organ
　　鸡群接种新城疫疫苗后，有时还会出现新城疫病例，其主要原因是疫苗保护率低和某些免疫抑制因素所致。研究表明，一些细胞因子能增强免疫反应，如白介素-2已作为一种新型基因工程免疫增强剂而被广泛研究。许多中药成分与疫苗合用，可以增强机体的非特异性或特异性免疫应答，使抗体在血液中或粘膜表面维持更长时间，发挥持久的免疫效果，提高机体的抗病。板蓝根多糖是板蓝根中的天然有效活性成分，具有促进机体免疫功能，增加白细胞和淋巴细胞数量，增强淋巴细胞有丝分裂反应，提高淋巴细胞转化率和巨噬细胞活性，诱生干扰素等作用，是较强的免疫刺激剂。对利用板兰根多糖的免疫增强作用，与ND疫苗配合使用，来探讨板蓝根多糖对鸡新城疫苗免疫雏鸡血清抗体效价和免疫器官指数的影响，旨在研制出一种高效中草药免疫增强剂，以提高鸡对NDV的免疫力，同时也为今后中西复方免疫增强剂的研究提供理论依据。
　　1试验材料
　　1.1 板蓝根多糖(多糖纯度为27%)，由微生物试验室提供。
　　1.2 疫苗 新支二联弱毒苗、新城疫(NDV-IV)弱毒苗、新支二联油苗;鸡新城疫HI 测试抗原(由微生物实验室提供)。
　　1.3 主要试剂
　　Alsever's血球保存液配制 准确称取葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.80g、氯化钠0.42g，溶解于800mL双蒸水(双蒸水指的是经过二次蒸馏的水，一般用于实验，但不能喝，因为其中对人体有益的钙镁离子已经被破坏)中，以0.1%柠檬酸溶液调节pH为7.2，然后定容至1000mL。用0.22μm滤膜过滤，再以108℃高压蒸汽灭菌15分钟，4℃保存。
　　1.4 鸡红细胞悬液的制备
　　采集鸡外周血5mL，转移到20mLAlsever's血球保存液中，4℃保存(保存时间不超过一周)。临用前，以生理盐水洗涤3次，每次洗涤后以2000rpm离心5min。最后用生理盐水调节红细胞悬液浓度为1%。
　　2试验方法
　　2.1 动物分组及处理
　　1日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡150只(购自孵化厂)，随机均分为2个试验组和对照组，每组50只，同时设5个重复，每个重复10羽，14日龄(平均母源抗体效价4.5 )时用一羽份的新支二联弱毒苗点眼滴鼻，板蓝根多糖加去离子水稀释成不同的浓度，同时高剂量组肌肉注射12.3mg.mL- 1板蓝根多糖溶液0.3mL/羽，低剂量组肌肉注射6.17mg.mL- 1板蓝根多糖溶液0.3mL/羽，对照组肌肉注射生理盐水0.3mL/羽，每天1次，连续三天，24日龄用一羽份的新城疫Ⅳ弱毒苗二免，同时肌肉注射新支二联油苗，0.3mL/羽。
　　分别于免疫后第7( D7)、14 (D14)、21(D21) 、28( D28) 、35(D35)和42(D42)天每组随机抽取8羽，翼下静脉采血，分离血清，用β-微量法检测血凝抑制(Hemagglutination inhibition，HI)抗体效价;于免疫后14 (D14)、21(D21) 、28( D28) 、35(D35)和42(D42)天每组随机抽取4羽称重，剖杀，摘取胸腺、脾脏和法式囊并称重，计算免疫器官指数(免疫器官重量/体重×100%)。
　　2.2 鸡血清新城疫抗体效价检测
　　2.2.1 4单位抗原的滴定 在96孔微量血凝板上，从左到右每孔各加50μL PBS液，另加一排作为重复。再向每排的第1孔加入50μL新城疫尿囊液，依次向后倍比稀释直至第11孔，第12孔作为对照，无抗原液;然后向每孔加入50μL 1%鸡红细胞悬液，将微量板在微量振荡器上震动混匀后置于37℃温箱中感作30min，待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。
　　结果判定，孔内红细胞呈拉网状为凝集，呈圆点状沉于孔底为沉淀。以100%凝集的抗原最大稀释孔为该抗原血凝价，即一个凝集单位;从该孔向前移2孔的抗原稀释度作为4单位抗原的稀释度。
　　2.2.2 样品的检测 采用血凝抑制实验检测样品的抗体效价，在96孔微量血凝板上，从左到右每孔各加50μL PBS液，再向每排的第1孔加入50μL待检血清，依次向后倍比稀释直至第12孔，然后向每孔加入50μL 4单位抗原，在微量振荡器上振荡混匀后置于温箱中感作20min。取出向每孔加入50μL 1%鸡红细胞悬液，同时设阳性血清、阴性血清及空白对照空。振荡混匀后置于37℃温箱中感作30min，待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。
　　结果判定，以100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的抗体滴度，每组以8只鸡血清抗体滴度的平均值表示该组的抗体水平。
　　2.3 数据分析
　　数据以Means±SD表示，用SPSS13.0软件进行Duncan’s多重分析，比较抗体变化和器官指数变化情况。
　　3 结果
　　表3-1 板蓝根多糖高低剂量对鸡血清ND-HI抗体效价的影响
　　Table 3-1 Effect of istais root polysaccharide(IRPS) high and lose on serum ND-HI antibody titer
　　
　　注:同行数据没有相同字母者差异显著(P<0.05)。
　　Line data markd without the same superscripts differ significantly (P<0.05).
　　3.1 ND-HI抗体效价的动态变化
　　由表3-1可见，试验初期，板蓝根多糖高低剂量组与空白对照组的新城疫HI抗体滴度差异不显著(P>0.05)，试验第21d，板蓝根多糖低剂量组与空白对照组差异显著(P<0.05)，这种差异显著性在第28、35、42d仍然维持(P<0.05)，且在试验的35天达到了最高峰。
　　表3-2板蓝根多糖高低剂量对鸡免疫器官指数的影响
　　Table 3-2 Effect of istais root polysaccharide(IRPS) high and lose on immune organ index 　　
　　注:同行数据没有相同字母者差异显著(P<0.05)。
　　Line data marked without the same superscripts differ significantly (P<0.05).
　　3.2 免疫器官指数的动态变化
　　由表3-2可见，免疫后第14、42d，板蓝根多糖高低剂量组的胸腺指数与空白对照组相比差异显著(P<0.05)，免疫后第21、28、35d，板蓝根多糖低剂量组的胸腺指数与空白对照组相比差异显著(P<0.05);免疫后第14、21d或14、28d，板蓝根多糖高低剂量组的脾脏或法氏囊指数与空白对照组相比差异显著(P<0.05)，免疫后第35、42d，板蓝根多糖高低剂量组的脾脏指数与空白对照组相比差异不显著(P>0.05)，免疫后第28d或21、35、42d，板蓝根多糖低剂量组的脾脏或法氏囊指数与空白对照组相比差异显著(P<0.05)，免疫后第21、35、42d，板蓝根多糖高剂量组的法氏囊指数与空白对照组相比差异不显著(P>0.05)。
　　4 讨论
　　体液免疫是机体抗御传染病的主要因素之一，抗体是介导体液免疫的重要分子，在体内可发挥多种免疫功能。抗体效价的高低直接反应机体的体液免疫状态，它是一种最简单方便的方法，因此本试验采用检测抗体效价作为评价免疫增强剂增强疫苗的免疫作用的指标。多糖作为疫苗免疫增强剂可以促进抗体的产生。据研究报道，屈洪岩(1998)等研究了玉米花粉多糖对鸡新城疫弱毒疫苗免疫应答的影响，发现玉米花粉多糖能显著促进ND-HI抗体的产生，使抗体提前产生并维持较高滴度。本试验表明板蓝根多糖能显著提高蛋公鸡的新城疫HI抗体滴度水平，与本试验的结果一致。
　　胸腺的免疫功能主要是诱导T细胞的分化和成熟，胸腺衍化的T细胞辅助T细胞产生抗体;防止自身免疫病的发生，维持机体自身免疫稳定。从而延缓胸腺的萎缩，丁雁(1992)等研究发现EPS可延缓胸腺的萎缩，且呈剂量依赖关系。EPS剂量越小，胸腺萎缩越明显，B细胞存在于淋巴结、脾脏等淋巴器官中，其中脾脏中B细胞约占60%，是抗体产生的主要基地。禽类的B细胞是由骨髓多功能干细胞经血流进入法氏囊后，在囊素的诱导下分化的，经淋巴和血液循环至外周免疫器官的非胸腺依赖区并继续增殖参与体液免疫。由腔上囊分泌的囊素对B细胞的分化、成熟具有重要的作用。因此，胸腺、脾脏和法氏囊是禽的重要免疫器官，器官指数直接反映免疫器官的发育状态。据研究报道，杨铁虹(2001)等研究当归多糖对小鼠免疫功能的影响，结果在10～100mg/kg剂量范围内，当归多糖增加正常小鼠脾重;张乐萃(1998)等分别给实验鸡肌注新城疫(ND)黄芪多糖佐剂油乳苗，结果表明中药多糖作为新城疫油乳苗佐剂能明显增加免疫器官的重量，本试验表明板蓝根多糖能通过影响脾脏、法氏囊的发育，促进B淋巴细胞的生长，从而提高机体抗体水平。与本试验的结果一致。
　　总之，本试验进一步验证了板蓝根多糖的免疫增强功能，本试验的主要目的旨在研制开发新型免疫增强剂，以提高畜禽传染病的防治效果，保障畜牧业的健康发展。同时也为了克服现有佐剂的不足，减少畜禽产品的化学药物残留，提高乳肉蛋的品质，保障食品安全和人民健康，无论对经济和社会都具有重大的现实意义。
　　参考文献：
　　[1] 王世若. 现代动物免疫学 [M]. 吉林：吉林科学技术出版社，1996：166.
　　[2] 田代化.实用中药字典[M] 北京：人民卫生出版社，2002：1470-147.
　　[3] 陆承平主编. 兽医微生物学 [M]. 北京：中国农业出版社， 2001，127～128.
　　[4] 屈洪岩，郭玉璞，陆钢，等. 花粉多糖对新城疫弱毒苗效果的影响 [J]. 中国兽医杂志，1998，9：15～17.
　　[5] 丁雁，邢善田，周金黄. 淫羊藿多糖对小鼠胸腺细胞转移的影响 [J]. 中国药理通讯，1992，9(3)：28.
　　[6] 贺新怀主编. 中医药免疫学 [M]. 北京：人民军医出版社， 2002，47.
　　[7] 李金安.玉屏风散作免疫佐剂对鸡法氏囊病的临床作用观察[J].中兽医杂志，1992(1)：29.
　　[8] 张乐萃，王金宝，孙月平，等. 新城疫中药多糖佐剂油乳苗对鸡免疫器官发育的影响 [J]. 中国兽医学报，1998，18(4)：378～381.
　　[9] Moore A C，Kong W P，Chakrabarti B K，et al. Effect of antigen and genetic adjuvants on immune responses to human immunodeficiency virus DNA vaccines in mice [J]. J Virol，2002，76： 243~250.
　　[10] Nobiron I，Thompson I，Brownlie J，et al. Cytokine adjuvancy of BVDV DNA vaccine enhances both humoral and cellular immune responses in mice [J]. Vaccine，2001，20：4226~4235.
　　[11] Babai I，Barenholz Y，Zakay-Rones Z，et al. A novel liposomal influenza vaccine containing hemagglutinin-neuraminidase and IL-2 or GM-CSF induces protective anti-neuraminidase antibodies cross-reacting with a wide spectrum of influenza A viral strains [J]. Vaccine，2001，20： 505~515.
　　[12] Kim J J，Yang J S，Manson K H，et al. Modulation of antigen-specific cellular immune responses to DNA vaccination in rhesus macaques through the use of IL-2，IFN-γ，or IL-4 gene adjuvants [J]. Vaccine，2001，19：2496~2505.
　　[13] Min W，Lillehoj H S，Burnside J，et al. Adjuvant effects of IL-1beta，IL-2，IL-8，IL-15， IFN-alpha， IFN-gamma，TGF beta4 and lymphotactin on DNA vaccination against Eimeria acervulina [J]. Vaccine，2001，20：267~74.
　　[14] Xiangfeng Kong，Yuanliang Hu，Rong Rui，et al. Effects of Chinese herbal medicinal ingredients on peripheral lymphocyte proliferation and serum antibody titer after vaccination in chicken [J]. International Immunopharmacology，2004，4(7)：975~982.
　　[15] Puki A, Saxena R, Saxena R P et al, Immunostimulant Agents form Indigowoad Root Polysaccharide. Journal of Natural.

林中漫步

很专业，学习了。

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