和胃平喘对小鼠肠绒毛高度的影响

中药调理

                                                             和胃平喘对小鼠肠绒毛高度的影响
                                                               

叶笃涵1 陈强2 （通讯作者） 李建生2 刘庆华2 陈炳华2 张照红2 甘平旭3

（1.宁德市科技开发中心 福建宁德 352100；2.福建农林大学 福建福州 350002；3.福州市畜牧站 福建福州 350005）

摘 要：选择大小、体重相近的SD雌性小鼠（18-22g）40只，随机分为4组，1.5% “和胃平喘”组、2.5% “和胃平喘”组、3.5% “和胃平喘”组和基础料组，每组2个重复，每个重复5只，分别饲喂15天和30天后取肠道做成切片，测定小鼠肠道的肠绒毛高度。结果表明：15天试验中，1.5% “和胃平喘”组、2.5% “和胃平喘”组、3.5% “和胃平喘”组与对照组间的平均肠绒毛高度差异显著（P<0.05）。30天试验中，2.5% “和胃平喘”组十二指肠平均肠绒毛(duodenum villus)高度为0.9835±0.1582mm，3.5% “和胃平喘”组十二指肠平均肠绒毛(duodenum villus)高度为0.8898±0.1635mm，2.5% “和胃平喘”组、3.5% “和胃平喘”组的十二指肠平均肠绒毛高度都与对照组的差异极显著（P<0.01），1.5% “和胃平喘”组的十二指肠平均肠绒毛高度低于对照组，但差异不显著（P>0.05）；2.5% “和胃平喘”组和3.5% “和胃平喘”组的空肠(jejunum villus)平均肠绒毛高度与对照组间的差异不显著（P>0.05）；1.5% “和胃平喘”组和2.5% “和胃平喘”组的回肠平均肠绒毛(ileum villus)高度与对照组间的差异不显著（P>0.05）。在小鼠基础料中添加“和胃平喘”能不同程度的提高小鼠肠绒毛高度，且以2.5%和3.5%两个添加量效果最好。
关键词：和胃平喘；肠绒毛；切片

Effect of HWPC Granules on Length of Intestinal Villus in Mice
Abstract: 40 SD female mice with almost the same size and weight (18-22gs) were selected and then divided randomly into 4 groups, namely G1, G2, G3 and G4. Thee levels of adding dosages of HWPC granules, 1.5%, 2.5% and 3.5%, were used for G1. G2, and G3 respectively as the tested groups, while the G4 was fed on basic diet as the control. Two repetitions per group and five mice per repetition were performed. After feeding 15th day and 35th day, small intestinal tract of each mouse was taken out for histotomy and the length of intestinal villi were carefully measured. The results showed that in 15 days of experiment, the average length of intestinal villus from tested groups were significantly different than that of control group (P<0.05); in 30 days of experiment, the average length of duodemum villus from adding 2.5% HWPC group was 0.9835±o.1582mm and the average length of duodenum villus from adding 3.5% HWPC group was 0.8898+0.1635mm, both were highly significantly different than that of control group (P<0.01) .The average length of duodenum villus from adding 3.5% HWPC group was lower than that of control group, but not significantly different (P>0.05).The average length of jejunum villus from adding  2.5% HWPC group  snd 3.5% group were not sinificantly differwnt than that of control(P>0.05). Furthermore, the average length of ileum villus from adding 1.5% and 2.5 % group  were  not significantly different(P>0.05) than that of control. In conclusion, supplementing HWPC to the basic diet  could increase the length of intestinal villus in some extent; This may be the basic reason for the improvement of animal’s digestion and health by supplementation of HWPC granules; The optimal adding levels were 2.5% and 3.5%,.
Key words: HWPC; intestinal villus; slice


“和胃平喘”是一种新型的复方中草药颗粒饲料添加剂，这种新型的复方中草药颗粒（陈皮、神曲、山楂、特效中草药、糖蜜等）是在中兽医经典方剂的基础上，不同的中草药均采取最佳的加工工艺，然后采用糖蜜喷雾造粒制成的适口性好的中草药饲料添加剂。配方中的糖蜜既发挥了载体作用，又发挥了粘结剂的作用，而且更重要的是糖蜜不仅极大地改善了产品的适口性，同时还可以活化畜禽肠道有益微生物菌群，改善胃肠道环境，提高采食量，促进畜禽快速生长，减少疾病的发生。
中草药资源分布广泛、易种易收、可就地取材、制作简便、天然性、营养性、成本低廉、残留较低、增强免疫功能、抗应激、抗微生物等特点[1,2]。中草药即能进行动物疫病的群体防治，又能促进个体生长发育，具有个体及群体防治的药效和营养双重功能[3]。中草药天然产品，含有多种活性成分，无毒副作用或很小，保持了各种物质的自然形态和生物活性，中草药可以改善饲料适口性、改善饲料营养、提高饲料转化率，并且可以降低畜禽饲养成本。还具有双向调节作用、激素样作用，不易产生抗药性。中草药对畜禽养殖户来说是一个优良的饲料添加剂。
本试验是验证“和胃平喘”是否有促进动物吸收消化的能力，选取小肠肠绒毛高度为指标进行检测，为今后对“和胃平喘”在畜牧业中的应用提供理论依据，并进一步推广“和胃平喘”在畜牧业中的应用提供参考。
1 材料与方法
1.1 实验材料
SD雌性小鼠（18-22g）、基础料（福建医科大学实验动物中心）
    和胃平喘（湖北金谷药业有限公司），批号：鄂饲预字（2009）178084
    Motic电子显微镜
    Laika切片机
1.2 试验方法
1.2.1 小鼠饲养和管理
选择大小、体重相近的小鼠（18-22g）40只，随机分为4组，即基础料添加“和胃平喘”1.5%组（1.5%组）；基础料添加“和胃平喘”2.5%组（2.5%组）；基础料添加“和胃平喘”3.5%组（3.5%组）；基础料组（对照组）；每组2个重复，每个重复5只。让小鼠自由采食（不够时添加足够的料），分别饲喂15天和30天，做好小鼠日常饲养管理。
1.2.2 组织石蜡切片的制作过程
1.2.2.1 取材、固定
小鼠在杀前禁食24h，处死小鼠，破开腹部，取小数肠道组织。在0.9%生理盐水中清洗。挑取肠组织在10%甲醛中固定24h以上。取材在动物处死后立即进行解剖和切取组织材料。
1.2.2.2 脱水
将组织从10%甲醛中取出流水冲洗24h。以吸取肠组织中的固定液。
1.2.2.3 透明
将流水冲洗好的组织依次放入：50%乙醇45min×2次→70%乙醇×2次→80%乙醇×2次→95%乙醇30min→100%乙醇(Ⅱ)45min→100%乙醇(Ⅱ)45min→乙醇:二甲苯(1:1)30 min→二甲苯(Ⅰ) 20min→二甲苯(Ⅱ)20min。
1.2.2.4 包埋
组织浸蜡，在石蜡Ⅰ（熔点50-52℃）、石蜡Ⅱ（52-54℃）、石蜡Ⅲ（54-56℃）各浸蜡45min，恒温箱温度控制在58-60℃。浸蜡完成后，用石蜡（56-58℃）+少许蜂蜡进行组织包埋。包埋好的蜡快修理成梯形焊于小木块或小纸框上。4℃保存，备用。
1.2.2.5 修块、切片
切去组织周围过多的石蜡，一般情况下在组织周围留有约1-2mm的石蜡边，两边必须平行。调整切片机上的切片厚度为5um，然后切片。
44℃水浴展平，编号。展好的切片在室温下稍微干燥后，放在37℃恒温烤箱中烘干24h。
1.2.2.6 脱蜡、染色  
将烘干的切片梯度脱蜡：二甲苯(Ⅰ)20min→二甲苯(Ⅱ)20min→100%乙醇(Ⅰ)5min→100%乙醇（Ⅱ）5min→95%乙醇5min→80%乙醇5min→70%乙醇5min→50%乙醇5min→自来水2min→苏木精染色10min→1％盐酸酒精3s→流水冲洗反蓝2-3h→伊红染色3s→自来水冲洗lmin，染色完成，烘箱37℃烘干24h。
1.2.2.7 封片
切片好的组织放入二甲苯中透明，用中性树胶封片。
1.2.2.8 观察切片
将封好的切片在显微镜下观察（已预先装好目镜测微尺或有标尺的电子显微镜）下观察整个完整的肠绒毛，测量其高度（长度），做好记录。
1.2.3 试验数据处理
所测得的肠绒毛高度数值采用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析，LSD多重比较。
2 结果与分析
2.1 小鼠饲养15天，小鼠小肠肠绒毛高度如表1。切片图1-图4。
表1 和胃平喘对小鼠小肠肠绒毛高度的影响 （15天）
Tabel1. Effect of HWPC on length of intestinal villus in rats (15 days)
组别                             高度（mm）
对照组                     0.7808±0.1094aA
1.5%和胃平喘组        0.8807±0.0754aA
2.5%和胃平喘组        0.8557±0.0937bA
3.5%和胃平喘组        0.8898±0.1635bA
注：相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母、相同大写字母表示差异显著（P<0.05），不同小写字母、不同大写字母表示差异极显著（P<0.01）,下同。
15天各试验组与对照组间的肠绒毛高度差异显著（P<0.05）。说明各添加量（1.5%、2.5%、3.5%）的和胃平喘都能显著提高小鼠肠绒毛高度。其中，添加3.5%和胃平喘组的肠绒毛高度比对照组的大0.109mm，效果最好；添加1.5%和胃平喘组的肠绒毛高度比对照组的大0.0999mm；添加2.5%和胃平喘组的肠绒毛高度比对照组的大0.0749mm。

图1. 对照组肠绒毛切片（15天）
Fig1. Iintestinal villus’s slice of control group (15 days)


图2. 和胃平喘1.5%组肠绒毛切片（15天）
Fig2. Iintestinal villus’s slice of adding 1.5% HWPC (15 days)


图3. 和胃平喘2.5%组肠绒毛切片（15天）
Fig3. Iintestinal villus’s slice of adding 2.5% HWPC (15 days)


图4. 和胃平喘3.5%组肠绒毛切片（15天）
Fig4. Iintestinal villus’s slice of adding 3.5% HWPC (15 days)

2.2 小鼠饲喂30天，小鼠十二指肠肠绒毛高度如表2，切片图5-图8。
表2 和胃平喘对小鼠十二指肠肠绒毛高度的影响（30天）
Tabel2. Effect of HWPC on length of duodenum villus in rats (30 days)
组别        高度（mm）
对照组        0.7815±0.2454aA
1.5%和胃平喘组        0.7180±0.0552aA
2.5%和胃平喘组        0.9835±0.1582bB
3.5%和胃平喘组        0.8978±0.1447bB
2.5%和胃平喘组十二指肠和3.5%组十二指肠组的平均肠绒毛高度都极显著高于对照组十二指肠肠绒毛高度（P<0.01），说明在小鼠饲料中添加2.5%和3.5%的和胃平喘都能极显著的提高小鼠饲喂30天后的十二指肠肠绒毛高度。其中，2.5%十二指肠组的平均肠绒毛高度比对照组的大0.202mm；3.5%十二指肠组的平均肠绒毛高度比对照组的大0.1163mm；说明在小鼠饲料中添加2.5%和胃平喘更有利于提高小鼠十二指肠的肠绒毛高度，效果更好。
1.5%组十二指肠的平均肠绒毛高度比对照组的低低0.0635mm，但差异不显著（P>0.05），说明在小鼠饲料中添加1.5%和胃平喘会降低小鼠饲喂30天后的十二指肠肠绒毛高度，不利于提高小鼠肠绒毛高度。

图5 对照组十二指肠肠绒毛切片图（30天）
Fig5. duodenum villus’s slice of control group (30 days)


图6 和胃平喘1.5%组十二指肠肠绒毛切片图（30天）
Fig6. duodenum villus’slice of adding 1.5% HWPC (30 days)


图7 和胃平喘2.5%组十二指肠肠绒毛切片图（30天）
Fig7. duodenum villus’slice of adding 2.5% HWPC (30 days)


图8 和胃平喘3.5%组十二指肠肠绒毛切片图（30天）
Fig8. duodenum villus’slice of adding 3.5% HWPC (30 days)
2.3 小鼠饲喂30天，小鼠空肠肠绒毛高度如表3，切片图9-图12。
表3 和胃平喘对小鼠空肠肠绒毛高度的影响(30天)
Tabel3. Effect of HWPC on length of jejunum villus in rats (30 days)
组别        高度（mm）
对照组        0.7492±0.1230aA
1.5%和胃平喘组        0.7523±0.2635 aA
2.5%和胃平喘组        0.7733±0.0877aA
3.5%和胃平喘组        0.7262±0.1187aA
各空肠试验组与对照组间的平均肠绒毛高度差异不显著（P>0.05），1.5%和胃平喘组空肠肠绒毛高度比对照组肠绒毛的大0.0031mm，2.5%和胃平喘组空肠肠绒毛高度比对照组肠绒毛的大0.0241mm，3.5%和胃平喘组空肠肠绒毛高度比对照组肠绒毛的低0.023mm。


图9 对照组空肠肠绒毛切片图（30天）
Fig9. jejunum villus’s slice of control group (30 days)


图10 和胃平喘1.5%组空肠肠绒毛切片图（30天）
Fig10. jejunum villus’s slice of adding 1.5% HWPC (30 days)


图11 和胃平喘2.5%组空肠肠绒毛切片图（30天）
Fig11. jejunum villus’s slice of adding 2.5% HWPC (30 days)


图12 和胃平喘3.5%组空肠肠绒毛切片图（30天）
Fig12. jejunum villus’s slice of adding 3.5% HWPC (30 days)
2.4 小鼠饲喂30天，小鼠回肠肠绒毛高度如表4，切片图13-图16。

表4 和胃平喘对小鼠回肠肠绒毛高度的影响（30天）
Tabel4. Effect of HWPC on length of ileum villus in rats (30 days)
组别                             高度（mm）
对照组                     0.5125±0.0206aA
1.5%和胃平喘组        0.5786±0.0643aA
2.5%和胃平喘组        0.5175±0.0582aA
3.5%和胃平喘组        0.5312±0.0561aA
各回肠试验组与对照组间的平均肠绒毛高度差异不显著（P>0.05），1.5%和胃平喘组的空肠肠绒毛高度比对照组肠绒毛的大0.0661mm，2.5%和胃平喘空肠肠绒毛高度比对照组肠绒毛的大0.005mm，3.5%和胃平喘空肠肠绒毛高度比对照组肠绒毛的大0.0187mm。


图13 对照组回肠肠绒毛切片图（30天）
Fig13. ileum villus’s slice of control group (30 days)


图14 和胃平喘1.5%组回肠肠绒毛切片图（30天）
Fig14. ileum villus’s slice of adding 1.5% HWPC (30 days)


图15 和胃平喘2.5%组回肠肠绒毛切片图（30天）
Fig15. ileum villus’s slice of adding 2.5% HWPC (30 days)


图16 和胃平喘3.5%组回肠肠绒毛切片图（30天）
Fig16. ileum villus’s slice of adding 3.5% HWPC (30 days)
3 讨论
肠绒毛(intestinal villus)是由肠上皮和固有层共同向肠腔突出形成的细小突起，长约0.35～1mm，可使肠腔表面积扩大约10倍，绒毛多呈柱状、叶状或指状等[4]。小肠是动物及人体内具有消化和吸收等功能的重要器官，而小肠绒毛则是对各种营养物质进行吸收的重要结构。小肠的正常结构是营养物质消化与吸收的基础。小肠绒毛微血管密集，走行复杂[5]。
肠绒毛在十二指肠及空肠分布最密，正常小肠绒毛排列整齐紧密、细长、呈柱状。肠绒毛的完整性及高度，决定了小肠的吸收面积，影响营养物质的吸收及动物的生长[6]。
本试验中，小鼠饲喂30d，2.5%和胃平喘组和3.5%和胃平喘组的十二指肠肠绒毛高度都极显著高于对照组，这可能是由于和胃平喘中含有的复合中草药活性成分起作用。而2.5%和胃平喘组的促进小鼠十二指肠肠绒毛生长高度比3.5%和胃平喘组的大0.0857mm，可能由于3.5%和胃平喘组中含有的活性成分多于2.5%和胃平喘组，超过最适宜的添加量，量过多起抑制作用，2.5%和胃平喘的添加量更能适合小鼠十二指肠肠绒毛变长；1.5%和胃平喘组的十二指肠肠绒毛高度低于对照组，可能是由于1.5%的添加量中含有的活性成分太少，不足以促进小鼠十二指肠肠绒毛生长，反而起抑制作用。
对于空肠和回肠，添加不同比例的和胃平喘均未见有显著的促进小鼠空肠和回肠的肠绒毛高度变长，这可能是由于十二指肠是小肠中的重要肠断，很多营养物质在十二指肠里被吸收，少量在空肠和回肠段吸收。
关于不同种添加剂对肠绒毛高度的应用报道也有不少，张运涛等[7]报道，在蛋用仔鸡日粮中添加酵母多糖，可以明显保护雏鸡小肠绒毛。周琼等[8]报道，美洲大蠊粉可使发生病理变化的小鼠肠黏膜及绒毛修复完好，并提高肉鸡的肠绒毛高度[9]。张玲等[10]报道，鲫鱼中添加木聚糖酶能提高鲫鱼的肠绒毛高度，以0.05%的添加量最好。
在指状绒毛中，绒毛的长度与其肠上皮细胞数量呈显著正相关。绒毛变短时，肠上皮细胞数减少，对营养物质的消化吸收能力降低。正常情况下，隐窝基部的细胞不断地分化并向绒毛的端部迁移，形成具有吸收能力的肠上皮细胞，以补充绒毛正常脱落的肠上皮。肠绒毛长度增加，消化吸收功能增强，腹泻率降低，生长发育加快[11]。本试验中得出2.5%和3.5%添加量的和胃平喘都能很明显的提高小鼠十二指肠肠绒毛高度，关于其作用机理还有待进一步研究。
4 结论
“和胃平喘”能不同程度的提高小鼠小肠肠绒毛高度。在小鼠饲喂15天试验中，1.5%、2.5%、3.5%这3个添加量的和胃平喘都能显著提高小鼠的小肠肠绒毛高度；30天试验中，2.5%、3.5%这2个添加量的和胃平喘都能极显著地提高小鼠的十二指肠肠绒毛高度。


参考文献
[1] 农业部新编渔药手册编撰委员会.新编渔药手册[M].北京:中国农业出版社,2005:317-318.
[2] 梁用本.中草药在防治鱼病中的应用[J].渔业致富指南,2004(18):53-53.
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[6] 戴贤君.那西肽对宝石鲈生长性能及小肠绒毛的影响[J].中国动物保健,2006(6):42-43.
[7] 张运涛,谷文英,王永玲.酵母多糖对蛋用仔鸡小肠绒毛保护作用的研究[J].粮食与饲料工业,2000(3):30-31.
[8] 周琼,吴珍泉,李忠荣,等.美洲大蠊粉对腹泻小鼠肠道修复的影响[J].福建农业学报,2008,23(2):125-131.
[9] 刘昊,李忠荣,刘景,等.美洲大蠊对肉鸡生产性能、血液生化指标及小肠绒毛高度的影响[J].北京农学院学报,2009,24(1):28-32.
[10] 张玲,聂国兴,周洪琪.木聚糖酶对鲫鱼生长性能和小肠绒毛的影响[J].浙江海洋学院学报(自然科学版),2006,25(2):133-138.
[11] 王子旭.锌硒互作对肉鸡肠黏膜结构及黏膜免疫相关细胞影响的研究[D].北京:中国农业大学,2003.

guomin

学习了，谢谢分享

中药调理

请大家多提宝贵意见。

losojo

不错，还有人来整整切片，做点基础研究
小鼠肠切起来有点难切的哦

嘎调

学习了！看来中药的应用越来越广泛了！

chenoo22

好文章，