低聚木糖的检测方法

xzxkwsn · 发表于 2010-6-9 15:20:08

江苏康维生物有限公司
低聚木糖测定方法
（低聚木糖饲料添加剂行业标准）
一、低聚木糖含量测定的主要设备和试剂
1、仪器设备
⑴仪器
刻度试管（25ml）
吸量管（5ml、1ml）
试管架
量筒
烧杯（1000、250、100、50ml）
棕色瓶（250ml）

⑵主要设备
7230型分光光度计及比色皿、灭菌锅、电炉
2、试剂
⑴DNS配制
3，5-二硝基水杨酸                7.5g
NaOH                            14g
充分溶解于1000ml煮沸过的蒸馏水中，再加入：
酒石酸钾钠                      216g
苯酚                            5.5ml
偏重亚硫酸钠                      6g
充分溶解后，于棕色瓶中4℃贮存5天后即可使用。

⑵2.0g/l标准木糖溶液配制
精确称取0.200g木糖，溶解于少量蒸馏水中，于容量瓶中定容至100ml，于冰箱中4℃保存备用。
二、木糖标准曲线的测定

编号 1 2 3 4 5
2.0g/L木糖标准液(ml) 0.2 0.4 0.6 0.8 1
蒸馏水(ml) 0.8 0.6 0.4 0.2 0
DNS（ml） 3
A550 　　　　　

取五支25ml刻度试管，分别用1ml吸量管按上表吸入木糖标准液和蒸馏水，再用5ml吸量管吸入3mlDNS，沸水浴中煮沸5min，冷却后定容至25ml，摇匀后，在7230分光光度计上于550nm处测定吸光度。
以上表各木糖标准液浓度（0.4g/L，0.8g/L，1.2g/L，1.6g/L，2.0g/L）为纵坐标，以对应的吸光度（A550）为横坐标作标准曲线，回归出标准方程（C=MA+N）。
（注：方程中C为糖浓度，A为吸光度，M为直线斜率，N为截距）

三、低聚木糖含量的测定
取样与预处理：① 从包装袋的上、中和下部三处随机各取产品干粉约10 g，充分拌合均匀得样品粉A( 注意不得使粉尘飞扬!)。
② 准确称取 M0 = 2.000 g ± 0.001样品粉A，在40—50 ℃热水浴中充分溶解( 30分钟 )于100 mL蒸馏水中得样品液B。
1、水份的测定
（1）先将2只空称量瓶洗净编号，置于烘箱在105℃条件下烘2小时后，转入干燥器冷却25分钟，称取空称量瓶的绝干重量M1并记录。
（2）称取一定数量的样品粉A至称量瓶中，称取称量瓶的重量M2并记录。然后，将称量瓶置于烘箱在105℃条件下烘5小时，转入干燥器冷却25分钟，称取称量瓶的重量M31并记录。再将称量瓶转入烘箱烘1小时，重复上述操作称取称量瓶的重量M32并记录，至（M32－M31）的值不超过0.002 g。
（3）水份的计算：
水份：a1（%）= [( M32－M1 )  / ( M2－M1)]× 100

注：M1—绝干称量瓶重量
  M2—烘干前样品重量和称量瓶重量之和
   M32—烘干后样品和称量瓶的绝干重量之和

2、低聚木糖干基含量的测定
(1) 稀释：摇匀后取样品液B，在3000r/min条件下离心25分钟得离心清液C。
(2) 低聚木糖的测定：分别以10mL移液管准确移取10mL离心清液C（注意：要将移液管外壁擦拭干净）置入50mL小三角瓶中，再以10mL移液管准确移取10mL的8%H2SO4，摇匀后用牛皮纸和橡皮筋将小三角瓶的瓶口扎住（注意：不要扎得过紧，否则在降温过程中容易造成试样喷出）。水解、中和后，在50mL的量筒中以蒸馏水稀释至50mL，DNS法测定稀释中的木糖浓度C2(g/L)，则低聚木糖产品中低聚木糖含量为
a2（%）= C2×5×0.9×0.1/ M0 × 100
   干基含量 a3（%）=a2/(1－a1)

注：C2—稀释液中的木糖浓度
  5—稀释倍数
  0.9—酸水解后的转换系数
0.1—样品液B定容到100ml，即0.1升M0—称取的样品A的重量