如何测定真蛋白？

江南才女

大家好！大家都是怎么做真蛋白的？谢谢

apple12151007

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sunmanji

测定氨基酸的方法测定。

love51

前几天看到刚好有人发过一个相关的帖子，你可以搜索一下

iemy-2007

在碱性条件用硫酸铜沉淀蛋白质，过滤后用测粗蛋白的方法测

MHHY

测定步骤
　　1．试样的前处理
　　准确称取试样1～2g(精确到0．1mg)于250ml烧杯中，加蒸馏水50ml煮沸．依次加入10％硫酸铜水溶液20ml和2.5％氢氧化钠溶液20rnl，边加边搅拌，加完后继续搅拌几分钟。放置2小时或静置过夜，沉淀物以中速定量滤纸过滤。用70℃以上热水18ml反复洗涤沉淀．直至滤液无沉淀为止(取氯化钡试液滴于表面皿中。加2mol／L盐酸溶液1滴．滴人滤液．在黑色背景下观察应无白色沉淀)。然后，将滤纸和沉淀物包好，放人烘箱中在65～70℃下干燥2小时。
　　2．试样的消化
　　将烘干的试样连同滤纸一起放人凯氏烧瓶中．依次加入硫酸钾或无水硫酸钠9 硫酸铜1 浓硫酸25ml，摇匀，尔后置于电炉上先低温(100～200~C)加热，注意防止泡沫浮起，待泡沫消失后再提高加热温度(约410~C)至沸腾，消化至溶液澄清无黑点并呈蓝绿色，再继续加热30分钟，然后将凯氏烧瓶移出电炉放冷。
　　3．定容
　　将冷却后的消化液加蒸馏水约10～20ml，’摇匀后转入100ml容量瓶中，再加10～20ml蒸馏水洗涤凯氏烧瓶。溶液并入容量瓶中，如此反复洗涤，直至消化液全部转入容量瓶中。待冷却至室温后，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。即为试样分解液。
　　4．蒸馏
　　采用半微量凯氏定氮蒸馏法。先将水蒸汽发生器与半微量凯氏定氮蒸馏器连接好。在水蒸汽发生器的水中加入甲基红指示剂3滴与硫酸数滴，使水溶液保持橙红色，否则应补加少许硫酸。取20ml2％硼酸水溶液于250ml锥形瓶中，加0．1％甲基红乙醇溶液5～6滴，0．5％溴甲酚绿乙醇溶液2～3滴，摇匀。然后将锥形瓶置于半微量凯氏定氮蒸馏器的末端．使冷凝管末端浸入此吸收液面下2／3处。准确移取试样分解液10～15ml注入半微量定氮蒸馏器中，用少量蒸馏水冲洗进样口，尔后缓慢加入40％氢氧化钠水溶液20ml。用少量蒸馏水冲洗进样口，用玻璃塞塞好进样口。再加适量蒸馏水封住进样口以防止漏气。蒸馏3～5分钟以后待冷凝管末端管口之馏出液呈中性(红色石蕊试纸不变色)时将冷凝管末端离开吸收液面并冲洗冷凝管末端管口，洗液并入吸收液。再蒸馏1～2分钟后用蒸馏水冲洗冷凝管末端管口，洗液并入吸收液。然后将锥形瓶移出，准备滴定。此时应夹断气源。排出废液，准备下一个样品的测定。
　　5．滴定
　　吸收氨后的吸收液立即用0．05tool／1的盐酸标准溶液滴定使溶液颜色由蓝绿色变为灰红色即为滴定终点。同时记录盐酸标准溶液的耗用量。
　　6．空白
　　在进行样品测定的同时进行空白测定。空白测定除不加试样外其他操作步骤与试样相同。空白试验消耗的盐酸标准溶液的体积不得超过0．5ml。
   7.计算方法同粗蛋白