蛋氨酸羟基类似物及甜菜碱在急性应激下对肉鸡血清酶指标的影响

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       蛋氨酸羟基类似物及甜菜碱在急性热应激下

             对肉鸡血清酶指标的影响

鲁海军，许丽

(东北农业大学动物科学技术学院，黑龙江哈尔滨 150030)

摘要：试验选用AA肉仔鸡72只，采用3 X 2因素随机分组试验设计。在笼养条件下，对试鸡进行急性热应激试验，试验共进行1周，测定和评价甜菜碱、蛋氨酸和液态蛋氨酸羟基类似物及不同添加水平在急性热应激下对肉鸡血清酶指标的影响。结果表明：甜菜碱可有效改善细胞膜的通透性，有助于降低应激时肌酸激酶、谷草转氨酶的升高；添加甜菜碱和MHA组的乳酸脱氢酶下降减慢，对机体能量的利用效率优于蛋氨酸。在热应激下添加甜菜碱和MHA优于蛋氨酸。

关键词：畜牧学；蛋氨酸羟基类似物；甜菜碱；急性热应激；血清酶；内鸡

中图分类号：s831．5
文献标识码：B
文章编号：O258—7O33(2o06)21—0023一O3

液态蛋氨酸羟基类似物又名MHA—FA(methionine hydroxy analogue free acid)，HMB (D，L一2一hydroxy一4一methylthio—butanoic acid)，化学名为2一羟基一4一甲硫基丁酸，分子式为C 5H10 O3 S。MHA—FA是由单体、二聚体、三聚体组成的混合物，单体可直接被吸收，二聚体和三聚体在小肠内可水解成单体。尽管液态蛋氨酸羟基类似物没有氨基，但在体内仍可合成为L一蛋氨酸，参与体内代谢。

Dibner等[1]认为热应激影响了蛋氨酸吸收代谢的酶的活性。肾和肝中D一蛋氨酸代谢的D一氨基酸氧化酶(D—amino acid oxidase)分别减少了30％和12％，而对于HMB的L一羟基酸氧化酶(L-hydroxy acid oxidase)和D一羟基酸脱氢酶(D—hydroxy acid dehydrogenase)未受到影响。Chen等[2]的试验也显示蛋氨酸羟基类似物组的采食量、增重、饲料转化率均优于蛋氨酸组。

甜菜碱又名三甲基甘氨酸，氮原子上有3个甲基。甜菜碱对于细菌、植物、动物来说是最重要的渗透调节因子之一。生长在氯化钠、葡萄糖或其他盐类浓缩液中的细菌细胞用于防止脱水。甜菜碱对于有些海洋动物(如甲壳类动物、大西洋鲑)在淡水和海水间转换的重要

性也已被证实[3]
。保持细胞内水和离子的平衡，对于细胞是极为重要的。细胞必须积聚离子或渗透物质以对抗细胞外物质浓度的增高，细胞内的离子基本上是被用来保持细胞内的水分。鸡利用“离子泵”作为控制水出入细胞的补偿需耗费能量，以致大量能量不能用于生长和生产而用于维持上。甜菜碱的渗透调节功能可减轻机体细胞为维持水平衡而对高能耗离子泵的依赖。因此，鸡的维持能量需要降低，可用于生长和生产。

机体正常情况下，细胞内酶由于细胞膜的屏障作用，不易逸出。当细胞因某种原因受损时，细胞膜通透性提高，血清酶活性升高。因而，热应激下机体血清酶的改变可反映机体组织细胞功能的改变。本试验将探讨不同添加水平的蛋氨酸羟基类似物和甜菜碱对肉鸡在急性热应激情况下的血清生化指标有何影响，为生产中同时使用蛋氨酸羟基类似物和甜菜碱提供可供参考的数据，以指导生产实践。

1 材料与方法

1．1 试验设计
本试验采用3 X 2二因素随机分组试验设计，两因素分别是甜菜碱和蛋氨酸源(DL一蛋氨酸和液态蛋氨酸羟基类似物)。试验共设6个处理组，每处理4个重复，每重复3只鸡。

具体设计见表1。

1.2 试验材料
选用31日龄健康、体重接近的商品代爱拔益加(AA)72只。甜菜碱盐酸盐，纯度为98％；液态蛋氨酸羟基类似物，纯度为88％；蛋氨酸，纯度为98．5％。均为市购。

1．3 基础饲粮
基础饲粮配制参照美国NRC肉鸡营养需要，配制玉米一豆粕型基础饲粮，饲料原料成分表参照中国饲料营养成分(2003版)。其具体配方为：玉米61．08％、豆粕32％、植物油3．5％、磷酸氢钙1．4％、石粉1．4％、多维0．02％、微量元素0．2％、赖氨酸0．1％、食盐0．3％；营养成分为：代谢能12．64 MJ／kg、粗蛋白 19．84％、粗纤维2．64％、钙1．02％、磷0．58％、蛋氨酸+胱氨酸0．65％、蛋氨酸0．31％、精氨酸／赖氨酸1．17、胆碱0．13％(粗蛋白、钙、磷均为实测值)。

1．4 试验期与饲养管理

1．4．1 饲养管理
采用常规3层笼养，每笼3只鸡。自由采食和饮水。

1．4．2 热应激试验
在第5周进行，31日龄08：00第1次采血，20：00停料，供水。31日龄22：00开始用电热管加热，在2 h内使舍温迅速升到(33±1)℃，湿度84％±2％。保持高温应激4 h，然后停止加热。

血样的采集：加热停止后分别于4、28、52和76 h空腹采血，每个重复随机抽取1只鸡，用一次性5 mL注射器翅静脉下采血5 mL，放入一次性塑料离心管中。立即将离心管放入恒温水浴箱中37℃水浴30 min，离心10 min(600 g)，将血清分装2支EP管保存，1支马上送检血清生化指标。另一支-20℃保存，待测。

1．5 测定指标与方法
谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)均使用美国贝克曼CA一4型全自动生化分析仪进行测定。

1．6 数据处理采用SAS6．12统计软件ANOVA进行方差分析和Duncan氏法进行多重比较。结果以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

急性热应激下31—35日龄肉鸡血清中肌酸激酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、谷草转氨酶和谷丙转氨酶含量的变化见表2。

血清中肌酸激酶的变化：应激后A1组一直呈上升趋势，应激后76 h，A1组肌酸激酶水平高于应激前的水平和其他各组的水平。A 2组、A3 组、B1组、B2组和B3组均呈先上升后下降的趋势，应激前与应激后76 h的肌酸激酶水平差异不显著。B1 、B 2和B3 组应激后变化不明显。

血清中乳酸脱氢酶的变化：A 1组、A2 组、A 3组、B1组和B2 组均呈先下降后上升，再下降的趋势，B3 组应激后76 h内无明显变化。

血清中碱性磷酸酶的变化：A2 组、A3 组和B2 组应激后一直呈下降趋势。A1组和B1 组应激后下降，4 h后上升，28 h后又下降。各组应激后76 h的碱性磷酸酶水平都低于应激前。

血清中谷草转氨酶的变化：各组应激后均表现出先升高后下降的趋势。A1 、B1 、B2 和B3 组应激后28～52 h的水平明显高于应激前的水平，差异显著(P<0．05)。A1组应激后76 h的水平明显高于应激前的水平，且差异显著，其他各组无显著差异。A1组上升的速率快于A2组，A2组快于A3组。

血清中谷丙转氨酶的变化：各组应激后表现为先下降后上升，再下降的趋势。

3 讨论

机体正常情况下，细胞内酶由于细胞膜的屏障作用，不易溢出。当细胞因某种原因受损时，细胞膜通透性提高，血清酶活性升高。因而，热应激下机体血清酶的改变，可反映机体组织细胞功能的改变。

血清肌酸磷酸激酶(creatinine phosphkinaes，CPK)是一种器官特异性酶，以骨骼肌含量最高，其功能是催化三磷酸腺苷(ATP)中的高能磷酸键转移到肌酸分子上，生成磷酸肌酸而储存能量。热应激时，由于肌肉能量供应不足，肌肉营养不良，细胞受损，细胞膜的完整

性破坏【4】，通透性升高，导致肌肉中的CPK溢出，使血浆CPK浓度升高【5】，所以血清CK的升高可作为应激的一个指标。高温可使血清肌酸激酶显著升高。

试验中应激后A1 组一直呈上升趋势，应激后76 h，A 1组肌酸激酶水平高于应激前的水平和其他各组的水平。添加甜菜碱各组的肌酸激酶水平应激前与应激后差异不显著，这可能是由于甜菜碱可有效改善细胞膜的通透性而减少了肌酸激酶的溢出。

LDH是糖酵解过程的重要酶，在细胞的脂质代谢过程中发挥着重要作用。在热应激中，LDH明显降低 【6，7】。本试验也表明热应激后LDH有下降趋势，而添加甜菜碱和MHA组应激后无明显变化，说明添加甜菜碱和MHA后，肝细胞破坏小于蛋氨酸组。

ALP是一种非特异性水解酶，在细胞的脂质代谢过程中发挥重要的作用。热应激时碱性磷酸酶显著降低说明ALP活性降低，肌肉组织ATP的分解减少。各组应激后碱性磷酸酶水平都低于应激前，热应激对ALP的影响很大。

热应激可使AST显著升高。鸡心肌中AST活性最高，其次是肝脏和骨骼肌，急性热应激造成肉鸡血清AST升高，说明这些器官可能受损【8】 。唐玉新等【9】观察到热应激死亡鸡心肌细胞质内少量线粒体崩解。本试验中各组应激后均表现出先升高后下降的趋势。A1 组应激后76 h的水平明显高于应激前的水平，且差异显著，其他各组无显著差异。说明添加甜菜碱有助于缓解热应激对心肌细胞的损害。

ALT是氨基酸合成与分解代谢中很重要的酶，催化谷氨酸与丙氨酸之间的氨基转换。肝细胞富含谷丙转氨酶，当肝细胞损伤或细胞通透性增高时，该酶渗入血液，血中酶活显著升高，所以ALT的活性可反映肝细胞损伤的程度。热应激使组织细胞受到氧化损伤，膜的通透性增加，对肝脏造成了损伤，高温下ALT升高可说明肝脏受损伤的程度。本试验中各组应激后血清中谷丙转氨酶表现为先下降后上升，再下降的趋势。各组没有明显差异。

4 结论

热应激破坏了细胞膜的通透性，使得细胞内酶逸出而渗入血液，添加甜菜碱可有效改善细胞膜的通透性，有助于降低应激时肌酸激酶、谷草转氨酶的升高；添加甜菜碱和MHA组的乳酸脱氢酶下降减慢，对机体能量的利用效率优于蛋氨酸。在热应激下添加甜菜碱和MHA优于蛋氨酸。

参考文献：

[1] Dibner J J，Swick R A，Knight C D，et al．Metabolic differences between 2-hydroxy-4-(methylthio)butanoic acid(HMB，Alimet)and D，L-methionine(DLM)during heat

Stress[J]. Poult Sci，1992，71S：147．

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[8]刘健华，梁礼成，金久善等．高温对肉鸡血浆纤维连接蛋白及血清生化指标的影响[J]中国兽医学报，2000，2O(6)：591—593．

[9] 唐玉新，花象柏，王小琴等．热应激死亡鸡病理变化观察[J]．中国兽医学报，1995．14(4)：381—385．

benniusiliao

文章内容很好，给我们提供了又一抗热应激方法，期待更多的实用技术！！