大家都来说说粗蛋白偏差的影响因素

sunmy888

想必论坛里有不少检测高手，下面集思广益，希望大家能够想想导致粗蛋白测定结果偏高和偏低各有哪些原因及如何避免。收集起来，以便今后提高结果的准确度，同时也让新手们少走弯路。

阳光普照

注意水分的偏差，还有反应的是不是充分

joymark

很长时间没有自己检测粗蛋白了。还真需要认真学习下。

safeeye138

称样、消化、蒸馏、吸收、滴定。试剂的新鲜度。等等

游人学子

序号        实验项目        操作内容        注意事项
1        样品制备        选取有代表性的样品用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，置于密闭样品袋中，阴凉处保存，备用。       
2        样品称量        称取0.2～0.4g试样（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，无损失地放入凯氏烧瓶中，并记录对应编号消化管内样品的名称及质量        无损失操作要点：
1．        可将称量纸一同消化，但要增加一个称量纸的空白
2．        称量完之后将称量纸放回天平，看是否归零，如不归零，减去相应的质量。
3        消化准备        往消化管中加入6.4g混合催化剂，摇匀，再加入10-12ml浓硫酸。        混合催化剂一定要均匀
浓硫酸具有强腐蚀性，注意操作安全
4        消化        控制消化炉温度420℃，消化2-3h        1．        消化开始阶段可控温300度左右消化半小时，以防泡沫产生。
2．        消化时一定要加盖抽汽装置，以防酸雾溢出。
3．        样品消化完全时一定是蓝色透明液体，如有黑色残留，说明没有消化完全。
4．        消化完毕之后，先关闭消化炉，为避免酸雾溢出，待稍冷却之后再关闭水龙头。
5．        消化后的液体冷却时会析出晶体，属正常现象。
5        洗涤机器        用约50ml蒸馏水，在不加碱和硼酸、指示剂的情况下蒸馏，洗涤2-3次       
6        空白测定        称取约0.5g蔗糖，按照消化步骤进行消化,待冷却后,加入80ml蒸馏水，摇匀，将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有25ml硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶中，打开蒸汽开关，加入一定量的碱液，蒸馏至体积150ml左右，降下锥形瓶，使吸收管末端离开液面，继续蒸馏1min后停止蒸馏，用蒸馏水冲洗吸收管末端，洗液冲入锥形瓶。       
7        氨的蒸馏        将消化后的试样消煮液冷却，加约80ml蒸馏水，按照空白的蒸馏方式蒸馏。        控制合适加碱量。当加碱后出现黑色继续加5-10ml即可
8        滴定        将蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L标准盐酸滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。       
9        计算         
v2—试样滴定时所需酸标准溶液的体积（m1）；
v1—空白滴定时所需酸标准溶液的体积(m1)；
c—盐酸标准溶液的浓度(mol/L)；
m一试样的质量（g）；
F—氮与粗蛋白换算系数
0.0140—每ml HCl标准溶液相当于N的克数；        
10        测定步骤检验        精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按测定步骤文字中的各步骤操作，并按公式计算（但不乘系数6.25）。        测得硫酸铵含氮量应为21.19±0.2％，否则应检查加碱，蒸馏和滴定各步骤是否正确。
误差来源        控制方案
样品        抽样        取样要有代表性、真实性
        制备        样品要有一定数量
充分混匀，用四分法缩分
粉碎至能全部通过40目
试剂        试剂规格        按照标准要求选购一定规格的试剂，控制杂质量
        配制方法        区分精确配制和粗配制，按照GB/T601，GB/T602，GB/T603的要求配制和标定，不能想当然
        保存        按照试剂的保存要求（避光、塑料瓶、阴凉等条件限制）存放
注意试剂的保存期限
称样        称样量        称样量要适宜，一般根据该样品的含氮量和所适用的滴定管最大体积估算，保证滴定体积不低于滴定管量程的1/3，不超过其量程
消化        催化剂        混合催化剂的比例不能偏差太大
用量要控制，不宜太多，一般按照要求添加即可
        硫酸用量        一般控制在10-12ml，如蛋白含量高可适当增加用量，用量少可导致 消化不完全
        消化温度        控温420摄氏度，温度太低消化不完全，时间长；温度太高，硫酸损失太大
        消化时间        消化时间以2h左右为宜，可根据消化后的液体的颜色判断其消化程度，消化完全的样品液体呈透明蓝色，如有黑点则消化不完全
        排气量        当消化温度升到420以后，应适当控制水流速度不宜太大，否则硫酸损失太大，一般以不溢出酸雾为标准
蒸馏        加碱量        加碱量以控制管内液体颜色变黑为标准，太少则反应不完全
        硼酸        冷凝管末端要插入吸收液液面以下保证吸收完全
        蒸汽量        蒸汽量要控制合适，太小容易在开始的时候造成倒吸，量大容易造成吸收液体积太大
滴定        操作        严格按照标准滴定操作进行
系统        气密性        用AR硫酸铵蒸馏，根据测得的含氮量评估系统气密性

sunmy888

引用自游人学子 发表于 2009-9-1 15:44的内容
序号        实验项目        操作内容        注意事项
1        样品制备        选取有代表性的样品用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，置于密闭样品袋中，阴凉处保存，备用。        
2        样品称量        称取0.2～0.4g试样（含氮量5～80mg）准确至0.0002

5楼同事总结很全面，很到位，希望看到此贴的人能够多学习。谢谢。

徒儿

请教几个问题：
1.对于麦皮、米糠、鱼粉等不粉碎直接称量是否可行？
2.混合催化剂如何保证均匀？不粉碎直接按比例添加行不？
3.蒸馏时，加碱和加汽的先后是否影响结果？
4.为了保证滴定体积不低于滴定管量程的1/3，不超过其量程，测定高蛋白试样时，称量太少是否误差太大？（常量法）。
5.每做一个蛋白都要洗涤机器吗？

tj4587_78

为了减少误差,我们样品的称量一般为1-1.5克

知识就是力量

很系统,全面啊,学习中

徒儿

引用自tj4587_78 发表于 2009-9-5 11:18的内容
为了减少误差,我们样品的称量一般为1-1.5克

你们用的是半微量法吧，否则用0.1mol/l的盐酸标准滴定，应该超过滴定管的量程。