鱼粉中组胺快速测定方法（请帮我看看着个方法有什么问题么？）

口合口合 · 发表于 2009-8-24 19:26:02

鱼粉中组胺快速测定方法

1、
原理：
样品中的组胺用甲醇提取，再与对氨基苯磺酸和亚硝酸钠反应生在成黄色产物，其吸光度与样品中的组胺含量呈正比。
2、
仪器和试剂
仪器：分光光度计、超声提取仪、恒温水浴箱
试剂：⑴对氨基苯磺酸溶液（1.7G/L）
称取0.17G对氨基苯磺酸,用0.1MOL/LNAOH溶液溶解,定容至100ML.
⑵亚硝酸钠溶液(17G/L)
称取1.7亚硝酸钠,用水溶解,定容至100ML,用时与(1+30)HCL等量混合(移取前混合)
⑶组胺标准储备液(1MG/ML)冰箱内
准确称取0.2767G于100±5℃干燥2H的磷酸组胺，用水定容至100ML
⑷组胺标准使用液（0.02MG/ML）
准确吸取1.00ML组胺标准储备液于50ML棕色容量瓶中.用水定容.
3、样品处理
称取0.5g样品于25ml比色管中,加入20ml甲醇,在46℃水浴上加热30min,过滤,渣用甲醇洗涤两次,合并滤液,用甲醇定容至100ml,避光保存备用.
4、测定
（1）标准曲线：准确吸取组胺标准使用液空白0.0；0.1；0.25；0.5；1.0ML于10ML具塞比色管中，分别加入5.0ml对氨基苯磺酸溶液,1.0ml亚硝酸钠溶液,定容至刻度，摇匀，静置10min后在420nm下比色。
（2）试样测定：准确吸取测定样滤液1.0ml于10ml具塞比色管中，分别加入5.0ml对氨基苯磺酸溶液,1.0ml亚硝酸钠溶液,定容至刻度，摇匀，静置10min后在420nm下比色。
5、结果计算

X= M1*100/ M2
式中 :
X—试样中组胺的含量，单位为毫克每千克(mg/kg );
M1—由曲线查得的测定试样中组胺的质量，单位为微克(ug);
M2—试样质量，单位为克（g）。

口合口合 · 发表于 2009-8-24 19:38:00

本帖最后由口合口合于 2009-8-24 19:41 编辑

有以下几个疑问：
1、原理的反应方程式？（我有机化学不太好,嘿嘿）
2、1mg/ml的组胺标准储备液到底是组胺，还是磷酸组胺，还是一水磷酸组胺？（用的是国药集团的一水磷酸组胺盐来配制的）
3、组胺标准使用液定容后是橙红色，可测定试样定容后确实黄色（与测磷时一样的颜色），为什么？（难道橙红色就是很深很深的黄色？@@007:）
4、组胺标准使用液比色时，数值一直会降低，我们只取第一次读的数值。但测定试样比色时数值却一直都很稳定，这又是为什么？
5、国标是在480nm下比色，为什么这个方法是在420nm下比色呢？
6、有些测定样在水浴过滤后颜色很深，可是却比颜色浅的组胺低，为什么？（按原理来说水浴是使组胺溶解在甲醇里，照理不是组胺越高颜色越深么？）

口合口合于 2009-8-26 13:11 补充以下内容

为什么我的问题都没人回答呢，郁闷了！:wugu:

286910223 · 发表于 2009-12-10 08:04:59

这是一个显色反应，生成有色复合物，具体分子式我也不知道。
做储备液之前不是烘干过，已经是无水的磷酸组胺了，但称量的0.2767g是折算成组胺了的，所以说储备液是1mg/ml的组胺溶液。
红色墨水咋一看还像黑墨水呢……
第4个不知道，不过只要是每次做标曲与样品同时比色，应该可以避免这个问题。
那个波长要看显色无的吸光能力啊，在那个波长的吸光能力好，还跟浓度成正比就可以了。只要你做出来的标曲r值两三个九以上，吸光度还可以就ok啦
甲醇提取物肯定不只组胺一种，相识相容吧。应该跟鱼粉的加工工艺之类的关系也很大吧。

xuridongshengyx · 发表于 2009-12-26 16:03:14

超声提取仪这不没派上用场嘛

286910223 · 发表于 2010-1-3 11:58:10

鱼粉用甲醇提取的时候可以用超声提取仪啊，更加完全咯

sea0920 · 发表于 2010-1-3 15:10:08

感谢楼主分享

sea0920 于 2010-1-3 15:10 补充以下内容

有空做个试试看

csf123 · 发表于 2010-2-3 23:07:41

哪里来的方法哦，可做过方法可靠性评价吗？

mcs820208 · 发表于 2010-5-21 15:58:15

这个方法好像很不准确，在我们测定的过程中那个数字一直在不停的跳动，而且试样的颜色也发生变化，很不准确呢！

glory143 · 发表于 2010-5-22 09:55:28

组胺在甲醇中的溶解性怎么样??用纯甲醇提取?

鱼粉中组胺快速测定方法（请帮我看看着个方法有什么问题么？）

评分