日粮粗蛋白质水平对肉鸡内源氨基酸损失量的影响（转）

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作者:强 莉 姚军虎 吴孝兵 习海波 吕金印
★ 国家自然科学基金项目（39970550）资助。
    摘 要 利用一次注射法测定了日粮粗蛋白质分别为16%、18%及20%时肉鸡内源氨基酸损失量。结果表明，不同蛋白质水平下各种氨基酸内源损失量差异不显著（P>0.05），但适中的粗蛋白质水平（18%）有降低内源氨基酸损失量的趋势。
    关键词 内源氨基酸损失量蛋白质水平一次注射法肉鸡
    越来越多的研究表明，以真可消化氨基酸（TDAA）配制日粮的效果更接近于生长试验测定值（NRC，1994）。内源氨基酸损失量（Endogenous Amino Acid Loss，EAAL）是研究饲料AA真利用率的基础数据，准确测定EAAL是以真可消化AA配合日粮的前提。姚军虎等（1998）提出的静脉/皮下一次注射小剂量[3H]Leu检测EAAL的方法（简称为一次注射法）相对于传统的绝食法（FAS）、无氮日粮法（NFD）等更能反映实际生产情况，且可以弥补静脉连续灌注法难以选择真正的前体池，测定干扰因素多等不足。经多次试验证实（姚军虎等，1998，2000；孟德连等，2001），此法具有较强的可行性和可靠性。本试验拟采用一次注射法测定比较不同粗蛋白水平时肉鸡内源氨基酸损失量。
1 材料与方法
1.1 试验日粮
    设计3个蛋白质水平的日粮CP16、CP18及CP20，另设无氮日粮（NFD），4种试验日粮组成见表1。

1.2 试鸡及饲养
    20只体重接近（2.0kg）的艾维茵肉仔公鸡随机等分为4组，肛门外缝制空心塑料瓶盖以安装集粪袋。单笼喂养，自由采食相应的饲粮2d后绝食36h，按每千克体重25gDM标准(NFD20g)进行预强饲。再绝食48h，之后正式强饲相应饲粮。绝食期间试鸡自由饮水。
1.3 [3H]Leu的引入、采血与排泄物的收集及处理
    正式强饲后，立即给鸡皮下注射30?滋Ci/kg体重L-[4，5-3H]Leu（中科院原子能所，放射性化学纯度>95%）。于注射后第24h采集翅静脉血液2.0ml，注入经肝素钠抗凝处理的离心管内。全血经3 000r/min离心10min，分离血浆，弃沉淀，血浆按1∶1（V/V）比例加入10%三氯乙酸（TCA），离心10min，弃沉淀得到去蛋白血浆样品，低温（-20℃）密封保存。
    收集每只鸡正式强饲后48h内的全部排泄物（收集次数视实际排粪量而定）。加入3%（V/W）浓度为10%的H2SO4和适量甲醛（防止NH3挥发损失，终止微生物分解作用）。试验结束后置排泄物于65~70℃的恒温烘箱内干燥至恒重，密封保存。
用常规直接酸解法（6N HCl）于Beckman 121MB氨基酸自动分析仪测定各饲粮、排泄物样品及血浆样品的AA含量。用FJ-2101G双道液体闪烁计数器测定排泄物及血浆样品放射性强度。用半微量凯氏定氮法测饲粮及排泄物中的CP含量。
1.4 数据处理
    根据一次注射法基本原理(姚军虎，1998)有：

式中：Wei——饲喂试验饲粮i时排泄物中内源Leu (mg/kg DMI)；
    Wti——饲喂试验饲粮i时排泄物中总Leu(mg/kg DMI)；
    SRti——Wti的比放射性强度（即，排泄物总放射性强度与总Leu含量之比）；
    SRpi——饲喂试验饲粮i时血浆游离Leu比放射性强度（即，血浆放射性强度与Leu含量之比）；
    SRpo——饲喂NFD时血浆游离Leu比放射性强度；
    SReo——饲喂NFD时排泄物（内源）Leu比射性强度。
    公式中Wti、SRti、SRpi、SRpo、SReo均可由试验直接或间接测得，故Wei可求。众多试验证实，内源AA的组成相对稳定，故可由计算出的内源Leu损失量及内源AA模式（NFD模式）估算其它AA的内源损失量。
饲料氨基酸i表观及真利用率按下面公式计算：

    利用SPSS软件对所有数据进行统计分析。
2 试验结果
2.1 不同饲粮时AA总排泄量和内源损失量
    随日粮蛋白质含量的升高，除Tyr及NEAA外，粪便中各AA及总AA排泄量也增多（表2）。

    粪便中内源氨基酸损失量（表3）在各组间无显著差异（P>0.05）。CP16组与CP20组内源损失量较高且十分接近，CP18组的各内源AA损失量、必需氨基酸总量、非必需氨基酸总量及总内源氨基酸损失量均较其它两组有降低趋势。

2.2 不同饲粮时AA表观及真消化率
    绝大多数AA表观消化率在CP18时最高（表4），一次注射法校正所得AA真消化率除Met+Cys外均在可接受范围内，并且有随CP水平升高而降低的趋势（表5）。


3 讨论
    内源AA排泄受多种内外因素的影响。饲料蛋白质（或AA）含量及平衡性对EAAL的影响，据已有的研究结果证明并不一致。Butts等（1993）认为，蛋白质和肽均可刺激内源氮分泌。随饲粮CP水平增加，分泌进入肠腔的内源氮增加（Bergner等，1994；Krawuelitzki等，1994）。Krawuelitizki等(1977)的15N稀释法表明，大鼠粪中内源蛋白损失量（EPL）随日采食蛋白质数量的增加而增加。姚军虎（1998）以肉仔鸡为试验动物，比较了蛋白质梯度回归法（CPO）、NFD法（CP0.80%）、平均值法（CP3.37%）和一次注射法（CP20.0%）测得的内源CP、AA损失量，发现内源总CP和总AA损失量随日粮CP水平升高而增加，除His、Ala、Met、Leu外,其他AA内源损失量也有相似变化。饲料蛋白质增加内源氮排泄的可能原因是，刺激内源氮分泌量或减少内源物的消化与重吸收（Nyachoti等，1997）。但也有饲料蛋白质不影响内源蛋白或AA损失量的报道。Fan等（1995）按CP区间进行分段回归，表明日粮蛋白质、粗纤维及ANFs含量不变时，日粮CP水平不影响EAAL。他综合分析后认为，随CP摄入量的增加，内源氮分泌量及小肠重吸收量都增加，因此EAAL未必随着AA摄入量的增加而升高。姚军虎（1998）试验证明，一定范围内（CP≤5%），CP水平对EAAL的影响不大，说明家禽有一相对稳定的基本内源AA损失量。Boisen等(1996)认为，饲料中非蛋白质组分是EPL的主要影响因素，日粮CP与回肠EPL间似乎没有直接关系。
在本试验研究的3个蛋白质水平上，内源氨基酸损失量（表3）无显著差异（P>0.05）。但CP18组EAAL在数值上低于CP16和CP20组，产生这种趋势的原因可能在于3种日粮AA的平衡性上。本试验日粮在设计时几种主要的必需氨基酸（EAA）含量一致，其蛋白质水平的差异实质就在于3种日粮非必需氨基酸（NEAA）含量之不同，从而造成NEAA相对不足或过剩。王永军等（1997）认为，所谓的理想蛋白质应包含两个方面的内容：①是各种EAA之间具有最佳平衡的比例关系；②是EAA与NEAA或供给合成NEAA的氮源或氨基之间具有最佳平衡的比例关系。此时，各种EAA及合成NEAA的氮源对猪禽具有相同的限制性，故日粮蛋白质的转化效率最佳。在低蛋白质水平下，虽然EAA供应充足，但机体蛋白质合成量最大时所需的NEAA却不足，进而影响肉鸡生长（Hurwitz 等，1998）。用高蛋白质水平日粮饲喂肉鸡，虽然满足了所有氨基酸的需要量，但引起氨基酸的不平衡，一样导致氨基酸利用率降低，生产性能下降（Morris 等，1999）。本试验中CP18日粮是接近实际生产水平的日粮（粗蛋白18.0%，适中），其EAA与NEAA之比例接近肉鸡实际生长需要，更符合理想蛋白质模式；CP16和CP20组或因NEAA 不足或因NEAA过量均造成机体蛋白质代谢效率下降，从而使EAAL有升高趋势。粗蛋白在更大范围内变动时对EAAL的影响有待进一步研究。
4 结论
    日粮粗蛋白质在16.0%~20.0%之间变动时，对肉鸡内源氨基酸损失量无显著影响。但适中的粗蛋白水平（18.0%）有降低内源氨基酸损失量的趋势。

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日粮粗蛋白质在16.0%~20.0%之间变动时，对肉鸡内源氨基酸损失量无显著影响。不知是在什么季节做的试验?温度(热应激)有没有影响?

韩友文

“众多试验证实，内源AA的组成相对稳定，故可由计算出的内源Leu损失量及内源AA模式（NFD模式）估算其它AA的内源损失量。”

由一种放射性Leu，推算总体内源AA，内源AA的组成模式非常重要！

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