3种消毒药对链球菌病的杀灭效果试验

兽药指南 · 发表于 2009-5-11 17:08:29

猪链球菌病是由多种溶血性链球菌引起的猪的一种多型性疫病，本病在我国各地都有发生，目前也成为规模化养猪场最常见的疾病之一。
   针对当前养殖业现状，本文就消毒切断传染病传播途径方面，进行了3种消毒药对链球菌杀灭效力的实验，一方面是为了向广大兽医工作者推荐一种高效快捷的消毒药，另一方面，希望能对链球菌病的防治工作起到一定的作用。
一、材料和方法
   （一）材料
   消毒药碘酸、聚维酮碘、消毒威，其中碘酸、聚维酮碘为液体消毒剂，前者为深棕色液体、后者为红棕色液体，主要成分为碘；消毒威为白色粉末、主要成分为二氯异氰酸钠粉。
   菌株  猪链球菌C55138
   培养基 TSA-胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂，TSB-胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤
   中和剂 1%吐温-80磷酸盐缓冲液（PBS）；1.5%吐温-80磷酸盐缓冲液（PBS）；3%吐温-80磷酸盐缓冲液（PBS）在800毫升蒸馏水中溶解8克NaCl、0.2克KCl、1.44克Na2HPO4,和0.24克Na2HPO4，用HCl调节溶液PH值至7.4加水定容至1升，在151bf/in2(1034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分钟，保存于室温。
   （二）方法
   PBS配制方法：在800毫升蒸馏水中溶解8克NaCl、0.2克KCl、1.44克Na2HPO4和0.24克Na2HPO4，用HCl调节溶液PH值至7.4，加水定容至1升，在151bf/in2(1034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分钟，保存于室温。
   中和剂筛选试验  试验菌为猪链球菌，参考常用消毒药中和剂的选择，用不同浓度的PBS作为中和剂，观察其对3种消毒药杀菌效果的中和作用。
   定性杀菌试验  3种消毒剂对链球菌的杀灭效果试验具体操作如下：
      将菌液进行细菌计数，然后加入0.03M磷酸盐缓冲液稀释，倍比稀释9管，第10管不加消毒药作为对照组；
   将中号试管10支排列于试管架上，写好标签；
   每管加无菌蒸馏水5毫升，放20℃水浴中；
   用蒸馏水对消毒剂进行递进稀释，倍比稀释9管，第10管不加消毒药作为对照。
   以每半分钟加一管的速度加菌液5毫升于每管内，混合。
   加菌液后5、10、15、30、60分钟时，每管各取0.5毫升加入4.5毫升液体培养基内。
   将接种细菌的培养基管置37℃培养24小时，如发生浑浊即表示有细菌生长。然后将其移植到固体培养基上，观察菌落形态，或进行涂片染色镜检，以判断生长的是否是实验菌，以排除污染。若肉汤不浑浊，继续培养7天，依然不浑浊方可判为无菌生长。
   有机物影响试验  试验菌株为链球菌菌株，有机物为小牛血清，设置不含小牛血清、含25%小牛血清以及含50%小牛血清组，做载体定量杀菌试验。具体操作如下：
   将菌液进行细菌计数，然后加入0.03M磷酸盐缓冲液稀释，使试管菌液浓度含量为106~107个/毫升；
   吸取0.5毫升消毒剂溶液于4.5毫升测试浓度消毒剂溶液内；
   置20℃水浴中作用5分钟；
   立即吸取上述菌液混合液1.0毫升，加入9.0毫升中和液混匀，中和10分钟后进行细菌计数。
二、结果
   中和剂试验结果  在对消毒威实验中，用含2%吐温-80磷酸盐缓冲液（PBS）作为中和剂能完全中和所加消毒剂试验浓度的杀菌作用；在对聚维酮碘的实验中，用含2%吐温-80磷酸盐缓冲液（PBS）作为中和剂能完全中和所加消毒剂试验浓度的杀菌作用；在对碘酸的实验中，用含2%吐温-80磷酸盐缓冲液（PBS）作为中和剂能完全中和所加消毒剂试验浓度的杀菌作用。
   定性试验结果  定性分析试验中，以50倍递进稀释消毒剂，做定性实验。聚维酮碘、碘酸在50倍下未出现沉淀，故改变方案，在200倍下进行，得到如下结果：
表1聚维酮碘对链球菌的定性试验
   消毒威实验中，于第8管发现混浊，故其对链球菌的最低有效杀菌浓度（MIC）为1/6400；
   聚维酮碘实验中，于第7管发生浑浊，故其对链球菌的最低有效杀菌浓度（MIC）为1/12800；
   碘酸实验中，于第8管发生浑浊，故其对链球菌的最低有效杀菌浓度（MIC）为1/25600。
   有机物影响试验见下表2：在不同的组别中加入相同的消毒液和菌株，分别在3、5、10、15分钟以后观察对细菌的杀灭效果，结果见下表：
表2有机物对聚维酮碘的杀灭效果影响
   备注：小牛血清对碘酸、消毒威的杀菌效果影响与上述实验结果相似，故在此不另行列表。
   试验结果表明，以上3种消毒药对含25%、50%的小牛血清的链球菌作用5分钟，杀灭率分别为99.94%、99.87%、而不加血清的链球菌杀灭率为99.98%。含50%的小牛血清对杀菌效果有轻度影响；含25%的小牛血清对杀菌效果无影响。
三、讨论
   1.聚维酮碘、碘酸主要成分碘是活性很强的元素，有较强的渗透性能，可直接卤化菌体蛋白质，产生沉淀，使微生物死亡，本品主要针对病毒、病菌的结构特征，使其蛋白质变性而灭活；消毒威主要成分氯遇水可产生次氯酸，而次氯酸不稳定分解释放出活性氯和原态氧，呈现杀菌作用。
   2.消毒威、聚维酮碘、碘酸三种消毒剂分别在稀释1/6400、1/12800、1/25600倍数下作用10分钟，对链球菌的消毒效力与杀灭效力均已达到《技术规范》所规定的要求，从应用消毒的角度来看，经本次测试，这三种消毒药对链球菌病有较好的防治效果。
   3.试验证明，链球菌对本次试验所用的消毒剂比较敏感，在稀释倍数相当高的情况下，这三种消毒剂都对链球菌有良好的杀灭抑制作用，且安全稳定、作用时间长，受有机物、PH值影响较小，无腐蚀、无刺激性，对人和动物伤害低于一般水平，为稳定、高效的消毒剂。适用于常规以及扑疫期间的消毒，适当控制用量可以做到有效的杀灭病毒、病菌，同时又能节约成本。
   4.消毒的效果好坏很大程度上取决于消毒药的好坏，而现在存于市面上的消毒药良莠不齐，多数消毒药对细菌、病毒的杀灭效果不理想，一定程度上造成了传染病的流行暴发。