玉米蛋白粉叶黄素检测方法（简洁版）

银潴

:oye: 好的顶一下喔


试剂：
①     提取剂：正已烷—丙酮—无水乙醇—甲苯（10+7+6+7）
②     40%氢氧化钾甲醇液：40g氢氧化钾溶于甲醇中，冷却后用甲醇定容至100ml
③     10%硫酸钠溶液：10g无水硫酸钠溶于100ml蒸馏水。
④     标准溶液的制备：
以苏丹Ⅰ{即1—（苯偶氮）—2—萘酚}作为标准
⒈贮备液（1.0毫摩尔mM）：苏丹Ⅰ用热无水乙醇重结晶标准品，在70℃真空干燥箱中干燥结晶至恒重。称0.1241g的结晶体溶于500ml丙酮—异丙醇（1+1）中。）可放置1个月时间）
⒉工作液（0.04毫摩尔mM）：2ml贮备液以丙酮—异丙醇（1+1）稀释至50ml棕色容量瓶中，暗处保存（一般使用2-3天，以后并须重新配置）
⒊重结晶步骤：将1g重的苏丹Ⅰ放入250ml烧杯，加40ml无水乙醇，并在水浴中加热至75℃，不断搅拌。应在烧杯口放入表面皿以防止过多蒸发，当所有固体接近完全溶解时（有时会有一点不容的杂志）应用真空过滤除去杂质。热得滤出液应在室温慢慢冷却。此时不要搅拌滤除液，因为这将产生小结晶。一待结晶产生后，再次进行过滤。结晶体尽量多，最后用小铲转移至干燥玻片上，并至于在70℃真空干燥箱，结晶完全干燥后贮藏于干燥器中。

步骤：
取样粉碎至40目
1、取1.5g~2g玉米蛋白粉于100ml棕色容量瓶中，加1ml蒸馏水，加30ml提取剂，塞盖子旋摇1min（不可用力过大，防止样品粘在内壁不能浸提。
2、冷皂化—让混合物置暗处16h（过夜），加2ml40%氢氧化钾甲醇液，旋摇1min，再暗置1h，然后加30ml正已烷，旋摇1min，以10%硫酸钠溶液定容，震荡2min，暗置1h。
3、取上清液5ml-10ml于25ml容量瓶中，用正已烷定容（控制该溶液吸光度在0.25-0.75之间），以正已烷为空白对照，立即在474nm处测吸光值。

迅速测定溶液的吸光度值以减少异物和自动氧化带来的损失。首先以标准工作液在469-479间以1nm间隔测量，以丙醇+异丙醇1：1为空白对照，检查校正分光光度计。若最大吸收不是474，则重校仪器。当仪器在474nm下有最大吸光度时，工作液读书应为0.561（474）和0.460（436）。若仪器有偏差，应需要校正计算值。
计算：
                        样品吸光度*1000*0.561/苏丹Ⅰ工作液实际吸光度
总叶黄素（mg/kg）=
                                     样重*5[或10ml（含量低）]
                                                     236*1*                          50*25
                  
即：

总叶黄素（mg/kg）=50*25*样品吸光度*1000*0.561/苏丹Ⅰ工作液实际吸光度

                                                 236*1*样重*5[或10ml(含量低)]


式中：
25——最终稀释体积的毫升数，mL(25mL)
1——为以厘米的光程（即比色皿的光径）
0.561——为标准工作液在20°C标准溶液的吸光值
50——上层清液体积，mL
236——总叶黄素在正已烷溶液中的吸光系数