不同pH条件下植酸酶的酶活

JH_C

请问有哪位同仁做过或知道：同一来源（黑曲霉或大肠杆菌）的植酸酶在PH5.0与PH5.5所测得的酶活力差异有多大？

JH_C

各位做的标准空白和样品空白的吸光值一般是多少?一般在什么范围内为正常？

柳粒橙

不是很清楚，期待高手。

baici0000

没侧过，关注中...

tgz5637

这问题问得有语病！应该是在不同的缓冲盐体系里，在pH5.0及pH5.5 条件下，的酶促活性差异多少？  差异大小根据pH--酶活性曲线而异。
   有兴趣的话，可以配不同的缓冲盐及模拟胃酸环境条件，测最适pH的差异, 应该是不同。
   概念纠正：许多宣传其植酸酶在PH2.5和5.5有两个峰值。（在分离提纯纯酶的条件下测得的结果，与离体状态下的产成品性状不同。）  并没有明确说明是什么条件下测得的数据！受缓冲盐离子类型和浓度影响，在不同的缓冲盐体系下，最适pH点不同（发生左偏移或右偏移），测定值不同。故此最适pH只是酶的非特征性常数。在柠檬酸盐缓冲盐pH5.5条件下测定值低于乙酸盐缓冲盐pH5.5条件下测定值，也是这种因素影响造成。到了动物胃肠道，又是有不同的最适点，所以不要太看重某pH点的大小，要结合 pH-稳定性和pH--活性 两条曲线看。
   按我检测的产品成品，有的是确有两个峰值，但有的已有所偏离2.5点、5.5，有的根本就只有一个峰值，宣传资料里却胡吹,估计那个编资料的瞎掰的，也是个姓南郭的。
  一些植酸酶有两个pH峰值，应该是有两种类型催化结构域。测过的几个酸性pH峰值都低于PH5.5（弱酸）峰值。

[ 本帖最后由 tgz5637 于 2008-7-23 15:13 编辑 ]

cswjs

PH5.0标准下测的酶活如为5000，用PH5.5标准下测则在4000-4200这个范围，所以市场上的同样为5000酶活的植酸酶，各个厂家检测标准不一样，质量也不一样，价格也不一样。
      国际标准应该是PH5.5 。
      呵呵，一家之言仅供参考！

[ 本帖最后由 cswjs 于 2008-7-23 16:26 编辑 ]

飞鸽

这个东西的酶活测定玄的很，以前我们送4个样国外去检测，我们国内某牛B植酸酶居然测出来没有酶活，后来几经查找，才发现检测方法不一样。本人一直觉得这个酶最玄，呵呵，有江苏一公司用了植酸梅以后，不加氢钙，长势良好。

JH_C

tgz老师，请再指点一下：
1、一般样品空白的吸光值多少为正常，一些行内同仁告知大于0.15则不可取，而我我做的往往有0.19以上，是否试剂或配制有问题，另外，有时我做的样品空白的OD比标准空白的还小，正常吗？
2、用醋酸调节PH的缓冲体系是否比用盐酸的更好，不知是否有差异。
3、在反应过程中，如果取半量进行，缓冲液0.9ml+反应液0.1ml+底物2ml+终止液2ml，理论上应该可行，但实际不知有否影响？
4、测得的吸光值在什么范围为可取?

老板告我再做不好植酸酶的检测，得让我擦地板去了，呜呜呜

tgz5637

第一个问题我不懂。
第二个问题，复习下化学，盐酸氢氧化钠强酸强碱没有缓冲力。而缓冲液浓度不同，缓冲能力不同，增加缓冲浓度，影响检测。
第三个问题，减量检测，时间也减半。还要验证线性灵敏度，没必要节外生枝。做检查耗费时间的是试剂准备阶段。
第四个问题，按分光光度计理论，在0.1～1范围都是有效。