免疫增强剂在鸡疫病防制中的应用

Icandoit · 发表于 2008-2-25 20:25:50

免疫增强剂是先于抗原或与抗原同时应用，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，能增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质。现已证明，具有免疫增强作用的物质不下几十种，常用的有左旋咪唑、西咪替丁、甲硝唑、蜂胶、福氏佐剂、油佐剂、维生素Ｅ、转移因子和干扰素、白细胞介素等［ 1-2 ］。陈如明等［ 3 ］研究报道，党参多糖、柴胡多糖、黄芪多糖、香菇多糖、当归多糖、玉米花粉多糖、银耳多糖等植物性多糖及黄芪、灵芝、麦饭石、甘草、白术、人参、党参、茯苓等中药对免疫系统也有刺激作用，可以提高免疫系统组织细胞的活性，增加机体免疫细胞的生长及抗体的合成，从而提高机体的抗病力，维持机体内环境平衡，具有明显的免疫增强作用。 1 化学类药物 1.1 左旋咪唑左旋咪唑是第 1 个被发现具有免疫调节作用的人工合成化合物，具有广泛的免疫调节活性，促进细胞免疫和体液免疫。左旋咪唑能增强正常鸡体液免疫应答反应，使鸡抗胸腺依赖性抗原抗体滴度，抗非胸腺依赖性抗原抗体滴度均明显升高。 (1) 左旋咪唑对鸡新城疫疫苗的免疫增强作用。乔彦良等［ 4 ］研究结果显示高母源抗体雏鸡首次免疫鸡新城疫（ Newcastle disease,ND ）活疫苗前或疫苗免疫后配合应用 10 mg/kg 体重左旋咪唑对前期血清抗鸡新城疫病毒 (Newcastle disease virus,NDV) 抗体滴度无明显影响，但能延长抗体高峰水平维持时间。 ND 疫苗二次免疫前应用 10 mg/kg 体重左旋咪唑，血清内抗 NDV 特异性抗体明显升高。（ 2 ）左旋咪唑对马立克氏病疫苗的免疫增强作用。乔彦良等［ 5 ］报道疫苗免疫同时应用左旋咪唑明显促进马立克氏病疫苗接种鸡细胞免疫和体液免疫功能，用药后外周血 T 淋巴细胞转化明显增强，血清内抗 MDV 特异性抗体明显升高。（ 3 ）左旋咪唑对鸡传染性法氏囊病疫苗的免疫增强作用。韩雪清等［ 6 ］报告雏鸡免疫前应用左旋咪唑 (3.8,0.38,0.038 mg/kg) ， 7 d ～ 14 d 后即表现出免疫增强作用，单用鸡传染性法氏囊病 (Infectious bursal disease,IBD) 及 IBD+ND 疫苗联合免疫时可使抗 ND 、 IBD 抗体水平明显升高，且左旋咪唑具有颉颃 IBD 弱毒疫苗对 ND 疫苗免疫的干扰作用。乔彦良等［ 7 ］报告左旋咪唑处理 IBD 鸡，可促进其增重，恢复脾及法氏囊免疫活性细胞，用于正常鸡也可增高法氏囊重量指数 (B ∶ B) 及脾重量。

Icandoit · 发表于 2008-2-25 21:12:58

1.2 西咪替丁为高效选择性H2受体颉颃剂，在人医临床广泛用于抑制胃酸分泌，促进胃肠道溃疡康复。H2受体不仅仅局限分布于胃肠道，也广泛分布于淋巴细胞表面。因此，人们对西咪替丁调节组织胺的免疫抑制作用及其对免疫应答的其他作用进行了研究，证明西咪替丁具有促进机体免疫功能的广泛作用。研究中发现西咪替丁明显促进鸡体液免疫和细胞免疫功能。在细胞免疫中，特异性抗原可刺激淋巴细胞释放巨噬细胞移动抑制因子（macrophage inhibiting factor MIF），使巨噬细胞功能活化，并抑制其游走运动，组织胺能抑制致敏淋巴细胞生成MIF，西咪替丁能拮抗组织胺对MIF生成的抑制作用。研究中首次观察了西咪替丁对正常鸡细胞免疫的影响，发现西咪替丁明显促进正常鸡体内T淋巴细胞增殖，使CD4+细胞百分比升高，CD8+细胞百分比下降，CD4+/CD8+细胞比值升高，使鸡外周血淋巴细胞IL-2活性明显升高，表明西咪替丁明显促进鸡细胞免疫功能。在体液免疫中，西咪替丁促进小鼠抗SRBC抗体产生；可使破伤风毒素免疫小鼠体内破伤风抗毒素滴度明显增加；可使免疫原性较弱的抗原诱导的抗体滴度明显升高。研究结果表明，西咪替丁均明显促进机体抗胸腺依赖性和非胸腺依赖性抗原抗体的产生，增强机体体液免疫功能。（1）西咪替丁对鸡新城疫疫苗的免疫增强作用。免疫ND活疫苗前配合应用西咪替丁可明显颉颃母源抗体对疫苗免疫的影响，使机体维持较高抗体水平；疫苗免疫后配合应用西咪替丁可明显加速抗体高峰水平的到来，并使抗体高峰水平维持时间延长。疫苗二次免疫前应用西咪替丁明显促进ND疫苗接种鸡体液免疫功能，用药后血清内抗NDV特异性抗体明显升高［4］。（2）西咪替丁对马立克氏病疫苗的免疫增强作用。研究结果显示疫苗免疫同时应用10 mg/kg～100 mg/kg体重西咪替丁明显促进马立克氏病疫苗接种鸡细胞免疫和体液免疫功能，用药后外周血T淋巴细胞转化明显增强，血清内抗HVT特异性抗体明显升高［5］。 1.3 甲硝唑为临床上常用的抗微生物和抗寄生虫药物，研究发现其也具有免疫调节活性，乔彦良等［8］研究结果显示高母源抗体雏鸡首次免疫鸡ND活疫苗免疫前配合应用10 mg/kg～100 mg/kg体重甲硝唑可明显颉颃母源抗体对疫苗免疫的影响，使血清抗NDV抗体滴度维持较高水平。疫苗免疫后配合用甲硝唑可明显加速抗体高峰水平的到来，并使抗体高峰水平维持时间延长。鸡ND疫苗二次免疫前应用10 mg/kg～100 mg/kg体重的甲硝唑可明显促进鸡ND疫苗接种鸡体液免疫功能，用药后血清内抗NDV特异性抗体明显高于未用药对照鸡。

Icandoit · 发表于 2008-2-25 21:14:39

2 多糖、糖苷及复方中药黄芪多糖（ astragalus poly saccharide ， APS ）能显著促进鸡脾和腔上囊的发育，这与目前许多有关 APS 对免疫器官发育影响的研究结果相一致（李先荣， 1989 等；花象柏等， 1993 ）。研究表明， APS 不但可以促进机体正常免疫器官的发育和免疫活性细胞的生成，提高免疫活性，而且能抗免疫抑制剂对免疫器官的损害或修复受损的免疫器官，使免疫器官的组织结构恢复正常水平，维持机体的正常免疫机能。研究表明， APS 分别与鸡 ND Ⅰ系苗、 ND Ⅳ系苗、 ND 油乳剂苗和 IBD 冻干苗以肌肉注射、皮下注射、点眼、滴鼻不同方式配合使用，均可使鸡血清 ND 和 IBD 抗体效价在相同日龄、不同日龄、不同 APS 用量 3 种情况下显著高于未使用 APS 组，显示了明显的免疫增强作用。国内近 20 年来对近百种中草药来源的多糖进行了化学和活性研究。许多试验证实 APS 具有免疫调节作用，可显著促进正常机体的抗体生成细胞数，提高血清 IgG 水平黄会岭等 [9] 。试验表明，在鸡疫苗免疫中，将 APS 直接用作免疫佐剂或制成一定浓度的溶液作为疫苗的稀释液，可以提高机体免疫力和疫苗保护率。而降低鸡马立克氏病的发病率和死亡率。郝艳红等 [10] 试验表明， 1 日龄雏鸡用马立克氏病毒（ Marek ′ s disease virul ， MDV ）强毒 vMDV 人工感染并注射 APS 后，可使 MD 的发病率和死亡率下降，对照组分别为 42% 和 34% ，而 APS 组为 40% 和 13% ，显著增强中枢、外周淋巴器官和主要实质器官的含硒谷胱甘肽过氧化物酶活性，明显降低各器官组织中 LPO 的含量。刘永杰等 [11] 报道， 1 日龄 AA 肉用雏鸡以 MD 强毒 vMDV 人工感染后， MD 发病率为 33.75% ，死亡率 11.25%; 而 vMDV 感染注射 APS 组鸡的发病率为 17.5% ，死亡率为 5% ，且 IL-2 诱生活性和 T 淋巴细胞增殖反应显著升高。刘红丽等 [12] 报道， APS 通过增强机体抵抗力，调节自由基反应系统两方面作用防止肿瘤发生，抑制 MDV 造成的损害。并且 APS 无毒无害，将之应用于 MD 的防治会起到明显效果。黄芪多糖和卡介苗（ bacille calmette guerin ， BCG ）能增强鸡球虫免疫保护力。在鸡球虫保护性免疫机制中，居于主导地位的是细胞免疫。细胞免疫应答主要是通过依赖胸腺的Ｔ淋巴细胞实现的。 BCG 和 APS 处理球虫免疫鸡后一周即可显示其免疫增强作用，显著提高 E 玫瑰花环形成率和 T 淋巴细胞转化水平，并维持在高水平上。这表明 BCG 和 APS 均具有显著的免疫促进作用，能加速机体细胞免疫功能的发育完善，从而改善雏鸡免疫应答能力较低的状况，提高球虫免疫的效果。沈志强等［ 13 ］研究报道球虫免疫鸡经 BCG 或 APS 处理后，在鸡体内完成生活史循环的球虫数量减少，克粪便卵囊数降低，攻虫后抗球虫指数明显提高。人参、黄芪、党参、白术等中草药配制成的中药免疫增强剂，在临床上取得了较好的增强免疫效果。现代方法研究证实，其增强免疫作用的机制与神经系统、垂体肾上腺皮质系统的功能有关（花象柏等， 1993 ）。人参皂甙对小鼠、大鼠及豚鼠等多种动物单核巨噬细胞系统吞噬功能均有明显的激活作用；黄芪既能促进淋巴细胞的转化，又能增强单核巨噬细胞系统的功能（邓文龙等， 1983 ），使Ｅ玫瑰花环形成细胞数增加，并能诱生干扰素，延长某些原代细胞培养和二倍体细胞存活的能力。中药免疫增强剂不但可促进外周血液 ANAE+T 淋巴细胞总数的增值，而且能明显提高辅助型 T 淋巴细胞的数量，较好地增强火鸡疱疹病毒苗 (HVT) 对鸡马立克氏病的免疫效果。免疫增强剂的应用不但可促进Ｔ淋巴细胞的增殖，而且可提高辅助型 T 淋巴细胞的比例，从而较好地改善 MD 的免疫效果。 鸡传染性喉气管炎（ Infectious laryngotracheitis ， ILT ）疫苗免疫会引起鸡红细胞免疫功能的短暂性降低。 Siegel 在 1981 年提出了红细胞免疫系统假说理论，认为红细胞表面有许多与免疫有关的的物质，如 CR1 、 CR3 、 CD58 、 CD59 等，红细胞有识别、黏附、杀伤抗原、清除免疫复合物 (circulating immune complexes) 的功能，参与机体免疫调控，递呈抗原，促进白细胞的免疫功能，并有完整的自我调控系统，红细胞是机体免疫系统的重要组成部分。现代红细胞免疫理论认为，在许多疾病的发病机理中，红细胞免疫缺陷和免疫功能低下占有很重要的地位。健康鸡经传染性喉气管炎疫苗免疫后， RBC-CR1 花环率和 RBC-IC 花环率明显降低，说明 ILT 疫苗免疫会引起机体红细胞免疫功能短暂性下降。中药免疫增强剂能够提高 RBC-CRl 花环率和 RBC-IC 花环率 , 并可激发机体在免疫后很快产生较高浓度的抗体。李繁等［ 14 ］试验证明，中药免疫增强剂与 ILT 疫苗同时应用，能够消除 ILT 疫苗免疫引起红细胞免疫功能降低的过程 , 提高疫苗的免疫效果。 3 花粉大量试验证明，花粉对促进免疫器官发育、增强免疫细胞活性、提高机体免疫功能有很好的效果（李存德等， 1987 ）。据王维义等（ 1987 ）报道，油菜蜂花粉能明显增强大鼠、小鼠、豚鼠对绵羊红细胞的免疫应答反应，提高机体的抗体水平。以油菜素内酯为主要成份的油菜蜂花粉提取液制剂——“ 906 ”免疫增强剂具有明显的增强巨噬细胞功能的作用（贺澄日等， 1994 ）。贺澄日等 [15] 研究证明，“ 906 ”免疫增强剂能显著提高鸡新城疫 I 系苗免疫后的抗体水平，且在 30 d 内维持与油乳剂新城疫疫苗相近的免疫效果。目前新城疫油乳剂疫苗的价格是Ⅰ系苗的 30 倍。若能将价格低廉、具有明显提高 I 系苗 HI 抗体效价的“ 906 ”免疫增强剂做为佐剂，与Ⅰ系苗配合研制具有免疫效果好、作用时间长的新型疫苗，应用于鸡新城疫的防治，则可大大降低防疫费用，提高经济效益。 4 蜂胶蜂胶的药理作用主要有杀菌抗病毒、抗炎症、镇痛、抑制过氧化物生成等作用，并能激活机体免疫防卫系统，促进抗体产生，增强巨噬细胞的吞噬能力，增加抗体再生功能，提高机体特异性和非特异性免疫力等。电镜观察可知，鸡减蛋综合征蜂胶灭活疫苗的超微结构主要为蜂胶颗粒吸附病毒粒子并相互交联成类免疫刺激复合物结构，具有抗原“仓库”作用和免疫刺激复合物作用。同时蜂胶颗粒与病毒粒子仍保持各自完整的形态结构，有利于被机体吸收后而发挥各自的功效和协同作用，这可能是该疫苗具有较长免疫期与保存期的主要原因。疫苗中有少量的裸露游离的病毒粒子和蜂胶颗粒，接种机体后均可迅速刺激机体产生免疫应答反应，这是该疫苗产生坚强免疫力时间早的主要原因。据资料报道，鸡体内 EDS  76HI 抗体价在 6 log2 以上即可抵抗 EDS  76 病毒的感染。试验用天然物质蜂胶代替传统的化学物质为免疫增强剂制备的 EDS  76 蜂胶苗，免疫后 7 d 的 EDS  76HI 抗体价达 7 log2 ～ 10 log2 。因此，该苗 7 d 产生坚强免疫力，较传统油苗提前 7 d ～ 8 d 。免疫后 14 d 可达 12 log2 ；免疫后 6 个月仍为 8.7 log2 ～ 9.8 log2 ；免疫后 10 个月～ 12 个月仍维持在 6.5 log2 ～ 8.0 log2 ，表明该苗免疫期可达 1 年。免疫攻毒试验进一步证实了上述结果。而免疫后 14 d ，进口油苗 HI 抗体价为 6.5 log2 ～ 8.0 log2 ；国产油苗为 8 log2 ～ 10 log2 ；免疫后 6 个月进口油苗为 5.7 log2 ～ 6.2 log2 ；国产油苗为 6.5 log2 ～ 7.0 log2 ；免疫后 10 个月～ 12 个月，进口油苗为 3.2 log2 ～ 4.5 log2 ；国产油苗为 5.0 log2 ～ 5.5 log2 。上述比较试验结果表明， EDS-76 蜂胶苗的效果显著优于进口和国产油苗，区域推广试验表明，并替代进口，完全可以替代传统的油苗，同时具有保存与使用更加方便的优点，具有广阔的推广应用前景［ 10 ］。 5 细胞因子 5.1 IL-2 IL-2 是一种糖蛋白，由活性辅助 T 细胞分泌，能提高细胞毒性防御，诱导干扰素产生，激活 B 淋巴细胞。 IL-2 在特异性免疫应答中起主要作用，诱导细胞因子产生，克隆增殖活化的 T 淋巴细胞伴随抗原刺激后产生免疫记忆，同时诱导相应 B 淋巴细胞的克隆增殖和产生抗体的浆细胞和记忆细胞分化 [16] 。李宏梅等 [17] 将重组鸡 IL-2 与传染性法氏囊病灭活苗联合应用，每只鸡肌肉注射重组 IL-2 0.4 mL ，同时肌肉注射 IBD 灭活苗 0.5 mL ，加入重组鸡白细胞介素 2(IL-2) 后免疫效果进一步增强，抗感染效果达 100% ，其病变发生减少率达到 20% 。孙圣兰等［ 18 ］研究表明，鸡的 IL-2 能增强鸡传染性法氏囊病毒 (Infectious bursa disease virus,IBDV) 多聚蛋白 DNA 疫苗的免疫原性。这主要表现在：①鸡 IL-2 提高了 IBDV DNA 疫苗诱导的 T 淋巴细胞增殖反应的强度；②鸡 IL-2 增强了 IBDV DNA 疫苗诱导的 B 淋巴细胞增殖反应的强度；③鸡 IL-2 增强了 IBDV DNA 疫苗对强毒的免疫保护，缓减了 IBDV 的症状，其根本原因是鸡 IL-2 增强了体液免疫和细胞免疫功能，当然也并不排除鸡 IL-2 对 IBDV 的感染具有免疫治疗作用的可能性。鸡的 IL-2 研究不但在研究鸡免疫系统的发生及免疫调节机理中具有重要作用，而且在人类和哺乳动物的比较免疫学、生物发育和进化的研究中具有重要意义。因此，国内外学者对鸡的 IL-2 进行了不懈的研究，在一些方面已取得了突破性的进展。姜永厚等 [19] 利用国内陈洪岩等 [20] 首次克隆得到的 IL-2 与新城疫弱毒 D26 株的 F 基因，经载体构建，将两者以非融合蛋白形式共同克隆于真核表达质粒 pcDNA 上，成功构建了表达鸡 IL-2 与新城疫 F 蛋白的重组质粒 (pcDNA-F-IL-2) 。用此重组质粒免疫鸡，其表达 IL-2 可提高新城疫 DNA 疫苗的效力等 [21] 。 5.2 IL-18 IL-18 又称为 IFN- γ诱导因子 (IFN- γ -inducing factor,IGIF) ，是新近发现的一种新型细胞因子，具有复杂的生物学功能，是细胞因子网络中的重要成员。其生物学活性与 IL-2 相似，具有诱导 T 细胞和 NK 细胞产生 IFN- γ，促进 T 细胞增殖，增强 Th1 细胞及 NK 细胞、 CTL 细胞的细胞毒活性等多种生物学功能。张春杰等 [22] 研究表明其作为免疫增强剂不但具有明显的增强 IBD 灭活疫苗诱导细胞免疫的作用，而且，对于中和抗体水平的提高， B 淋巴细胞增殖反应的加强也具有一定的作用，从而使疫苗的保护率从 86.7% 上升到 93.3% 。 6 结语大量试验结果证明，免疫增强剂与疫苗的联合应用是增强疫苗保护效率的一个有效途径，尤其是中药免疫增强剂、一些细胞因子在免疫增强中越来越发挥重要作用。随着分子免疫学等免疫学基础理论的飞速发展，特别是 T 细胞对抗原识别的分子基础和控制 T 细胞活化和功能专职应答的研究进展，使免疫增强剂的作用不再局限于增强免疫应答，而更着重于其诱导机体选择性地产生有效防御相应病原体感染的特异性的免疫应答，减少抗原物质的副作用。因此，寻找特性确定、高效、稳定、无毒的理想免疫增强剂是当前免疫学研究的重点之一，随着免疫增强剂的研究领域不断拓宽，新成员、新剂型不断发现，机理探讨不断深入，临床应用范围越来越广，相信随着研究的不断深入，免疫增强剂在动物的疫病防治中会起到越来越重要的作用。文章引自《动物医学进展》