关于自家苗的制作！请大家进来提一提意见。还希望各位大虾能教教我WSM要这么做！

消散了的魂 · 发表于 2008-2-16 00:15:24

很多时候，知道了要如何去做，却不知道这其中道理；是一件很痛苦的事情！现整理出来  其中还有很多不完整的。期望进来的人，能留下点真经！
                                 关于自家苗的制作

1取病料
   取患病新死亡，有典型症状并且是没有用抗生素治疗过的的仔猪，用解剖刀取肺脏、脾脏、淋巴结等诸多器官；不同的病采用的组织是有区别，各种病原对组织的嗜好是不一样的，蓝耳病病毒在肺部含量较多，而猪瘟病毒因其嗜内皮细胞的特性，使其在肾脏和免疫器官含量较多。如果把病猪所有内脏一起捣碎制苗，各种抗原都将被稀释，很难达到有效免疫的抗原量。
PS：本步骤的要点是1、病料要新鲜的，防止细菌毒素的产生。如果不能及时做，冻在-20度（尽量底温处）保存。2、病料要采集病变明显的，保证疫苗的效果。。
2制作
   将病料剁碎(除去结缔组织，筋膜，气管及较粗的支气管,但一定要取出肺门淋巴结)将采集的病料称重，加适量生理盐水，用消毒好的组织匀浆机，绞3-5min，致匀浆状，捣碎机高速运转,温度上升很快,夏天温度高时,容器中的病料很容易超过40 ℃,使蛋白质发生变性,破坏病原的免疫源性。故夏天制苗时,病料加入捣碎机中的生理盐水和用于水浴冷却病料的冷水,都应预先在冰箱中经过冷冻),装盆标记场名放入冰箱冻溶。对于新采取的病料反复冻溶三次。，过滤是将病料中有用的部份滤出，是一个关键环节。解冻的病料与生理盐水按1Kg：3500-4000ml的比例进行稀释调兑。再用双层无菌医用纱布过滤，然后将过了两层纱布的滤液过一次八层再过一次十二层纱布。
最后加入甲醛，以甲醛溶液为例,需氧细菌灭活需要的浓度为0.1%～0.2%,厌氧细菌灭活需要的浓度为0.4%～0.5%,病毒灭活需要的浓度为0.05%～0.4%,而且,猪瘟病毒用甲醛溶液灭活效果不理想。所以制作不同的疫苗,对灭活剂的种类和灭活剂的浓度要求是不一样的.使甲醛纯液在溶液中最终浓度达到0.3-0.4％，甲醛浓度不能高了。一小时摇均后，置37℃条件下灭活；灭活时间不能太短。灭活期间，每4—6小时摇动一次约半小时，48小时后灭活完毕，分装前按1500UI/ml比例加入双抗（青霉素和链霉素），还要加一定量的黄芪多糖，增加猪只抗体的生成。于灭活液中并摇匀，再移至分装间用虹吸法进行无菌分装。取出置于4℃下，保存待用。这样注射下去猪就不容易产生过敏反应 PS：本步骤主要在于无菌操作，和灭活完全。
3试验
   在投入使用前，对自制的自家组织苗，进行安全性和免疫效果的生物学试验。包括在添加完甲醛后灭活24H时分别进行小白鼠腹部注射2ml,观察24小时；和镜检细菌数量。在全场注射之前先用一两窝猪仔作一下试验，观察两天，看有没发生过敏、或注部位发生炎。如果没有什么反应，就可以全场铺开。
4使用
      大猪可以用3ml，小猪1.5ml，种公猪6ml，间隔两周免疫两次。幼猪出生4-7天首次免疫，过7天进行二免。母猪产前4 周注射4毫升/头。

   自家苗效果如何？重要的是发病的猪尽量杜绝用抗生素，目前所做的自家灭活苗也没有什么办法去测定其中的病原含量，所以是盲目的。跟所取的组织是不是典型病变部位，制作过程等有很大的关系。
   自家苗的效果在发病最厉害的时候所取病料制成的苗效果最好，自家苗用下去后，病情得到控制，没用了典型病变病变组织，所以效果会变差
细菌的结构更加复杂，产生抗原的蛋白质种类更多，自家苗效果不很稳定。
   自家苗本身就是灭活苗,无论细菌还是病毒都大多已经被杀死,因此,只要是经过严格的工艺,将病原体杀灭,自家苗就是基本安全的,即使起不到好的作用,也不会引发疾病。
   如果取病料的猪是几种病混合感染的,那用这病料制成的自家苗抗原的剂量符合要求基本上就可以能免疫这几种病！最好是选择细菌性疾病作苗，虽然细菌灭活，但细菌本身的抗原决定簇仍然存在；免疫后，会刺激机体产生相应的抗体，如果疫苗不起作用的话我们可以用药物去控制或消灭它！另外，对于有多种血清型的细菌，制备的自家苗相对效果还会比较好!病不很复杂,控制的好的猪场,按正规免疫到位,效果是最好的了!!!
      自家苗可以用,但是必须有条件的,就是猪场病非常的多,比较厉害的情况下来用,不要动辄就用自家苗,那样风险会很大.自家苗不是疾病的救命稻草！当心饮鸩止渴！
   通过培养细菌来做自家苗,可以克服不少弊端》》》》！！！！！！

[ 本帖最后由消散了的魂于 2008-2-16 17:18 编辑 ]

消散了的魂 · 发表于 2008-2-16 00:18:00

沙发先。。。。。。

提几个问题

1 ：通过培养细菌来做自家苗如何操作？区别在哪里？
2 ：关于纯甲醛浓度？我实际操作中是0.35%左右  却有人说4%？  点解！
3 ：关于灭活温度和灭活时间长度？有人说24小时就能灭活？点解！
4 ：关于双抗的药物能否换成啊奇酶素之类的，如果可以；有哪些能用，用量如何？点解！
5 ：关于镜检能使用几种方法；推荐用哪几种。用啥标准检验？
5 ：关于小白鼠活体实验的原理！
6 ：如何预估，只是预估病原含量？

期盼能得到大家的回复

            感谢每位到过这里的帅哥和美女



新年快乐

谢谢三楼的... ...我还有几点不明.
1.比如...能否多点资料?比如扩繁后灭活...这其中的操作过程! 点解
2.涉及到佐剂的问题!我以前的制作过程中确实没有添加!  不知道以后会不会!心里没底!
3.如果...细菌扩繁后后药物灭活呢?不是甲醛,这样的做法...到底在特色情况下可行不?
4.有人提出寻找临床症状疑似PCV3感染的病猪，猪舍猪喘气病疫苗，加重PCV2病变，该方法能从某种程度上帮助解决典型病料的问题。可行否?

[ 本帖最后由消散了的魂于 2008-2-16 14:52 编辑 ]

gaolao · 发表于 2008-2-16 10:11:25

1 ：通过培养细菌来做自家苗如何操作？区别在哪里？

一个是通过培养扩繁后灭活制作；一个是直接捣碎组织灭活制作；
2 ：关于纯甲醛浓度？我实际操作中是0.35%左右却有人说4%？点解！

我用到了0.45%，有的人还用到了0.6%。我想纯甲醛浓度的浓度对免疫效果应该起到关键性的作用；
请有实践经验的人解析？
3 ：关于灭活温度和灭活时间长度？有人说24小时就能灭活？点解！

我想灭活选择在37摄氏度是使细菌在其繁殖的温度下被充分的灭活，时间一般都是2-3天；
4 ：关于双抗的药物能否换成啊奇酶素之类的，如果可以；有哪些能用，用量如何？点解！

双抗的作用我觉得无非是对注射部位起到一定的消炎作用；添加量还没达到保健的剂量；
5 ：关于镜检能使用几种方法；推荐用哪几种。用啥标准检验？

我觉得用镜检的方法还不如用培养基培养的方法简便、使用、直观！
5 ：关于小白鼠活体实验的原理！

这个主要是看注射的应激大小及注射部位的吸收情况
6 ：如何预估，只是预估病原含量？

这个主要看你的病料是否典型！

楼主的制作一直没涉及到佐剂的问题？
楼主“如果取病料的猪是几种病混合感染的,那用这病料制成的自家苗抗原的剂量符合要求基本上就可以能免疫这几种病！”
每种病毒对灭活剂纯甲醛浓度的要求是不一样的，最好是病料的疾病相对单一典型！