小肽的检测技术

秋水伊人 · 发表于 2008-1-28 15:25:33

恩能生物科技集团技术服务资料-小肽检测方法
<检测原理及方法>
一、原理：利用三氯醋酸作蛋白质沉淀剂，将酶解蛋白粉中的蛋白质和肽链较长的肽沉淀，并将其中的短链小肽用酸溶解出来，经离心、过滤、消化、蒸馏，测定其蛋白质含量。本方法是参照中华人民共和国轻工行业标准大豆肽粉标准(QB/ T 2653 -2004)基础上修订而来。
二、试剂及仪器：
1）100ml烧杯；
2）10ml、25ml移液管；
3）干过滤装置；
4）半微量粗蛋白质测定试剂和装置；
5）15％三氯醋酸溶液（TCA溶液）；
6）4000 转/ 分钟的离心机。
三、方法：准确称取样品3克于100 ml烧杯中,加入15 %TCA (三氯乙酸) 溶液25 毫升,混合均匀,静置5 分钟。将溶液定量转移,在4000 转/ 分钟下离心10 分钟后,取全部上清液，用干的滤纸过滤，准确移取其滤液10ml于消化管中，按测定粗蛋质方法消化、定容（100 ml）、移取1 0ml消化液蒸馏，测定其粗蛋白质含量（半微量定氮法）。同时做空白试验。
四、结果：
小肽%（占干基）=｛（V-V0）×C（HCl）×6．25×0．014×2．5（25ml÷10ml）×10（100 ml÷10ml）｝÷m×100%
式中： V---样品消耗HCl的体积，ml；
V0---空白消耗HCl的体积，ml；
C（HCl）---盐酸的摩尔浓度，mol/l；
6．25×0．014---蛋白质转换系数。
m---称取样品质量，ｇ。
小肽%（占蛋白质）=小肽%（占干基）÷粗蛋白质%×100

重复性: A）、每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果； B）、允许绝对偏差为10%；
C）、以小肽占粗蛋白质的百分含量上报结果。