消化时间对总氮测定结果的影响

dazhui

消化时间对总氮测定结果的影响

俞玉忠，倪明敏，刘申歌

　　凯氏定氮法由于设备简单，操作方便，因此在生物医药、农业、食品等领域的检测中应用较广，经常用此法来推算样品中粗蛋白的含量。但凯氏定氮法对整个实验过程的控制要求较高，不同的实验人员往往会得到不同的检测结果，误差较大。消化时间不一样，结果也会有较大差异，我们在这方面作了初步探讨，现将结果报道如下。

1 原理

　　硫酸与蛋白质类有机物共热消化，在催化剂作用下，能使该有机物分解，其中C,H 以CO:和H2O的形式逸出，而N则转化成(NH4)2SO4留在溶液中，再在强碱作用下加热蒸馏，NH3被硼酸吸收为(NH4)2B407，然后用标准稀硫酸溶液滴定，根据滴定液的浓度及消耗量即可计算出样品中的总氮含量。

2 材料和方法

2.1 样品脑蛋白水解物注射液，广东省药物研究所制药厂生产，批号为20021157, 2.2 试剂硫酸钾，广东汕头市西陇化工厂，批号为0212151;硫酸铜，广东汕头市西陇化工厂，批号为

0106061;氢氧化钠，杭州化学试剂有限公司.批号为20031024;硼酸，余杭市高晶精细化工有限公司，批号为20020410。以上试剂均为分析纯。

2.3 总氮的测定

2.3.1
消化准确量取0.25 ml，脑蛋白水解物注射液置于50m1,凯氏烧瓶中，然后加人硫酸钾。0.3g及30%硫酸铜溶液5滴，再加入浓硫酸2ml.及玻璃珠1粒，在烧瓶口上放一小漏斗后以450角斜置于电炉上，缓缓加热，同时做12个样品。待泡沸停止后逐步加大火力，当溶液沸腾至澄明的绿色后开始计时，根据试验要求，分别继续加热10min,20 min,40 min,80min，每个时间段各做3个样，同样分别做空白对照样品1个。

2. 3. 2
蒸馏消化好的样品放冷后，加水2mL，然后全部移人凯氏定氮仪中的蒸馏瓶内，加40% 氢氧化钠溶液lOm I.，加热蒸馏，在冷凝管处用lOm L2%硼酸溶液吸收。

2. 3. 3
滴定硼酸吸收液用0. 005mo1·L-1‘的硫酸滴定液进行滴定，根据滴定液的用量及浓度计算样品中的总氮含量。

3 结果和分析

从结果可以看出，加热20min与加热10mi的总氮结果之间的差异不显著，但40min与20min

之间及40min与80min之间的结果都有极显著的差异，而且样品加热40min后检测的总氮值为最高。

4 讨论

　　从试验结果看，用凯氏定氮法测脑蛋白水解物注射液的总氮时，最佳消化时间应为溶液变澄明绿色后继续加热40min左右，这跟药典中推荐的溶液变澄明绿色后继续加热l0min有差异。

　　用凯氏定氮法检测其他样品总氮时，同样要控制好消化时间，时间过短，则样品未完全消化，致使结果偏低;时间过长，结果也会偏低，这可能是因为小部分氮随水蒸汽一起逸出引起的。

dazhui

助您省心、省事、省时、省钱！测蛋白消化1小时

wgf818283

澄明的绿色怎么判定,里边一点黑点都没有开始算起吗

waterer

应该是没有黑点，很透明的绿色．

dazhui

因为消化时间对测量准确度影响大,所以要考虑催化剂的成分\消化时间,需要摸索条件.本人推荐使用催化剂片，比较方便，催化剂添加量准确

微尘

催化剂片
foss催化剂片好像1元一片

微尘

对于高蛋白原料可以考虑多消化点时间比如：鱼粉、玉米蛋白粉

AQ

好好学习！！楼主辛苦了。

dazhui

凯氏定氮法测定蛋白含量,是一种标准方法,消化过程是比较关键的,国家标准对消化的描述并不多,但对催化剂的选择做了明确规定(量和种类).我就研究催化剂的一些体会与大家分享.
      1、催化剂基本上都是K2SO4/CuSO4的配方。每种成分的作用大家都明白，但需要各位根据自己实际情况选择添加量和配比。如果硫酸钾太多，导致温度过高，也会导致结晶，结果偏低；硫酸铜过多，铜容易形成络合物，导致结果偏低。
      2、催化剂的添加量，一定不要图省事而不称量。这样回导致系统误差，来自于反应温度、催化的快慢。
      3、消化时间。过短与过长均会带来误差，这要求使用催化性能好的催化剂，有利于快速地催化完成，每个样品同时消化完成。就好象一辆夏利、一辆奔驰，要求同时加速跑完一定距离，奔驰还不先要休息，否则肯定跑过了线，夏历找不到了。
     4、条件的摸索很重要。特别是使用一种催化剂片，可以带去很多方便，能解决以上问题，价格可能在0.5元/片。
     希望大家一起来交流，切实提高畜牧业的检测水平。

dazhui

约5-6毛一片