快速估测尿酶活性法

chengcai790602

    目的：在有指示剂酚红存在的条件下，豆粕（饼）中的尿素酶活性可按尿素转变成氨的方法定性测定。

方法一：
仪器及试剂
1.培养皿
2.稀硫酸（H2SO4）0.2N或更稀些，带滴管。
3.尿素——酚红试剂。
      将1.2克酚红溶解于30ml0.2N的NaOH中，用蒸馏水将之稀释至约300ml，加入90g尿素并溶解之，用蒸馏水稀释至2l，加入14ml 1.0N的H2SO4或70ml o.2N的H2SO4，用蒸馏水稀释至最后体积3l，溶液应具明亮的琥珀色。
    测定步骤
1.在一个150ml的烧杯中倒入少量试剂，注意溶液必须呈明亮的琥珀色。若溶液已转变为深桔红色，滴人稀硫酸深液并搅拌之，直至溶液再度呈境拍色。
2.量一场匙粉碎很好的豆饼粉，放置于培养皿中。
3.在样品上加入两场匙试剂，轻轻搅拌，将样品平铺于培养皿中。若仍有干豆饼斑点，则再加入试剂，直至将豆饼浸湿。
4.放置5分钟后观察：
a.没有任何红点出现：再任其放置25分钟，若仍无红点出现，说明豆饼过熟。
b.少量红点：少量尿素酶活性，豆饼可用。
c.豆饼表面约有25％为红点覆盖：少量尿素酶活性；豆饼可用。
d.豆饼表面约有50％为红点覆盖：有尿素酶活性。
e.豆饼表面的75％－100％为红点覆盖：尿素酶活性很高，不应接受这种原料，因为豆饼过生。

方法二：
仪器与试剂
1.粉碎装置（不强烈发热）
2.天平：感量1%
3.试管：直径18mm，长180mm
4.尿素：分析纯
5.酚红：分析纯 0.1%乙醇（20%）溶液
测定步骤
将所测试样研细，称去0.02g，转移到试管中，加入0.02g结晶尿素及两滴酚红指示剂，加之20——30ml蒸馏水，摇动10s。观察溶液颜色，并记录呈粉红色时间。
尿酶活性结果表示：
1min内呈粉红色为——活性很强
1~5min内呈粉红色为——活性强
5~15min内呈粉红色为——有点活性
15~30min内呈粉红色为——没有活性
一般在10min以上不显粉红色，尿酶活性合格，30min以上不变色说明加热过度；10min内显粉红色说明加热不足，1min内呈粉红色说明过生。
                                               

[ 本帖最后由 chengcai790602 于 2007-6-24 18:43 编辑 ]

长江之水

这两个方法都很实用。;1s:

红色心情

我们现在用的是第二种方法，感觉还行　

chengcai790602

这些方法只能粗略判定生熟度，一般饲料行业用比较简单、实惠，在科研单位就无法用了哦！:deng:

cdliuq

我们也用第二种方法

cendy

两种方法都有用过，不过还是第二种好判断，试剂也容易配点