板蓝根多糖的提取及含量测定

魁罡

板蓝根（Indigowoad root）为十字科植物菘蓝的根。菘蓝是二年生草本，植株高50～100cm,花期4～5月，果期5～6月。我国许多地区都有分分，主产于河北安国，江苏如皋、南通等地，各地亦有栽培。板蓝根呈圆柱形，稍扭曲，长10～20cm，直径0.5～1cm，气微，味微甜后苦涩。板蓝根含靛蓝，多种氨基酸，另含有12%氯基酸的蛋白多糖。板蓝根有抑菌作用，对实体瘤有一定治疗作用。板蓝根多糖25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg腹腔注射可明显增强小鼠对二硝基氯苯的迟发型变态反应，诱导体内淋巴细胞转化和增强脾细胞的自然杀伤活性，腹腔注射板蓝根多糖50mg/kg，可显著促进小鼠免疫功能，增强抗体形成细胞功能，增加小鼠静注碳廓清速率。    本实验对板蓝用石油醚、乙醚除去脂溶性杂质，用80%乙醇提取除去所含单糖、低聚糖及苷类等干扰性成分后，再用水提醇沉法制得板蓝根粗多糖，并采用酚-硫酸比色法对其多糖含量进行测定。
1 仪器、试剂及样品
UV-2401 PC紫外分光光度计（日本岛津），索氏提取器。
葡萄糖（105°C干燥恒重），苯酚（AR），硫酸（AR）。
板蓝根：采自本校药园，秋季挖根，洗净晾干，破碎后备用。
2 标准曲线的绘制
2.1 标准葡萄糖溶液的配制
    精密称取干燥恒重的葡萄糖25.2mg，加适量水溶解，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成浓度为100.8ug/ml标准葡萄糖溶液备用。
2.2 5%苯酚试剂的配制
    取苯酚100g，加铝片0.1g和NaHCO30.05g,蒸馏，收集182。C馏份，称取7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。
2.3 标准曲线绘制
    精确量取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥试管中，分别加水使成1.0ml，再分别加入5%苯酚溶液1.6ml，摇匀，然后加H2SO4 7.0ml，充分摇匀，室温放置25min，在400～600nm处测定其最大吸光度，同时做一空白。结果见表1

表1不同浓度葡萄糖的吸光度

葡萄糖标准液(ml)	0.0	0.1	0.2	0.3	0.4	0.5	0.6	0.7
浓度(ug/ml)	0.00	1.05	2.10	3.15	4.20	5.25	6.30	7.35
吸光度值A	0.000	0.0735	0.1458	0.2235	0.2945	0.3798	0.4420	0.4973

3 多糖的提取及精制
    取板蓝根洗净，晾干，精密称取100g，置索氏提取器中，依次用石油醚（60～90°C）、乙醚和80%乙醇回流提取4h。残渣用乙醚、无水乙醇反复洗涤，得板蓝根多糖。60°C烘干备用。
4 换算因素测定
精确称取60°C干燥恒重的板蓝根多糖20mg，水溶解后定容到100ml量瓶中，摇均，作为多糖储备液。
精确量取多糖储备液0.2ml，加水至1ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素。
       f=W/CD
式中：W为多糖重量(ug)，C为多糖液中葡萄糖的重量(ug)，D为多糖的稀释倍数。测得f=4.7829。
5样品测定
    精确分别称取板蓝根粉未0.2g、0.201g、0.203g，用80%乙醇回流2h，残渣挥去溶剂后，继续用水回流2h，反复洗至250ml量瓶中，定容，摇匀成为样品液。测定时，精确吸取样品液1ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按下式计算多糖含量：
        多糖含量%=CDf/W*100%
式中：C为样品溶液的葡萄糖的重量(ug),D为样品溶液的稀释倍数，f为换算因素，W为样品的重量(ug)，测得平均结果为0.8099%=0.28%(n=3)
6 回收率测定
    精密称取板蓝根粉未0.15g，精密加入板蓝根多糖7mg，再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h，残渣挥去溶剂后，连续用水回流2h，反复洗至250ml量瓶中定容。摇匀后，清确移取1ml，按测定标准曲线进行提取和测定。计算多糖含量，平均回收率为98.74%,RSD=1.86%(n=5)。
7 讨论
    多糖广泛存在于自然界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性，是理想的免疫增强剂，它能提高机体免疫系统的功能，不仅能促进T细胞、B细胞、NK细胞、M细胞等免疫细胞的功能，还能促进白间素、干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子的产生。目前对多糖的研究方兴未艾，多糖的作用机理以及生物功能与结构的关系的研究不断深入，而且不断有新的多糖物质被发现。我们从板蓝根中提取出板蓝根多糖，并对其含量进行了测定。研究表明，板蓝根多糖含量不是很高，提取方法有待进一步改进。板蓝根多糖的结构组成和生理活性也有待进一步研究。

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目前多糖的研究还是比较热的，可惜质量标准制定上还有问题，现有的标准至少无法区别提取的活性多糖和葡萄糖的区别。中药还有很长的路要走，好多东西没有标准限制了其发展，按照新药太难。最简单就是微粉，效果上来了可惜不符合国家要求了只能去报新药，报新药就代价大了，需要反思。