猪的细菌性疾病-分子生物学引物设计思路

cym19790520

基于细菌16、23SrDNA的基因检测法
    不论是细菌的16SrDNA，还是23S rDNA均由保守区和可变区构成。不同菌种间保守区序列差异较小，但可变区序列则随菌间的亲缘关系不同而有一定的差异，人们利用这一特性设计引物进行菌种鉴别。基因检测的基本原理为：提取DNA→PCR扩增→纯化扩增产物→凝胶电泳对产物进行检测→测序循环→纯化测序产物→序列数据分析。针对l6、23SrRNA基因的保守性和特异性特点，检测可采用以下几种方式：①两种引物设计在保守区，成为通用引物，而在中间的特异区中选择序列作探针。先用通用引物作PCR快扩增，可筛选出含有病原菌的标本。扩增产物再与种或属特异性探针杂交，对靶细菌作出鉴定，可以达到诊断的目的。②两条引物设计在保守区，在中间的特异区中，选择一条或两条特异性引物作套式或半套式PCR，然后用限制性内切酶进行酶切，结果产生了不同的酶切图谱。该方法可较好地对临床标本中的感染菌进行鉴定，其敏感度可达到检测l0个大肠埃希菌或250个金黄色葡萄球菌的水平。③将一对引物中的一条设在特异区，而另一条设在细菌的高度保守区，检测某一种属的病原菌，运用这一方法检测粪便中的艰难梭菌，可比培养法迅速得到准确的结果，可在l06个大肠埃希菌的背景下检出l0个艰难梭菌，说明该方法具有很高的特异性。另外，也可直接在16SrRNA特异区中设计引物检测各种特定病原菌，该方法应用较为广泛，如检测支气管灌洗液中的军团菌、皮肤活组织中检测麻风杆菌、痰和咽拭子中检测肺炎支原体等。

小人物

呵呵，不错，只是引物设计在猪场不实用，有些太深奥了，大多数人只是想知道这东西有什么用？怎么用？结果怎么解释？ 再说现场还没有几个猪场能够使用PCR来检测，过几年也许会有的。:L

全会好

猪场使用PCR检测,引物可以购买,设计有多难呀.