九鼎集团养猪服务中心诊断实验室简介

湖南九鼎

湖南九鼎科技（集团）有限公司 陈建华0-8719310
邮编：414000

    九鼎集团养猪服务中心诊断实验室于2010年5月正式成立，这是九鼎企业向服务型公司转变的又一重大举措。为便于更好地为养猪客户服务，让客户对猪病诊断实验室工作的内容与作用有所了解，现特作如下介绍：

    猪病诊断实验室总投资200多万元，拥有当前较先进的仪器与设备，采用国家认可的美国IDXX公司进口的标准试剂盒。实验室现有员工四名，其中硕士研究生一名，大学本科三名，且都具有多年的猪场实践工作经验，不仅能为客户猪场准确检测各项数据，还能根据检测结果分析指导，为客户猪场提供切实可行的猪场问题解决方案。猪病诊断实验室工作不仅有集团服务专家团队作后盾，还有遍布各营销省区的二十多位市场服务经理作先锋，可深入所需客户猪场现场指导，为客户真正解决生产实际中遇到的各种难题。

   实验室开展的主要项目有：

   1、三大主要病毒性疾病的抗体水平检测；

   2、常见致病性细菌的分离培养及药物敏感试验；

   3、饲料、原料的霉菌毒素检测及常规生化指标检测。

一、抗体水平的检测原理及结果判断方法

   猪病诊断实验室主要针对猪瘟、蓝耳、伪狂犬三大重要的病毒性疾病的抗体水平检测。

1、猪瘟（CSFV）抗体水平检测

①、原理：阻断ELISA，用CSFV抗原包被微量反应板，如果被检样品中存在CSFV Ab,就会阻断HRPO-抗CSFV单克隆抗体与抗原包被板的反应。抗CSFV单克隆抗体与抗原的结合可以通过HRPO酶与底物的显色程度来判定。酶标仪记录在450nm处各样本OD值。

②、结果判定：

阴性对照平均值＞0.50，阳性对照阻断率＞50%，该检测结果才有效。阻断率blocking%=(阴性对照平均值-样本OD值)/阴性对照平均值×100%。

样本阻断率≥40%判定为阳性；

样本阻断率≤30%判定为阴性；

样本阻断率在30%-40%之间判定为可疑，就应该在数日后采血重测。

阻断率≥50%代表免疫合格，良种场要求CSFV Ab 阳性率100%，合格率90%。样本离散度种用猪CV要求＜20，肉猪＜25。

③、猪瘟疫苗种猪正常免3次后抗体水平范围（参考）：

疫苗种类
阻断率范围

普通细胞苗


45-75

高效细胞苗/组织苗

55-95

脾淋苗

65-100

结合实际免疫所用疫苗种类，样本平均值要求在参考范围内，高于参考值提示已经感染猪瘟，低于参考值提示该种疫苗免疫效果不好。

2、猪蓝耳病毒（PRRSV）抗体水平检测

    ①、原理：将重组的PRRSV抗原包被在微量反应板上，被检测样品在包被孔中孵育时，针对PRRSV的特异性抗体与之形成抗原抗体复合物，洗去未结合成分后，加入HRPO标二抗，与之前的抗原抗体复合物结合，洗去没有结合的酶标抗体，再加入酶底物和显色剂，颜色的深浅有存在的抗PRRSV特异性抗体的量决定。

    ②、结果判定：阳性对照平均值-阴性对照平均值≥0.150，阴性对照平均值≤0.150，试验才成立。S/P值=（样本OD值-阴性对照平均值）/（阳性对照平均值-阴性对照平均值）

S/P≥0.4该样本判定为阳性

S/P＜0.4该样本判定为阴性

③
、猪场PRRSV抗水平要求：

对免疫过PRRSV疫苗的感染群，通常有以下几种抗体模式：稳定种猪群S/P2.0左右，很少大于2.5；良好免疫群S/P0.7-1.8，有些可能大于2.0。

S/P大于2.5提示病毒血症；

S/P大于3.5提示急性感染。

    良好场要求抗体阳性率100%，S/P值在0.7-2.5的占90%。样本离散度CV越小越好，样本平均值要求1.2±0.4范围内。

3、猪伪狂犬（PRV-gB）抗体水平检测

    ①、原理：通过40倍稀释的样品在抗原包被的微孔板上进行。初次孵育时，存在于检测样品中的PRV抗体会与酶标板上的抗原结合。然后开始洗涤步骤，向微孔板中加入酶标记的抗PRV gB的单克隆抗体，进行第二次孵育，在此过程中其与抗原竞争结合。如果检测样品中不存在PRV gB抗体，酶标单抗就可以与抗原自由结合，相反，如果检测样品中存在PRV gB抗体，酶标单抗与抗原的结合就会被阻断。而在此次孵育过后，未结合的酶标单抗就会被冲洗掉，加入底物/显色剂溶液后，在酶的存在下，底物转变为一种能与显色剂反应产生蓝色的物质。使用分光光度计测量650nm的吸收值A(650)。

    ②、结果判定：S/N=样本OD值/阴性对照平均值

S/N＞0.70该样本被判定为阴性；

S/N≤0.60该样本被判定为阳性；

S/N介于0.60-0.70该样本判定为可疑，过一段时间后重新采血测。

③、良好场要求：

    在猪场应用伪狂犬基因工程缺失苗的前提下，测PRV-gB抗体水平可以评估疫苗的免疫效果，良好场要求抗体阳性率90%。

二、常见致病性细菌的分离培养及药物敏感试验

（一）、常用的几种细菌染色方法：

1、革兰氏染色法；2、瑞士染色法；3、吉姆萨染色法。

（二）、猪场常见的八种细菌：

1、猪丹毒；2、链球菌；3、巴氏杆菌；4、副猪嗜血杆菌；5、胸膜肺炎放线菌；

6、大肠杆菌；7、沙门氏菌；8、葡萄球菌。

（三）、细菌分离培养总体步骤：

1、试剂器材的准备；2、病料的采集；3、病料接种；4、细菌分离鉴定；5、动物致病性试验；6、药敏试验；7、菌种保存。

（四）、将分离纯化的致病菌做药物敏感试验：

1、猪场要做药敏试验的原因：(1）不同猪群感染的细菌不同；(2）同样的细菌对药物的敏感不同；(3）细菌间的耐药谱不同；(4）用药方法不科学；(5）用药时间和剂量不合理。

2、药物敏感试验的作用：体外试验研究猪群感染细菌对临床常用药物的敏感性，针对性给猪群使用最有效的药物以及剂量与联合用药，以提高疫病预防与治疗效果，减少药物浪费和细菌株的耐药谱的增加。

三、饲料原料的霉菌毒素检测以及饲料与水质的常规生化指标检测

    本项检测会与九鼎集团饲料检测中心化验室共同完成，便于客户采购合格的饲料原材料，采取相应的应对措施，指导客户应用合理的饲料营养配方。

    当前猪价看好，但流行的疾病错综复杂，生猪难养，开展实验室诊断，获取最佳的猪场问题解决方案非常必要，建议规模化猪场，重点大客户定期采样送养猪服务中心诊断实验室做常规健康检查与免疫监测，根据猪场规模的大小，采集相应的样品数，及时送检，九鼎集团将极力为客户排忧解难。

    九鼎集团各区域将以市场技术服务人员为中心，协同营销服务主管充分满足各类客户的需求，适时开展诊断室服务业务，体现九鼎的服务特色，创造更多的产品附加值。

monkeyb307

不錯
對產業提升有幫助
如何讓老闆肯花錢診斷又是一回事了

playboy

服务营销，支持九鼎