发酵豆粕各项指标检测方法与标准

　　1、水份、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、灰份、钙和磷的分析方法全部采用国标法。
　　2、总有机酸测定采用氢氧化钠滴定的方法和乳酸测定采用气象色谱。
　　3、pH的测定采用玻璃电极pHS-3C型pH计测定。
　　4、可溶蛋白的测定方法
　　5、小肽含量的测定

　　　　　　　　　　　水份的测定

　　水份测定直接参见国标
　　测定完水分后的样品需要测定其中的总有机酸的含量，其数值为A，并计算有机酸的挥发量。
水份含量的计算时应当扣除这部分有机酸的挥发量，否则会出现水分超标现象。

　　　　　　　　　　　总有机酸检测

　　试剂：NaOH标准溶液（邻苯二甲酸氢钾标定），酚酞指示剂
　　仪器:磁力搅拌器 离心机
　　方法：
　　（1）取发酵后鲜样品15g 置于150ml烧杯中加入溶于100ml去离子水，在磁力搅拌器上浸提30min。
　　（2）取部分浸提样离心10min(3000r/min)。
　　（3）取上清液15ml, 加30ml去离子水稀释（以消除底色的影响），加酚酞指示剂四滴，用0.1molNaOH标准溶液滴定，并记录到终点消耗NaOH体积。（终点到溶液呈现粉红）
　　计算
　　乳酸（％）＝N(NaOH)×V(NaOH) ×0.09008/15×115/15g
　　N(NaOH): NaOH标准溶液的浓度；
　　V(NaOH) ：消耗NaOH标准溶液体积；
　　0.09008：乳酸的毫克当量。
　　0.1mol氢氧化钠的配制与标定
　　1、配制　称取9.6g氢氧化钠，溶于100ml水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮。用塑料管虹吸5ml的上　清液，注入2000ml无二氧化碳水中(将去离子水煮沸5分后冷却)，摇匀。
　　2、标定
　　称取0.67g于105~110℃烘至恒重的基准的邻苯二甲酸氢钾，准确至0.0001g，溶于50ml的无二氧化碳水中，加4滴酚酞指示剂（0.1％），用配制好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉红色，同时作空白试验。
　　3、计算
　　氢氧化钠标准溶液的浓度按下式计算
　　c（NaOH）=m/（V1-V2）×0.2042
　　式中          c（NaOH）——氢氧化钠标准溶液之物质的量的浓度，mol/l；
                  V1——滴定用邻苯二甲酸氢钾之用量，ml；
                   V0——空白试验氢氧化钠溶液之用量，ml；
                   m——邻苯二甲氢钾之质量，g；
       0.2042——与1.00ml氢氧化钠标准液[c（NaOH）=1.000mol/l]相当的以克表示的邻苯二甲氢钾之用量。

　　0.1％酚酞指示剂的配制：称取1.000克酚酞，溶解与100ml95％的试剂酒精中，混匀即得。

　　　　　　　　　　　乳酸测定

　　称取样品10g与50ml的烧杯中，移取30ml去离子水，在磁力搅拌器上搅拌30min，在3000r/min离心10min，取上清液利用气相色谱或液相色谱测定乳酸含量。

　　　　　　　　　　　pH的测定

　　称取样品10g与50ml的烧杯中，移取15ml去离子水，搅拌30min，用 pHS-3C型pH计测定溶液的pH值。
　　或者用精密pH试纸测试。

　　　　　　　　　　可溶性蛋白的测定

　　根据AOCSBa11-65测定蛋白质溶解指数的方法
　　称取20g样品于300ml的匀浆杯中、量取50ml 37＋1℃的去离子水于匀浆杯中，将匀浆杯放在37℃的水浴中，浸泡搅拌5min，在内切式组织匀浆机上匀浆10min，从匀浆杯中取出浆液移入600ml烧杯中，待浆液分层后，移出40ml上清液注入50ml离心管中，并在2700r/min的转速下离心10min，移取15ml上清液于凯氏烧瓶中，测定上清液中蛋白质含量和样品总蛋白含量，计算溶解可溶性蛋白质的数量。

　　　　　　　　　　小肽含量测定方法

　　三氯乙酸（TCA）法
　　三氯乙酸法的原理是利用大分子的蛋白质在TCA溶液中沉淀，除去酸不溶蛋白质，然后测定酸溶蛋白含量。国外大量资料表明在蛋白质酶水解的研究中测定水解 度，通常在酶解液中加入TCA溶液，是为水解的大分子蛋白质沉淀，而与小分子的酸溶蛋白成分，即肽类和FAA离开，测定酸溶蛋白占总蛋白的含量，求得水解 度，即酸溶蛋白占总蛋白的百分比。