辅酶Q10 脂质体的制备及稳定性研究

    辅酶Q10（coenzyme Q10，CoQ10）广泛存在于线粒体内膜中，是细胞代谢的激活剂。临床上辅酶Q10 主要用于治疗心血管疾病 [1]，对其他多种疾病也有辅助疗效，目前有片剂、胶囊、软胶囊、注射剂等多种剂型。因辅酶Q10 极不溶于水，当前上市的辅酶Q10 注射剂稳定性较差，辅酶Q10 极易析出，有待于改进剂型。脂质体可增强药物的稳定性，且对缺血心肌、肝脏等组织具有被动靶向性。国内有辅酶Q10 脂质体质量评价的报道[2]，但较为笼统，作者制备了辅酶Q10 脂质体，较系统的研究了其稳定性，并采用新方法测定了辅酶Q10 脂质体包封率。 

　　1 仪器与药品 

　　1.1 仪器 

　　集热式恒温磁力搅拌器（浙江省乐成电器厂）；Lipex–Extruder 挤出仪（Northern 公司）；微孔滤膜（上海亚东分离器材厂）；HPLC 色谱仪（Waters 公司）；PHS–2C 型精密酸度计（上海雷磁仪器厂）；GAST 真空泵（MFG 公司）。 

　　1.2 药品 

　　辅酶Q10（沈阳济世制药公司）；注射用豆磷脂 (上海太伟药业)；胆固醇（天津博迪化工有限公司）；无水乙醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。 

　　2 方法与结果 

　　2.1 辅酶Q10 脂质体的制备 

　　2.1.1 乙醇注入法制备辅酶Q10 脂质体 

　　精密称取一定量的辅酶Q10 及一定质量比的磷脂和胆固醇，以2 mL 无水乙醇溶解，快速均匀注入到pH=7.0 的磷酸盐缓冲液10 mL 中，60 ℃下搅拌并减压蒸发除去乙醇，即得辅酶Q10 脂质体混悬液。 

　　2.1.2 挤出法分离游离药物 

　　参考文献[3]，将制得的脂质体混悬液在0.5 MPa、室温条件下过0.45 m 微孔滤膜，挤出3 遍。 

　　未包封的游离药物残留在膜上，通过膜的脂质体混悬液为脂质体成品。 

　　2.2 包封率及含药量测定 

　　辅酶Q10 脂质体成品经滤膜过滤分离后，本文作者采用高效液相检测方法对辅酶Q10 脂质体的包封率进行了测定。首先，将脂质体成品在0.5 MPa、室温条件下过0.22 　m 微孔滤膜。过膜前与过膜后脂质体混悬液中药物量分别为总药物含量和包封于脂质体中的药物量，将过膜前与过膜后的脂质体混悬液用流动相稀释相同倍数。然后，用HPLC 测定3 次，按E (%)=ρ2/ρ1×100%计算包封率。色谱条件为色谱柱：Kromasil ODS 柱（250 mm×4.6 mm，5 m，大连）；流动相：甲醇-无水乙醇（V:V=1:9）；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；紫外检测波长：275 nm；进样量：20 L；外标法。辅酶Q10 质量浓度在0~35 g·mL-1 内呈良好线性关系。 

　　辅酶Q10 脂质体成品的含药量按上述色谱条件同法测定3 次。经测定辅酶Q10 脂质体中平均药物含量为1.93±0.07 mg·mL-1，辅酶Q10 脂质体成品包封率为99.2%±0.8%。 

　　2.3 过氧化值的测定 

　　精密吸取脂质体1 mL，置10 mL 具塞离心试管中，加入TTH 试液（取三氯醋酸（TCA）30 g、硫　代巴比妥酸（TBA）0.75 g，加0.25 mol·L-1 的盐酸200 mL，温热至溶，放冷后过滤）5 mL，混匀密闭，置100 ℃水浴中加热30 min。放冷后再加TTH 试液4 mL，混匀后以4 000 r·min-1 离心10 min。取上清液，以TTH 试液为空白，测定532 nm 处的吸光度A，记作过氧化值[4]。 

　　2.4 外观色泽 

　　观察辅酶Q10 脂质体成品的外观及颜色变化。评定标准：淡黄色，不絮凝（――）；白色，不絮凝（＋－）；淡黄色，絮凝（＋－）；白色，絮凝（＋＋）。 

　　2.5 稳定性考察 

　　2.4.1 光照影响 

　　取适量辅酶Q10 脂质体成品，装于密封小瓶中，置1 000 Lx 条件下照射10 d，于第0、1、3、5、10 d 取样，考察药物含量、包封率、过氧化值、pH 值等项目（见表1）。结果表明，辅酶Q10 脂质体对光很不稳定，应避光保存。 

　　2.4.2 温度影响 

　　取适量辅酶Q10 脂质体成品，装于密封小瓶中，分别置于25、40、60 ℃水浴中，放置10 d，定时取样，考察稳定性（见表2~4）。结果表明，辅酶Q10 脂质体在25℃和40℃的条件下比较稳定，在60℃下较不稳定。 

　　3 讨论 

　　辅酶Q10 原料药遇光易分解，较不稳定，在光照条件下药物含量下降明显。实验过程中应尽量避光操作。制得的辅酶Q10 脂质体在光照条件下也很不稳定，应避光保存。磷脂中含有不饱和脂肪酸链，容易被氧化和水解。磷脂水解产物最主要的是脂肪酸，可使溶液pH 值下降。但稳定性考察中pH 值变化不大，可能是由于制剂中磷脂浓度较低，而且磷酸盐缓冲液的存在，使pH 变化不明显。磷脂的降解产物主要是过氧化物、丙二醛等，其中丙二醛能与硫代巴比妥酸反应生成一种红色物质，在532 nm 处有最大吸收，可根据吸光度的大小来反应磷脂的氧化程度。由于丙二醛不稳定，在高温和强光条件下会进一步分解，因此在稳定性加速实验中脂质体混悬液的过氧化值出现了先增加后降低的现象。随着温度的升高，辅酶Q10 脂质体的稳定性有所下降，因此制剂应在常温或低温下保存。制备的辅酶Q10 脂质体工艺简单、质量可控，在室温和避光条件下，可长期放置，性质稳定。