公猪站精液质量好坏直接与猪场情期受胎率、产仔数相关,所以再怎么强调公猪精液的重要性都不为过。那么公猪站标准化操作究竟应该如何做?温氏集团这方面的操作规范可以给我们启示。 一、目的 规范公猪站按照严格的操作规程进行精液生产,减少次品精液的发生率,确保人工授精所用精液的质量得到保证。 二、范围 适用于各公猪站与猪场实验室。 [attach]213002[/attach] 三、职责 1、 采精员负责采精公猪的调教和采精工作。 2、 有公猪站的实验室负责公猪站所在猪场所有公猪的精液品质检查;各猪场实验室负责生产线公猪的精液品质检查。 3、 实验室操作人员负责配制稀释液和精液的稀释工作。 4、 公猪站实验室负责精液的分装与保存; 5、 精液车司机负责精液的运输; 6、 各猪场实验室负责精液到场后的贮存。 四、工作程序 (一)采精公猪的调教 1、 后备公猪在7.5月龄开始采精调教。先调教性欲旺盛的公猪,下一头隔栏观察、学习。 2、 挤出包皮积尿,清洗公猪的后腹部及包皮部,按摩公猪的包皮部。 3、 诱发爬跨:用发情母猪的尿或阴道分泌物涂在假母猪上,同时模仿母猪叫声,也可以用其他公猪的尿或口水涂在假母猪上,目的都是诱发公猪的爬跨欲。 4、 上述方法都不奏效时,可赶来一头发情母猪,让公猪空爬几次,在公猪很兴奋时赶走发情母猪,万不得已时采取强制将公猪抬上假台畜的方法。 5、 公猪爬上假母猪后即可进行采精。 6、 对于难调教的公猪,可实行多次短暂训练,每周4~5次,每次15~20分钟,调教成功以后,每天采一次,连采3次,如果公猪的性欲很好,调教以后7天采一次;公猪性欲一般,则调教成功后2-3天采一次,连采3次。如果公猪表现任何厌烦、受挫或失去兴趣,应该立即停止调教训练。 7、 注意:在公猪很兴奋时,要注意公猪和采精员自己的安全,采精栏必须设有安全角。无论哪种调教方法,公猪爬跨后一定要进行采精,不然,公猪很容易对爬跨假母猪失去兴趣。调教时,不能让两头或以上公猪同时在一起,以免引起公猪打架等,影响调教的进行和造成不必要的经济损失。
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(二)采精 1、 采精杯的制备:先在保温杯内衬一只一次性食品袋,再在杯口覆一层过滤纸,用橡皮筋固定,要松一些,使其能沉入2cm左右。制好后放在37°C恒温箱备用。为了保证采精杯内的实际温度,采精杯盖与杯分开放在恒温箱内。 2、 在采精之前先剪去公猪包皮上的被毛,防止干扰采精及细菌污染。 3、 将待采精公猪赶至采精栏,挤出包皮积尿,用0.1%KMnO4溶液清洗腹部及包皮部。 4、 用清水洗净,抹干。按摩公猪的包皮部,待公猪爬上假母猪后,用温暖清洁的手(有无手套皆可)握紧伸出的龟头,顺公猪前冲时将阴茎的"S"状弯曲拉直,握紧阴茎螺旋部的第一和第二摺,在公猪前冲时允许阴茎自然伸展,不必强拉。充分伸展后,阴茎将停止推进,达到强直“锁定”状态,开始射精。射精过程中不要松手,否则压力减轻将导致射精中断。(注意在采精时不要碰阴茎体,否则阴茎将迅速缩回。) 5、 有乳白色浓份精液出现时开始收集,直至公猪射精完毕(阴茎变软)时才放手,注意在收集精液过程中防止包皮部液体或其他如雨水等进入采精杯。 6、 下班之前彻底清洗采精栏。 7、 采精频率:后备公猪调教合格后,采精间隔天数为7天;然后每3个月,对供精份数每次在平均份数以上的公猪的采精间隔减少1天,采精间隔天数最低不少于3天。 [attach]213004[/attach]
(三)精液品质检查 整个检查过程要迅速、准确,一般在5分钟内完成,以免时间过长影响精子的活力。精液质量检查的主要指标有:精液量、颜色、气味、精子密度、精子活力、畸形精子率等。检查结束后应立即填写《公猪精液品质检查记录表》,每头公猪应有完善的《公猪精检档案》。 1、 精液量:后备公猪的射精量一般为150~200毫升,成年公猪为200~600毫升,称重量算体积,1克计为1毫升。 2、 颜色:正常精液的颜色为乳白色或灰白色。如果精液颜色有异常,则说明精液不纯或公猪有生殖道病变,凡发现颜色有异常的精液,均应弃去不用。同时,对公猪进行检查,然后对症处理、治疗。 3、 气味:正常的公猪精液具有其特有的微腥味,无腐败恶臭气味。有特殊臭味的精液一般混有尿液或其它异物,一旦发现,不应留用。并检查采精时是否有失误,以便下次纠正做法。 4、 密度:指每毫升精液中含有的精子数,它是用来确定精液稀释倍数的重要依据。正常公猪的精子密度为2.0~3.0亿/毫升,有的高达5.0亿个精子/毫升。检查精子密度的方法常用以下两种: (1) 精子密度仪测量法:它极为方便,检查时间短,准确率高。若用国产分光光度计改装,也较为适用。该法有一缺点,就是会将精液中的异物按精子来计算,应予以重视。
[attach]213005[/attach] (2) 红细胞计数法:该法最准确,但速度慢,其具体操作步骤为: 用不同的微量取样器分别取具有代表性的原精100微升和3%的KCl溶液900微升,混匀。在计数板的计数室上放一盖玻片,取少量上述混合精液放入计数板槽中。在高倍显微下计数5个中方格内精子的总数,将该数乘以50万即得原精液的精子密度。 5、 精子活力 每次采精后及使用精液前,都要进行活力的检查,检查精子活力前必须使用37℃左右的保温板预热:一般先将载玻片放在38℃保温板上预热2至3分钟,再滴上1小滴精液,盖上盖玻片,然后在显微镜下进行观察。保存后的精液在精检时要先在玻片预热2分钟。 精子活力一般采用10级制,即在显微镜下观察一个视野内作直线运动的精子数,若有90%的精子呈直线运动则其活力为0.9;有80%呈直线运动,则活力为0.8;依次类推。新鲜精液的精子活力以高于0.7为正常,稀释后的精液;当活力低于0.6时,则弃去不用。 6、 畸形精子率 畸形精子包括巨型、短小、断尾、断头、顶体脱落、有原生质滴、大头、双头、双尾、折尾等精子。它们一般不能作直线运动,受精能力差,但不影响精子的密度。公猪的畸形精子率一般不能超过18%,否则应弃去。采精公猪要求每两周检查一次畸形率。 不合格公猪或精液的处理办法:公猪站发现不合格的精液一律作废,不得用于生产。 (四)精液稀释液的配制 常用稀释剂配方:
稀释液的配制的具体操作步骤为: 1、 所用药品要求选用分析纯,对含有结晶水的试剂按摩尔浓度进行换算。 2、 按稀释液配方,用称量纸和电子天平按1000ml和2000ml剂量准确称取所需药品,称好后装入密闭袋。 3、 使用1小时前将称好的稀释剂溶于定量的双蒸水中,用磁力搅拌器加速其溶解。 4、 如有杂质需要用滤纸过滤。 5、 稀释液配好后及时贴上标签,标明品名、配制时间和经手人等。 6、 放在水浴锅内进行预热,以备使用,水浴锅温度设置不能超过39℃。 7、 认真检查配好的稀释液,发现问题及时纠正。 (五)精液稀释 处理精液必须在恒温环境中进行,品质检查后的精液和稀释液都要在37℃恒温下预热,稀释处理时,严禁太阳光直射精液。稀释液应在采精前准备好,并预热好。精液采集后要尽快稀释,精子活力在0.7以下的精液不得用于稀释。稀释处理每一步结束时应及时登记《精液稀释记录》。 具体的稀释程序为: 1、 精液稀释头份的确定:人工授精的正常剂量一般为40亿个精子/头份,体积为80ml,假如有一份公猪的原精液,密度为2亿/ml,采精量为150ml,稀释后密度要求为40亿/80ml头份。则此公猪精液可稀释150×2/40=7.5头份,需加稀释液量为(80×7.50-150)ml=450ml。 2、 测量精液和稀释液的温度,调节稀释液的温度与精液一致(两者相差0.5℃以内)。注 意:必须以精液的温度为标准来调节稀释液的温度,不可逆操作。 3、 将精液移至2000ml大塑料杯中,稀释液沿杯壁缓缓加入精液中,轻轻搅匀或摇匀。 4、 如需高倍稀释,先进行1:1低倍稀释,1分钟后再将余下的稀释液缓慢分步加入。因精子需要一个适应过程,不能将稀释液直接倒入精液。 5、 精液稀释的每一步操作均要检查活力,稀释后要求静置片刻再作活力检查。活力下降必须查明原因并加以改进。 6、 混精的制作:两头或两头以上公猪的精液1:1稀释或完全稀释以后可以做混精。做混精之前需各倒一小部分混合起来,检查活力是否有下降,如有下降则不能做混精。把温度较高的精液倒入温度较低的精液内。每一步都需检查活力。 7、 用具的洗涤:精液稀释的成败,与所用仪器的清洁卫生有很大关系。所有使用过的烧杯、玻璃棒及温度计,都要及时用蒸馏水洗涤,并进行高温消毒,以保证稀释后的精液能适期保存和利用。 8、 精液的分装:稀释好的精液,检查其活力,前后一致便可以进行分装。稀释后的精液也可以采用大包装集中贮存。但要在包装上贴好标签,注明公猪的品种、耳号以及采精的日期和时间。
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(六)精液的分装 1、 精液瓶和输精管必须为对精子无毒害作用的塑料制品。 2、 稀释好精液后,先检查精子的活力,活力无明显下降则可进行分装。 3、 按每头份60-80ml进行分装。如果精液需要运输,应对瓶子进行排空,以减少运输中震荡。 4、 分装后的精液,将精液瓶加盖密封,贴上标签,清楚标明公猪站号、公猪品种、采精日期及精液编号。 (七)精液的保存 1、 需保存的精液应先在22℃左右室温下放置1~2小时后放入17℃(变动范围16~18℃)冰箱中,或用几层干毛巾包好直接放在17℃冰箱中。冰箱中必须放有灵敏温度计,随时检查其温度。分装精液放入冰箱时,不同品种精液应分开放置,以免拿错精液。精液应平放,可叠放。 2、 查看:从放入冰箱开始,每隔12小时,要小心摇匀精液一次(上下颠倒),防止精子沉淀聚集造成精子死亡。一般可在早上上班、下午下班时各摇匀一次,并做好摇匀时间和人员的记录。夜间超过12小时应安排夜班于凌晨摇匀一次。
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3、 冰箱应一直处于通电状态,尽量减少冰箱门的开关次数,防止频繁升降温对精子的打击。保存过程中,一定要随时观察冰箱内温度的变化,出现温度异常或停电,必须普查贮存精液的品质。 4、 精液一般可成功保存3~7天。 (八)精液的运输: 精液运输成败的关键在于保温和防震是否做得足够好。公猪站与猪场之间的精液运输采用专业的精液运输箱来运送,要求达到17±1℃恒温。 (九)运输后的贮存 1、 精液运输到各猪场以后的贮存方法:不同品种精液应分开放置,以免拿错精液。精液应平放,可叠放。 2、 从放入冰箱开始,每隔12小时要小心摇匀精液一次(上下颠倒几次),冰箱应一直处于通电状态,尽量减少冰箱门的开关次数。出现温度异常或停电,必须普查贮存精液的品质。 五、相关记录 公猪精液品质检查记录表
公猪耳号: 品种:
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