预混料中氯化胆碱测定:分光光度法

预混料中氯化胆碱的测定
分光光度法GB/T 17481－1998
1 范围
本标准规定了雷氏盐比色法测定复合预混料中氯化胆碱的方法。
本标准适用于复合预混料中氯化胆碱的测定。
2 引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T 6682－1992分析实验室用水规格和试验方法
3 方法原理
用甲醇－三氯甲烷混合溶剂提取试样中的氯化胆碱，将溶剂蒸干后用水溶解残渣，再在低温下加入雷氏盐生成氯化胆碱雷氏盐的结晶，过滤出结晶，用丙酮溶解，定容。将其丙酮溶液在波长525nm下进行分光光度测定。
4 试剂
本标准所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯。
实验室用水符合GB/T 6682中三级水的规格。
4.1 甲醇。
4.2 丙酮。
4.3 甲醇－三氯甲烷混合液（10+1）。
4.4 量取900mL甲醇和90mL三氯甲烷，混匀。
4.5 雷氏盐（二氨基四硫代氰酸铬铵）甲醇溶液｛［NH4Cr（NH3）2（SCN）4］为40g/L｝
4.6 称取4g雷氏盐溶于甲醇，加甲醇稀释至100mL，混匀，置冰箱内保存。
4.7 氯化胆碱标准溶液。
4.8 氯化胆碱标准储备溶液：精确称取氯化胆碱,10.0000g溶解于水，定量转入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此液1.00ｍL含0.10g氯化胆碱。
4.9 氯化胆碱标准工作溶液：临用时精确吸取氯化胆碱标准储备液（4.5.1）1.00mL于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀。此液1.00mL含氯化胆碱1.0mg。
5 仪器、设备
5.1 实验室常用仪器。
5.2 电动振荡器。
5.3 恒温水浴槽。
5.4 真空泵。
5.5 离心机：转速能达到3000r/min 。
5.6 分光光度计：有1.0cm比色皿，可在525nm下测定吸光度。
5.7 具塞锥形瓶：200mL。
5.8 高形烧杯：100mL。
5.9 抽滤瓶：250mL。
5.10 坩埚式过滤器：孔径4μm～7μm 。
6 试样制备
取具有代表性样品至少2kg，用四分法缩分至250g，粉碎至过0.42孔筛，混均，装入样品瓶内密闭，保存备用。
7 测定步骤
7.1 提取
精确称取试样约5g（含氯化胆碱约0.04 g～0.4g）于具塞锥形瓶中，精确移入甲醇－三氯甲烷混合液（4.3）100.00mL，加塞，在振荡器上振荡30min后，用慢速滤纸过滤，得试样提取液。
7.2 氯化胆碱雷氏的生成和溶出
精确吸取上述提取液（7.1）5.00mL～10.00mL于100mL高形烧杯中，在50℃水浴上蒸发至干，加水40mL使残渣溶解，再在冰浴中冷却到5℃以下，加3mL雷氏盐溶液（4.4），间断搅拌反应30min，得到氯化胆碱雷氏盐的结晶。
将生成的结晶转入坩埚式过滤器中真空抽滤，烧杯用水洗净，洗液一并抽滤。滤毕，结晶用3×5mL水洗，再用5×1mL甲醇洗，抽干，向过滤器中加入丙酮，使结晶溶解，转入50mL 容量瓶中，用丙酮洗净过滤器，洗液一并转入50mL容量瓶中，加丙酮至刻度，混匀，得试样溶液。
7.3 测定步骤
7.3.1 试样的测定
吸取5.0mL所得试样液（7.2）于10mL离心管中，离心5min，转速为3000r/min，取上层清液，以丙酮作参比，用1.0cm比色皿在525nm波长下，用分光光度计测定吸光度，在工作曲线上查得试样中氯化胆碱的含量。
7.3.2 工作曲线的绘制
精确吸取氯化胆碱标准工作液（4.5.2）5.00、10.00、15.00、20.00mL分别置于100mL高形烧杯中，加水40mL，以下按7.2中“再在冰浴中冷却到5℃以下”以后的操作及7.3.1试样的测定进行，测各标准工作液的吸光度，绘制工作曲线。
8 测定结果的计算及表示
8.1 测定结果按式（1）计算：
X＝m1V/mV1 ………………………………………………(1)
式中：
X ———每千克试样中氯化胆碱的含量，g ；
m1 ———标准曲线上查得测定时所取试样液中氯化胆碱的含量，mg ；
V ———试样提取液的总体积，mL；
m ———试样质量，g ；
V1———试样测定时吸取试样提取液的体积，mL。
所得结果表示到小数点后一位。




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